苑功名,劉興星,公一囡,王洋洋,楊靜雯,徐 媛,郭永明

(天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)研究中心,天津 301617)

在針灸實(shí)驗(yàn)研究中,小鼠是應(yīng)用較多的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,但其體型小,天性活躍,不易抓取和固定,使針灸操作面臨困難,一些實(shí)驗(yàn)采用氣體麻醉、注射麻醉等方法使小鼠處于安靜狀態(tài)后再進(jìn)行針灸操作。盡管這類方式能夠減少掙扎活動(dòng)對(duì)針灸效果的干擾,但麻醉藥物的使用會(huì)對(duì)小鼠生命活動(dòng)指標(biāo)以及針灸感傳效應(yīng)產(chǎn)生影響,繼而使得針灸機(jī)制的研究受到影響。 因此,能夠在小鼠清醒狀態(tài)下進(jìn)行針灸干預(yù)是針灸實(shí)驗(yàn)研究者首要解決的問(wèn)題。 然而在清醒狀態(tài)下,如果操作者固定不當(dāng)常會(huì)激惹小鼠,被其咬傷或抓傷;并且小鼠在固定過(guò)程中為了掙脫束縛,常常掙扎導(dǎo)致其受傷或死亡,造成樣本脫落,影響實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展。 布制鼠衣固定是針刺實(shí)驗(yàn)中常用的小鼠固定方法之一,本文將介紹一種在布制鼠衣基礎(chǔ)上進(jìn)行改良的小鼠后肢固定器,可將小鼠較長(zhǎng)時(shí)間固定且后肢不易脫出,從而提高實(shí)驗(yàn)操作安全性,保證實(shí)驗(yàn)干預(yù)效果。 該固定器可方便應(yīng)用于小鼠后肢部的針刺、電針、艾灸等干預(yù),以及足部注射、尾部取血、尾靜脈注射等操作。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)BALB/c 雄性小鼠,體重18~22 g,7周齡,共42 只,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[SCXK(京)2016-0011]。 飼養(yǎng)條件:12 h 光照周期,室溫23℃~ 25℃,濕度45% ~50%,可自由攝食飲水,動(dòng)物飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(津)2020-0005]。 實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(TCM-LAEC2019062),并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R 原則給予人道關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

固定器制作:50 mL 離心管、曲別針、剪刀、鋼鋸條、酒精燈、止血鉗、珍珠棉泡沫板、橡皮筋、砂紙;小鼠針刺:規(guī)格為0.16 mm×7 mm 的一次性無(wú)菌針灸針(北京中研太和醫(yī)療器械有限公司);碘伏、75%乙醇、透明膠帶;行為學(xué)評(píng)價(jià):足底熱痛測(cè)試儀(Ugo,37370);曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備、高架十字迷宮設(shè)備、動(dòng)物行為分析系統(tǒng)(上海吉量軟件科技有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 小鼠后肢固定器的制作與使用

(1)小鼠后肢固定器的制作

①呼吸孔:用鋼鋸條切掉離心管管底,做成直徑0.5~0.7 cm 的圓孔,供小鼠呼吸。

②管體:沿圖1 虛線,先用鋼鋸條在距離呼吸孔5 cm 處縱向切開(kāi),深度1.4 cm,再由管口水平橫切至此處。

圖1 呼吸孔及管體尺寸Figure 1 Size of breathing hole and tube

③后肢固定孔:將曲別針扳直,再參照?qǐng)D2 尺寸彎折成后肢固定孔的形狀(如圖3),止血鉗夾住曲別針,用酒精燈燒熱曲別針,在管體左右兩側(cè)相對(duì)應(yīng)的位置燙出固定孔。

