熊艷文 李夢(mèng)可 周平樂 周圓圓

上海市普陀區(qū)利群醫(yī)院,上海 200333)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病微小血管并發(fā)癥之一，其主要表現(xiàn)為進(jìn)行性蛋白尿和腎功能衰退，最終發(fā)展為終末期腎病[1]。隨著人們生活水平的提高和生活習(xí)慣的改變，有調(diào)查估計(jì)全球糖尿病患者的患病率由2000年的2.8%上升到到2030年的4.4%，人數(shù)也由2000年的1.71億上升到2030年的3.66億[2]。DN 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其中涉及糖代謝紊亂、腎臟血流動(dòng)力學(xué)改變，多種細(xì)胞因子及遺傳背景等。本實(shí)驗(yàn)采用單側(cè)腎臟結(jié)扎后STZ腹腔注射建立糖尿病腎病大鼠模型，觀察紅豆杉對(duì)DN大鼠血尿液生化指標(biāo)的影響，探討紅豆杉對(duì)DN腎功能的保護(hù)作用，以便為中醫(yī)藥防治糖尿病腎病提供更好的方法和實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料 選用SD大鼠雌性40只，體重(200±20)g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滬)2002--0001。適應(yīng)性平衡飼養(yǎng)1周后，用于試驗(yàn)。藥物與試劑為：紅豆杉購(gòu)自上海信德中藥公司飲片廠，由上海市普陀區(qū)利群醫(yī)院中藥房采用水煎法制成每毫升含生藥量0.1g的中藥濃縮液體。糖脈康顆粒(四川寶鑒堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)181002(120))，5g/袋；拜糖平片(拜耳醫(yī)藥保健公司，批號(hào)BJ44669)50 mg/片。鏈脲佐菌素(STZ)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，-20℃保存，臨用前用pH4.5 的檸檬酸緩沖液配制為1%的應(yīng)用液；尿蛋白(Urine protein,Upro)定量試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。戊巴比妥鈉購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司(進(jìn)口分裝)，臨用前用生理鹽水配成3%的濃度待用。

1.2方法

1.2.1糖尿病腎病模型制作 40只雌性SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食12 h，均腹腔注射3%的戊巴比妥鈉溶液45 mg/kg進(jìn)行麻醉。確認(rèn)麻醉后，隨機(jī)抽取8只作為假手術(shù)組。其余為模型組，行左側(cè)腎臟結(jié)扎術(shù)。術(shù)后第14天，各組大鼠禁食18 h后，大鼠一次性腹腔注射1%STZ溶液55 mg/kg。假手術(shù)組大鼠一次性注射同等劑量的檸檬酸緩沖液。STZ注射后第3天測(cè)血糖，計(jì)算尿量，測(cè)尿蛋白，并以非空腹血糖>16.6 mmol/L，尿量>原尿量150%，尿蛋白排泄>20 mg/24h為成模標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2分組與給藥 將40只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體重隨機(jī)分成五組，每組8只。分別為A組：假手術(shù)組；B組：模型對(duì)照組；C 組：拜糖平組；D組：糖脈康組；E組：紅豆杉組。STZ注射后第8天開始C、D和E組每日灌胃喂藥，C組將拜糖平研磨溶于生理鹽水中，按14 mg/ kg給藥，D組給予4.5g/kg糖脈康沖劑，E組給予3.25g/kg紅豆杉水煎劑，A組和B組大鼠每日給予同體積的飲用水。

1.2.3生化指標(biāo)檢測(cè)和標(biāo)本提取 (1)血糖：給各組大鼠灌胃治療之后，分別于灌胃后的第1周、3周、6周時(shí)尾靜脈采血，測(cè)定大鼠血糖。(2)尿液：第6周末，用代謝籠收集大鼠24 h尿液，在代謝籠收集大鼠尿液期間禁食不禁水，收集到大鼠尿液之后，記錄各組大鼠尿量，然后用低溫離心機(jī)3 000轉(zhuǎn)10 min低速離心，吸取上層尿液，將收集到的尿液測(cè)定大鼠24 h尿微量白蛋白(ELISA試劑盒測(cè)定，檢測(cè)嚴(yán)格按照說明書)。(3)血液：6周末，用3%異戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，用固定板固定大鼠，打開腹腔，分離腹主動(dòng)脈，用一次性注射器腹主動(dòng)脈取血，摘取兩腎，去除包膜，稱取右腎重量，所采血液經(jīng)低溫冷凍離心機(jī)3 000轉(zhuǎn)10 min低速離心，分離血清用于測(cè)定血肌酐Scr、血尿素氮BUN。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠6周后體重、腎重指數(shù)、24h尿微量白蛋白排泄率(UAER)情況 造模成功6周后，各模型組與正常組大鼠相比較，體重均明顯下降，腎重指數(shù)和24h微量白蛋白排泄率明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各模型組之間比較，治療組的體重均明顯高于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，治療組中紅豆杉組體重高于拜糖平組和糖脈康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組的腎重指數(shù)和UAER均低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療組中比較，紅豆杉組腎重指數(shù)和UAER低于其他二組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而其他二組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明紅豆杉能夠有效降低腎重指數(shù)、降低蛋白尿。見表1，圖1-3。

