荊 鶴，宋玉國

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto thyroiditis，HT)是一種由多種淋巴細(xì)胞共同參與的疾病，近幾年，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，多發(fā)于雌激素產(chǎn)生明顯變化的圍絕經(jīng)期女性，約為同年齡期男性的5～10倍[1-3].

淋巴細(xì)胞亞群是一類具有高度異質(zhì)性特點(diǎn)的細(xì)胞群體，B淋巴細(xì)胞的活化發(fā)生在淋巴結(jié)和脾臟等次級淋巴器官中，HT患者甲狀腺組織中的B淋巴細(xì)胞間接被激活，并在體外自發(fā)分泌抗甲狀腺抗體[4].NK細(xì)胞以調(diào)節(jié)ADCC反應(yīng)為渠道，參與機(jī)體內(nèi)的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致甲狀腺功能衰竭.有研究[5]表明：NK細(xì)胞通過CD40-CD154相互作用的調(diào)節(jié)途徑誘導(dǎo)自體靜息狀態(tài)下的B細(xì)胞合成免疫球蛋白，并參與免疫球蛋白同種類型間的相互轉(zhuǎn)化.因此，HT患者血液中B細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量的不平衡和細(xì)胞活性不穩(wěn)定等特征對疾病的發(fā)展進(jìn)程產(chǎn)生了一定影響.

1 材料與方法

1.1 材 料

參照《內(nèi)分泌及代謝性疾病臨床診療指南》[6]中橋本氏甲狀腺炎診斷要點(diǎn)，并排除妊娠、感染等其他影響甲狀腺功能的因素，篩選圍絕經(jīng)期女性病例組42例，年齡40～56歲，平均(49.34±3.52)歲.同期健康女性對照組38例，年齡41～52歲，平均(44.72±4.71)歲，其甲狀腺功能正常，無其他病史.兩組均于空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血4 mL，分為非抗凝血和抗凝血各2 mL備用.

1.2 方 法

甲狀腺激素及相關(guān)自身抗體檢測：應(yīng)用科美自動光激化學(xué)發(fā)光儀(LICA500)檢測血清中甲狀腺激素、超敏促甲狀腺激素、TPO抗體、TG抗體的含量.

雌激素定量檢測：應(yīng)用達(dá)成AULIA200全自動化學(xué)發(fā)光儀檢測血清中雌二醇的含量.

T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞亞群檢測：每例標(biāo)本分別標(biāo)記3個試管，混勻抗凝血后分別向試管中加入50 μL標(biāo)本全血，向1號試管加入CD3-PC5、CD4-PE、CD8-ECD熒光抗體各10 μL；向2號試管加入CD3-PC5、CD56-PE、CD19-ECD熒光抗體各10 μL；向3號試管加入CD3-PC5、CD4-FITC、CD25-PE熒光抗體各10 μL；分別放置振蕩器中混勻15 s，避光狀態(tài)下室溫孵育15 min.在持續(xù)振蕩下分別再向3個試管加入甲酸600 μL，10 s后加入260 μL碳酸鈉、氯化鈉、硫酸鈉混合溶液，繼續(xù)振蕩10 s.再分別加入0.9%濃度的生理鹽水3 mL，1 500 r/min離心5 min，吸棄試管內(nèi)上清液.依次再加入0.9%生理鹽水1 mL，放置混勻10 s.應(yīng)用Navios流式細(xì)胞儀，依次對每個樣本的3個標(biāo)記試管進(jìn)行測量.

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 甲狀腺激素、相關(guān)自身抗體及雌二醇檢測結(jié)果

病例組與健康對照組比較FT4明顯降低，TSH、TG-Ab、TPO-Ab以及雌二醇含量均明顯升高，兩組間檢測值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01).見表1.

表1 病例組和對照組甲狀腺激素、相關(guān)自身抗體及雌二醇臨床指標(biāo)Tab.1 Clinical index of thyroid hormone，related antibody and estradiol in case group and control group

2.2 T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞亞群檢測結(jié)果

與健康對照組比較，病例組Treg細(xì)胞顯著降低，B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞明顯升高，兩組檢測值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01).見表2、圖1～3.

圖1 病例組與對照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞亞群流式細(xì)胞檢測結(jié)果Fig.1 Flow cytometry test results of CD4+ CD25+ Treg cell subsets in case group and control group

圖2 病例組與對照組B細(xì)胞亞群流式細(xì)胞檢測結(jié)果Fig.2 Flow cytometry test results of B cell subsets in case group and control group

圖3 病例組與對照組NK細(xì)胞亞群流式細(xì)胞檢測結(jié)果Fig.3 Flow cytometry test results of NK cell subsets in case group and control group

表2 T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞亞群檢測結(jié)果Tab.2 Test results of T lymphocyte，B lymphocyte and NK cell subsets

2.3 病例組雌二醇含量變化對淋巴細(xì)胞亞群的影響

按雌二醇卵泡期正常參考范圍值(18.9～276.1 pg/mL)上限與下限之和的平均值(147.5 pg/mL)為分界點(diǎn)，將HT病例組數(shù)據(jù)分為雌二醇偏高組(n=18)和雌二醇偏低組(n=24)，分析雌二醇含量變化對淋巴細(xì)胞亞群的影響.見表3.雌二醇偏高組B細(xì)胞檢測值為(12.89±4.92)%，對比雌二醇偏低組B細(xì)胞檢測值(7.66±3.21)%明顯偏高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).