圖2 后肢固定孔尺寸Figure 2 Size of fixing hole of hind limb

圖3 彎折曲別針制作后肢固定孔Figure 3 Bending paper clip to make fixing hole of hind limb

④珍珠棉泡沫墊:用剪刀按照3 cm×3 cm×1 cm的尺寸剪裁即成。

⑤用砂紙磨平因剪切形成的鋒利毛刺,以防固定器對(duì)小鼠造成皮膚破損。 小鼠后肢固定器各部分組件如圖4 所示。

圖4 小鼠后肢固定器實(shí)物圖Figure 4 Physical picture of the mice hind limb fixator

(2)小鼠后肢固定器的使用

操作時(shí)一人即可完成操作。 輕柔抓取小鼠尾部,借助小鼠喜好鉆洞探索的天性,將小鼠輕輕推入固定器管體。 一手拇指擋住小鼠尾部防止退出,另一手從后肢固定孔輕輕掏出小鼠后肢至自然伸展?fàn)顟B(tài)。 用泡沫墊擋在小鼠尾部,并用橡皮筋綁扎泡沫墊固定(如圖5)。 每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,清理糞便并用乙醇噴涂擦拭,祛除異味。

圖5 小鼠后肢固定器的使用Figure 5 Use of the mice hind limb fixator

1.3.2 小鼠的足三里穴位針刺

將小鼠仰臥位固定,選擇雙側(cè)足三里穴進(jìn)行針刺,足三里穴位定位:于小鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè),腓骨小頭下方約3 mm 處。 碘伏、75%乙醇對(duì)穴位局部常規(guī)消毒,使用規(guī)格為0.16 mm×7 mm 的一次性無(wú)菌針灸針,直刺進(jìn)針,深度約3 mm,注意避開(kāi)周圍血管和神經(jīng),留針時(shí)長(zhǎng)為30 min。 使用布制鼠衣或小鼠后肢固定器固定針刺如圖6、圖7 所示。

圖6 布制鼠衣固定小鼠針刺Figure 6 Fix and acupuncture with cloth mice clothing

圖7 小鼠后肢固定器固定小鼠針刺Figure 7 Fix and acupuncture with the mice hind limb fixator

1.3.3 小鼠行為學(xué)測(cè)試

(1)熱輻射痛閾檢測(cè)

采用足底熱痛測(cè)試儀對(duì)小鼠右側(cè)足底熱輻射痛閾進(jìn)行檢測(cè)。 以小鼠對(duì)紅外熱刺激的最大耐受時(shí)間即PWTL(paw withdrawal thermal latency, 熱刺激縮足潛伏期)作為熱輻射痛閾值。 每次測(cè)量前將小鼠放入熱輻射痛測(cè)試板格中適應(yīng)30~40 min 直至安靜,每只小鼠每隔5 min 測(cè)量1 次,取3 次測(cè)量的平均值。 對(duì)足底熱輻射痛閾檢測(cè)者實(shí)施盲法。

(2)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備由隔音箱(含視頻追蹤攝像頭、白燈、紅外燈)、組件、主控箱、畫(huà)面分割器、配套電腦組成。 隔音箱能營(yíng)造一個(gè)相對(duì)封閉的穩(wěn)定環(huán)境,減少實(shí)驗(yàn)人員對(duì)小鼠行為的干擾。 實(shí)驗(yàn)期間保持安靜,室溫23℃~25℃,濕度50%~60%,實(shí)驗(yàn)前需適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境1 h。 實(shí)驗(yàn)時(shí)先打開(kāi)視頻采集攝像頭,再將小鼠頭朝側(cè)壁迅速放入底部正中央?yún)^(qū)域,記錄小鼠的實(shí)時(shí)運(yùn)動(dòng)軌跡。 以小鼠觸碰任意側(cè)壁的時(shí)刻為起始點(diǎn),記錄5 min 內(nèi)的活動(dòng)軌跡。 每只小鼠完成實(shí)驗(yàn)后,需清理糞便并用乙醇噴涂擦拭,以防異味對(duì)后續(xù)小鼠造成影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后導(dǎo)出總路程、平均速度、中央?yún)^(qū)活動(dòng)路程、中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間作為結(jié)果指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