表1 6周末各組大鼠體重、腎重指數(shù)、24h尿微量白蛋白排泄率的比較

圖1 各組大鼠體重比較 圖2 各組大鼠腎重指數(shù)比較

圖3 各組大鼠24h尿微 圖4 各組大鼠血肌酐比較 量白蛋白排泄率比較

2.2各組大鼠6周后血尿素氮、血肌酐、血糖情況 造模成功6周后，各模型組與正常組大鼠相比較，血尿素氮、血肌酐、血糖均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型組中，模型對(duì)照組的各項(xiàng)指標(biāo)均明顯高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。拜糖平組與糖脈康組兩組組間比較各項(xiàng)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。紅豆杉組在血肌酐和血尿素氮指標(biāo)上均明顯低于拜糖平組和糖脈康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而在降低血糖指標(biāo)上與其他兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。故紅豆杉組能明顯降低血尿素氮、血肌酐，且效果優(yōu)于拜糖平組和糖脈康組。見表2，圖4-6。

表2 6周末大鼠血肌酐Scr、尿素氮BUN、血糖的比較

圖5 各組大鼠血尿素氮比較 圖6 各組大鼠血糖比較

3 討 論

糖尿病腎病屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的病名，在祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中并無(wú)明確的記載，而歷代醫(yī)學(xué)著作中 “消渴”“水腫”、“水病”、“脹滿”、“尿濁”、“關(guān)格”等病名與其甚為相似。其病因以稟賦不足、飲食失宜、情志失調(diào)、勞逸失度、失治誤治、六淫侵襲等為主。本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)夾雜為其主要病機(jī)[3]。

紅豆杉味甘、微苦，性平，入肺、胃、大腸經(jīng)，紅豆杉具有解毒散積、活絡(luò)止痛、利水消腫的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，紅豆杉具有降血糖、抗氧化和抗應(yīng)變性等多方面藥理作用[4]，而其中起主要降糖作用是紅杉醇。早期的研究表明：紅杉醇能顯著降低糖尿病模型高血糖、抑制肝糖原分解和葡萄糖吸收、降低血脂、改善自由基代謝和保護(hù)胰島β細(xì)胞，而對(duì)正常小鼠血糖沒有影響[5]。梁敬鈺等[6]報(bào)道：從紅豆衫等植物中提取的肌醇衍生物具有良好的降血糖作用，能顯著降低由四氧嘧啶誘發(fā)糖尿病小鼠的高血糖，能顯著降低腎上腺素誘發(fā)的高血糖，并使低下的肝糖原回升，能抑制葡萄糖的吸收，對(duì)葡萄糖引起的血糖升高有顯著的耐糖作用，能保護(hù)胰島細(xì)胞。

本實(shí)驗(yàn)雄性SD大鼠采用單側(cè)腎臟結(jié)扎后STZ腹腔注射(55 mg/kg)的方法制作糖尿病腎病模型，在造模成功后，模型組即出現(xiàn)多飲、多食、體重降低等癥狀，在實(shí)驗(yàn)的后期，模型組大鼠也出現(xiàn)了毛發(fā)暗淡、精神萎靡等表現(xiàn)，部分模型組大鼠還出現(xiàn)了白內(nèi)障等眼球改變，提示采用此方法能夠成功的建立糖尿病腎病大鼠模型，能夠表現(xiàn)出一些糖尿病腎病的病理改變和癥狀表現(xiàn)。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)量血液和尿液等生化指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)模型組與正常組相比，體重明顯減輕，腎重指數(shù)明顯升高，紅豆杉組、拜糖平組、糖脈康組與模型對(duì)照組相比，體重升高，腎重指數(shù)明顯降低；而紅豆杉組體重高于拜糖平組和糖脈康組，腎重指數(shù)低于其他兩個(gè)治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血糖、BUN、Scr、UAER等生化指標(biāo)也顯示：模型組與正常組相比，上述指標(biāo)都明顯升高；紅豆杉組、拜糖平組、糖脈康組上述指標(biāo)均低于模型對(duì)照組；而紅豆杉組在血肌酐和血尿素氮指標(biāo)上均明顯低于拜糖平組和糖脈康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而在降低血糖指標(biāo)上與其他兩組比較無(wú)明顯差異。拜糖平組與糖脈康組之間上述指標(biāo)比較均無(wú)差異。提示紅豆杉能夠有效降低腎重指數(shù)、降低蛋白尿，對(duì)糖尿病腎病大鼠腎功能有一定的保護(hù)作用。