表3 病例組中雌二醇含量變化對淋巴細(xì)胞亞群影響Tab.3 Influence of estradiol content change on lymphocyte subsets in case group

3 討 論

橋本氏甲狀腺炎患者病理生理表現(xiàn)為甲狀腺組織被大量淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤，隨著甲狀腺濾泡被大量破壞，甲狀腺激素隨之改變，同時(shí)淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞也將導(dǎo)致甲狀腺功能發(fā)生障礙.NK細(xì)胞作為人體免疫系統(tǒng)的第一道防線，能夠在不致敏的情況下發(fā)揮免疫學(xué)效應(yīng)，是一類獨(dú)特的淋巴細(xì)胞亞群.同時(shí)還可以分泌細(xì)胞因子和趨化因子，溶解靶細(xì)胞參與特異性免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，是連接自然免疫和獲得性免疫的重要橋梁[7].已有實(shí)驗(yàn)[8-12]證明：NK細(xì)胞通過CD154與B細(xì)胞表面CD40相互作用，調(diào)節(jié)誘導(dǎo)自體靜息狀態(tài)下的B細(xì)胞合成免疫球蛋白，并參與B細(xì)胞的成熟、免疫球蛋白的分泌和同種類型間的相互轉(zhuǎn)化(如轉(zhuǎn)換為IgG和IgA).NK細(xì)胞在自身免疫性疾病中直接破壞靶器官內(nèi)參與反應(yīng)的細(xì)胞，通過ADCC作用調(diào)節(jié)并適應(yīng)機(jī)體免疫反應(yīng)，HT患者甲狀腺細(xì)胞中存在抗體介導(dǎo)細(xì)胞毒性反應(yīng)，致使甲狀腺功能衰竭.本實(shí)驗(yàn)針對NK細(xì)胞進(jìn)行了檢測分析發(fā)現(xiàn)：病例組NK細(xì)胞數(shù)量高于健康對照組(P<0.01)；HT是一種慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺疾病，當(dāng)機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答時(shí)，導(dǎo)致外周血中NK細(xì)胞不斷增加.由此可見，HT患者外周血中NK細(xì)胞數(shù)量不平衡、細(xì)胞活性不穩(wěn)定等特征，均在疾病的發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮重要作用.

B細(xì)胞雖然在免疫細(xì)胞中是一個獨(dú)立的細(xì)胞群體，但它與T細(xì)胞相輔相成，在細(xì)胞免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用.B細(xì)胞表面的免疫球蛋白跨膜受體能夠特異性識別抗原，激活并啟動機(jī)體免疫反應(yīng)，以主要組織相容性復(fù)合體-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子為載體將抗原呈遞給T細(xì)胞，Th細(xì)胞輔助支持B細(xì)胞活化，同時(shí)誘導(dǎo)被抗原過度刺激的B細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的抗體[13-15].相關(guān)研究[16]表明：B細(xì)胞通過產(chǎn)生IL-10來抑制Th1細(xì)胞的免疫反應(yīng).B細(xì)胞不僅可以輔助T細(xì)胞，在甲狀腺疾病中也發(fā)揮其重要細(xì)胞活性，HT患者甲狀腺組織中的B細(xì)胞被激活后自發(fā)分泌相關(guān)抗體，ADCC作用是引起甲狀腺組織內(nèi)濾泡細(xì)胞破壞及凋亡的重要因素.HT患者B細(xì)胞數(shù)量增多，在B細(xì)胞聚集處可見甲狀腺濾泡破壞灶.分析其檢測數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示：病例組B淋巴細(xì)胞數(shù)量高于對照組，且兩組間B細(xì)胞數(shù)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).由此可見，探尋B細(xì)胞參與機(jī)體免疫反應(yīng)中的細(xì)節(jié)，可以為B細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為HT患者在治療方面提供新的思路.

HT是一類器官自侵襲性疾病，多發(fā)于雌激素產(chǎn)生明顯變化的圍絕經(jīng)期女性，且女性患病率要高于同年齡期的男性，男女發(fā)病比率可達(dá)到1∶(5～10)，可見性別影響橋本氏甲狀腺炎的易感性[17-19].同時(shí)圍絕經(jīng)期是女性體內(nèi)雌二醇水平波動時(shí)期，針對這類女性患者進(jìn)行研究[20]，有助于理解雌二醇在HT患者體內(nèi)所發(fā)揮的作用.通過檢測42例圍絕經(jīng)期HT女性雌二醇水平，并與38例圍絕經(jīng)期健康女性進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)，病例組雌二醇含量升高，并且雌二醇含量在兩組中存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).雌激素不僅僅在生殖器官中發(fā)揮作用，同時(shí)也可以作用于機(jī)體免疫系統(tǒng)；雌激素刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，并參與免疫調(diào)節(jié)，免疫系統(tǒng)是雌激素直接作用的靶點(diǎn)，雌激素與淋巴細(xì)胞內(nèi)的雌激素受體結(jié)合，影響淋巴細(xì)胞的免疫功能，同時(shí)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞數(shù)量的改變；應(yīng)用內(nèi)分泌激素的免疫調(diào)節(jié)特性，有助于分析雌激素在橋本氏甲狀腺炎疾病中所發(fā)揮的作用，進(jìn)而影響橋本氏甲狀腺炎的發(fā)展及預(yù)后[21-25].綜合分析HT患者淋巴細(xì)胞亞群及雌激素等指標(biāo)，闡明各檢測指標(biāo)在橋本氏甲狀腺炎疾病中的免疫學(xué)作用，可為HT的治療提供新的思路和方法.