(3)高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)設(shè)備由開(kāi)放臂、閉合臂、視頻追蹤攝像頭、主控箱、配套電腦組成。 開(kāi)放臂、閉合臂尺寸為65 cm×5 cm,距地面高45 cm。 實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求同曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)時(shí)先打開(kāi)視頻追蹤攝像頭,再將小鼠頭朝開(kāi)放臂迅速放入正中央?yún)^(qū)域(所有小鼠均朝向同一開(kāi)放臂放入),以小鼠放入中央?yún)^(qū)的時(shí)刻為起始點(diǎn),記錄5 min 內(nèi)的活動(dòng)軌跡。 每只小鼠完成實(shí)驗(yàn)后,需清理糞便并用乙醇噴涂擦拭,以防異味對(duì)后續(xù)小鼠造成影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后導(dǎo)出進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)、進(jìn)入閉合臂次數(shù)、開(kāi)放臂停留時(shí)間、閉合臂停留時(shí)間,將進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)百分比(即進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)與進(jìn)入開(kāi)放臂、閉合臂總次數(shù)之比)、開(kāi)放臂停留時(shí)間百分比(即開(kāi)放臂停留時(shí)間與開(kāi)放臂、閉合臂停留總時(shí)間之比)作為結(jié)果指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件完成。 小鼠固定所需時(shí)間、后肢回縮次數(shù)、針具脫落次數(shù)采用t檢驗(yàn)比較差異;小鼠體重以及熱輻射痛閾采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析比較差異;曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)符合正態(tài)分布時(shí),采用單因素方差分析,不符合正態(tài)分布時(shí),使用非參數(shù)檢驗(yàn)。 以P<0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,以P<0.01 為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 小鼠后肢固定器與布制鼠衣的固定針刺應(yīng)用比較

考慮到針刺實(shí)驗(yàn)通常會(huì)實(shí)施多次干預(yù),因此選取同一批小鼠,將12 只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為布制鼠衣組和小鼠后肢固定器組,每組6 只;為排除單一實(shí)驗(yàn)員操作熟練度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,則招募4位實(shí)驗(yàn)員A、B、C、D 參與實(shí)驗(yàn);為避免同一天實(shí)驗(yàn)會(huì)對(duì)小鼠造成損傷繼而抗拒固定針刺影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,則安排這4 位不同的實(shí)驗(yàn)員分別在第1 天、第3天、第5 天、第7 天使用布制鼠衣或小鼠后肢固定器固定小鼠并針刺,共計(jì)4 次。 留針期間4 位實(shí)驗(yàn)員固定小鼠操作時(shí)間、小鼠后肢的回縮次數(shù)和針具脫落次數(shù)(每只小鼠后肢回縮或針具脫落1 次計(jì)為1,否則計(jì)為0)、每次固定針刺后的體重結(jié)果如下。

2.1.1 小鼠固定所需時(shí)間的比較

表1 結(jié)果顯示,與使用布制鼠衣相比,4 位實(shí)驗(yàn)員使用小鼠后肢固定器固定1 只小鼠的平均用時(shí)均更短(P<0.01)。 表明使用小鼠后肢固定器能顯著提高小鼠固定操作的效率。

表1 各實(shí)驗(yàn)員固定1 只小鼠的平均用時(shí)(±s,n=6)Table 1 Average time of each experimenter to fix a mouse

表1 各實(shí)驗(yàn)員固定1 只小鼠的平均用時(shí)(±s,n=6)Table 1 Average time of each experimenter to fix a mouse

注:與布制鼠衣組比較,??P<0.01。Note. Compared with the cloth mice clothing group, ??P<0.01.

組別Groups固定平均用時(shí)(s)Average time to fix A B C D布制鼠衣組Cloth mice clothing group 76.17±8.13 82.50±6.68 77.50±8.96 93.83±8.37小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 48.83±6.20?? 35.33±3.09?? 56.83±8.74?? 47.00±7.00??

2.1.2 后肢回縮次數(shù)

對(duì)兩組小鼠留針期間后肢出現(xiàn)回縮的次數(shù)進(jìn)行計(jì)次統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果如表2 所示,4 位實(shí)驗(yàn)員使用布制鼠衣或小鼠后肢固定器固定小鼠,其后肢回縮的平均次數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),但從4 位實(shí)驗(yàn)員各自的固定情況看,使用小鼠后肢固定器時(shí)后肢回縮次數(shù)相對(duì)較少,說(shuō)明該裝置對(duì)小鼠后肢的固定效果一定程度上優(yōu)于布制鼠衣。

表2 后肢回縮平均次數(shù)(±s,n=6)Table 2 Average number of hind limb retraction

表2 后肢回縮平均次數(shù)(±s,n=6)Table 2 Average number of hind limb retraction

組別Groups回縮平均次數(shù)(次)Average number of retraction A B C D布制鼠衣組Cloth mice clothing group 0.50±0.50 0.33±0.47 0.17±0.37 0.17±0.37小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 0.17±0.37 0.00±0.00 0.17±0.37 0.00±0.00

2.1.3 針具脫落次數(shù)

對(duì)兩組小鼠留針期間針具出現(xiàn)脫落的次數(shù)進(jìn)行計(jì)次統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果如表3 所示,4 位實(shí)驗(yàn)員使用兩種方法固定小鼠,其針具脫落的平均次數(shù)組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),而從4 位實(shí)驗(yàn)員各自針刺效果看,使用布制鼠衣固定小鼠,其掙脫時(shí)更容易導(dǎo)致針具脫落,而使用小鼠后肢固定器能減少針具的脫落次數(shù)。

表3 針具脫落平均次數(shù)(±s,n=6)Table 3 Average number of needle shedding

表3 針具脫落平均次數(shù)(±s,n=6)Table 3 Average number of needle shedding

組別Groups脫落平均次數(shù)(次)Average number of shedding A B C D布制鼠衣組Cloth mice clothing group 0.33±0.47 0.17±0.37 0.17±0.37 0.00±0.00小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 0.00±0.00 0.00±0.00 0.17±0.37 0.00±0.00

2.1.4 兩種固定針刺方法對(duì)體重的影響

表4 的體重結(jié)果顯示,兩組小鼠在實(shí)驗(yàn)前的基礎(chǔ)體重以及四次固定針刺后的體重?zé)o明顯差別(P>0.05),表明無(wú)論使用何種固定針刺方法,其對(duì)小鼠的體重均無(wú)明顯影響。

表4 對(duì)小鼠體重的影響(±s,n=6)Table 4 Effect of mice body weight

表4 對(duì)小鼠體重的影響(±s,n=6)Table 4 Effect of mice body weight

組別Groups小鼠體重(g)Mice body weight基礎(chǔ)體重Basic body weight第一次First time第二次Second time第三次Third time第四次Fourth time布制鼠衣組Cloth mice clothing group 21.00±0.52 21.40±0.23 20.92±0.51 21.10±0.78 21.07±0.57小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 21.08±0.27 21.18±0.49 20.82±0.42 20.62±0.82 20.80±0.75

2.2 不同固定方法對(duì)小鼠痛閾、認(rèn)知、情緒等影響的比較

在比較小鼠后肢固定器與布制鼠衣的使用情況基礎(chǔ)上,采用熱輻射痛閾檢測(cè)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)估不同固定方法對(duì)小鼠痛閾、認(rèn)知、情緒等指標(biāo)的影響。 將30 只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、布制鼠衣組和小鼠后肢固定器組,每組10 只;安排一位實(shí)驗(yàn)員分別在第1 天、第3天、第5 天、第7 天對(duì)小鼠進(jìn)行固定,共計(jì)4 次,每次時(shí)長(zhǎng)30 min;對(duì)照組正常飼養(yǎng)不固定,布制鼠衣組使用布制鼠衣固定,小鼠后肢固定器組使用小鼠后肢固定器固定。 于第一次固定前和每次固定后進(jìn)行熱輻射痛閾檢測(cè),于第四次固定后進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

2.2.1 不同固定方法對(duì)痛閾的影響

表5 的熱輻射痛閾結(jié)果顯示,三組小鼠的基礎(chǔ)熱輻射痛閾以及四次固定后的熱輻射痛閾無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),表明不同固定方法對(duì)小鼠痛閾的影響無(wú)明顯差別。

表5 對(duì)小鼠痛閾的影響(±s,n=10)Table 5 Effect of mice pain threshold

表5 對(duì)小鼠痛閾的影響(±s,n=10)Table 5 Effect of mice pain threshold

組別Groups小鼠熱輻射痛閾(s)PWTL of mice基礎(chǔ)熱輻射痛閾Basic PWTL第一次First time第二次Second time第三次Third time第四次Fourth time對(duì)照組Control group 12.92±1.08 11.91±1.15 12.38±0.69 12.58±0.49 12.56±0.58布制鼠衣組Cloth mice clothing group 13.00±0.91 12.66±0.70 12.09±1.13 12.91±0.86 12.62±0.93小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 12.86±0.98 12.23±0.83 12.86±0.56 12.13±0.99 12.54±0.52

2.2.2 不同固定方法對(duì)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)的影響

表6 的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三組小鼠5 min 內(nèi)的總路程、平均速度、中央?yún)^(qū)活動(dòng)路程、中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),表明不同固定方法對(duì)小鼠認(rèn)知、情緒的影響無(wú)明顯差別。

表6 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s,n=10)Table 6 Results of open field test

表6 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s,n=10)Table 6 Results of open field test

組別Groups總路程(cm)Total sport distance平均速度(cm/s)Average speed中央?yún)^(qū)活動(dòng)路程(cm)Sport distance in the central area中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間(s)Sport time in the central area對(duì)照組Control group 1976.53±545.22 6.59±1.82 95.43±86.00 5.68±4.59布制鼠衣組Cloth mice clothing group 1990.34±354.38 6.63±1.18 97.64±101.61 5.95±5.41小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 2026.23±323.69 6.75±1.08 90.81±124.63 4.42±5.43

2.2.3 不同固定方法對(duì)高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)的影響

表7 的高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三組小鼠5 min 內(nèi)進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)百分比、開(kāi)放臂停留時(shí)間百分比組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),表明不同固定方法對(duì)小鼠情緒的影響無(wú)明顯差別。

表7 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s,n=10)Table 7 Results of elevated cross maze test

表7 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s,n=10)Table 7 Results of elevated cross maze test

組別Groups進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)百分比(%)Percentage of open arm entry開(kāi)放臂停留時(shí)間百分比(%)Percentage of open arm time對(duì)照組Control group 44.93±22.38 45.73±30.21布制鼠衣組Cloth mice clothing group 58.95±21.78 55.51±30.78小鼠后肢固定器組Mice hind limb fixator group 44.68±24.50 48.17±29.93

3 討論

不同于針灸臨床試驗(yàn),針灸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蜻M(jìn)行原本在人體上無(wú)法實(shí)現(xiàn)的研究,為解開(kāi)針灸理論與技術(shù)的奧秘、解讀針灸作用原理及規(guī)律提供了更多可能[1]。 為了保證針灸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性和可信度,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物固定方法的選擇尤為重要。 文獻(xiàn)中用于小鼠固定的方法主要有手固定法、捆綁法、器具固定法三種[2],不論何種固定方法,其目的都是為了在實(shí)驗(yàn)操作中盡可能地減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與操作者雙方因素的疊加影響,因此固定方法應(yīng)該滿足以下要求:第一,減低應(yīng)激反應(yīng)。 固定方法會(huì)引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng),如緊張、恐懼等情緒,當(dāng)前多采用各組同等固定的方式來(lái)平衡組間的差異性,合適的固定方法一方面能減少應(yīng)激反應(yīng)的產(chǎn)生,減少動(dòng)物的痛苦,另一方面能夠盡量減少組間的差異[3-5]。 第二,保持合適的體位。 不同穴位的針灸操作對(duì)體位的選擇有一定的要求,正確的固定能較好控制動(dòng)物的體位,減少不必要的刺激,進(jìn)而保證個(gè)體間和組間針刺深度、針刺方向以及行針操作的一致性。 第三,有助于穴位選取。 只有正確的取穴才能準(zhǔn)確反映針效,針灸取穴是否精準(zhǔn)與固定方法直接相關(guān),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接受固定后,任何的掙扎、掙脫動(dòng)作都會(huì)導(dǎo)致腧穴定位出現(xiàn)偏差,影響針灸干預(yù)的療效[6]。 第四,保證安全。 針灸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必須注意實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和操作者的安全,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ椒ú粌H會(huì)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受傷甚至死亡,導(dǎo)致樣本脫落,而且如若造成動(dòng)物激惹,操作者會(huì)有被咬傷的風(fēng)險(xiǎn)[7]。 第五,固定方法的選擇要考慮實(shí)驗(yàn)成本、操作的簡(jiǎn)便性等因素,提高實(shí)驗(yàn)效率亦是選擇合適固定方法的目的之一。

本研究對(duì)常用的傳統(tǒng)的鼠衣固定法和新研制的小鼠固定器做了多方面比較,雖然二者對(duì)于小鼠的體重、認(rèn)知、痛閾都沒(méi)有影響,但相較于布制鼠衣固定,小鼠后肢固定器所用固定時(shí)間及針具脫落次數(shù)都有降低,除此之外,小鼠后肢固定器還有以下優(yōu)勢(shì):一是在小鼠固定期間,布制鼠衣無(wú)法判斷小鼠狀態(tài),而透明的小鼠后肢固定器能隨時(shí)觀察小鼠,一旦小鼠由于掙扎出現(xiàn)窒息危險(xiǎn),能及時(shí)進(jìn)行解救。 二是柔軟的布制鼠衣在固定小鼠時(shí)不易控制松緊度,太松小鼠容易掙脫,太緊則增加小鼠出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)的強(qiáng)度,小鼠后肢固定器則能統(tǒng)一控制固定的松緊程度,以達(dá)到平衡組間差異的作用。 三是布制鼠衣不易清潔,為減少殘留氣味對(duì)小鼠的影響,每次使用后需清洗晾干才能再次使用,而小鼠后肢固定器使用乙醇噴涂擦拭后即可。 四是實(shí)際應(yīng)用發(fā)現(xiàn),布制鼠衣固定時(shí)小鼠的撕咬使得鼠衣?lián)p耗較大,而小鼠后肢固定器制作材料易得,制作簡(jiǎn)單,損耗極少,從節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本的角度考量,小鼠后肢固定器更優(yōu)。

總之,實(shí)驗(yàn)結(jié)果和實(shí)際應(yīng)用表明,該小鼠后肢固定器制作簡(jiǎn)單,成本低廉,實(shí)用耐久,在提高實(shí)驗(yàn)安全性和效率方面優(yōu)勢(shì)明顯,可最大限度地減少固定本身對(duì)小鼠的干擾,減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,能夠?yàn)獒樉膶?shí)驗(yàn)研究提供便利,推薦使用。 然其尺寸、樣式并不唯一,使用者可根據(jù)不同研究的具體需求,如小鼠體重、取穴部位等進(jìn)行相應(yīng)的改良,以達(dá)到最佳的使用效果。