崔崗

慢性骨髓增殖性疾病發(fā)生機(jī)制尚未明確,是一組多能造血干細(xì)胞的克隆性疾病［1］。該病類型多,如慢性粒細(xì)胞白血病、原發(fā)性血小板增多癥、慢性中性粒細(xì)胞白血病、肥大細(xì)胞增生癥等［2,3］。而不同疾病類型,臨床治療方法也不同。因此,準(zhǔn)確診斷慢性骨髓增殖性疾病,為疾病治療、進(jìn)展及預(yù)后提供有效依據(jù)至關(guān)重要。既往是根據(jù)患者臨床表現(xiàn)、血液學(xué)、骨髓檢查等綜合手段進(jìn)行診斷,但無法準(zhǔn)確診斷疾病,誤診率高［4,5］。染色體分析的應(yīng)用,是基于細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展而來,具有一定的診斷技術(shù)?，F(xiàn)本研究擬對(duì)慢性骨髓增殖性疾病采用染色體分析,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2018 年1 月～2020 年12 月期間收治的95例慢性骨髓增殖性疾病患者,男51例,女44例；年齡2～76 歲,平均年齡(49.83±15.97)歲；參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［6］判定疾病類型,慢性粒細(xì)胞白血病82例,原發(fā)性血小板增多癥6例,原發(fā)性骨髓纖維化4例,真性紅細(xì)胞增多癥3例；所有患者均采集骨髓細(xì)胞行染色體分析；患者知情研究,且簽署了同意書；該研究符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批標(biāo)準(zhǔn),且審核通過。

1.2 方法 制備RPMI 1640 培養(yǎng)液(GIBCO BRL 公司提供),裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),置入-20℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。無菌注射器采集骨髓液2 ml,置入RPMI1640 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。先行染色體制備,培養(yǎng)瓶帶回實(shí)驗(yàn)室,骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù),并將其接種含有RPMI 1640 的標(biāo)本瓶?jī)?nèi),放置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng),持續(xù)24 h,定時(shí)搖勻。24 h 后,取出培養(yǎng)瓶搖勻,加入80 μl 秋水仙胺,搖勻后放置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)1 h。1 h 后吸取培養(yǎng)物,置入尖底離心管,離心10 min,1000 rpm,離心半徑13.5 cm。丟棄上清液,加入約8 ml 的0.075 mol/L 氯化鉀溶液,搖勻后孵育30 min。隨后加入固定液1 ml,混勻后離心10 min。丟棄上清液,加入8 ml 固定液,混勻,室溫放置30 min。離心10 min 后,棄上清液,加入8 ml 固定液,混勻,室溫放置15 min。離心10 min 后,丟棄上清液,加入8 ml固定液,混勻,室溫放置15 min。離心10 min,丟棄上清液,加入適量固定液,配制細(xì)胞懸液,保存?zhèn)溆?。將制備后的?xì)胞懸液打勻后,吸取少量,滴至潔凈、無脂的玻片,滴2～3 滴/片,在酒精燈上干燥。于50 ml染缸內(nèi)倒入Earle's 溶液,置入水浴箱內(nèi)進(jìn)行加熱至87.5℃。將玻片制備好后,水洗、晾干,以10% Giemsa染液進(jìn)行染色,15 min,水洗后于進(jìn)行鏡檢。在顯微鏡下觀察染色細(xì)胞,分析10～20 個(gè)分裂中期細(xì)胞,是否存在Rh 染色體及其異常,將其排列呈核型。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 分析骨髓增殖性疾病患者染色體異常檢出率、慢性粒細(xì)胞白血病染色體異常檢出率及治療前后染色體變化情況。慢性骨髓增殖性疾病效果判定標(biāo)準(zhǔn)：血液學(xué)緩解(CHR)：外周血白細(xì)胞＜10×109/L,血小板＜3000×109/L,無髓外白血病浸潤(rùn)。CCyR：骨髓內(nèi)無Ph 陽性細(xì)胞。主要遺傳學(xué)緩解(MCR)：骨髓內(nèi)Ph 陽性細(xì)胞數(shù)量占比＞0,但≤35%［5］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 骨髓增殖性疾病患者染色體異常檢出率 95例慢性骨髓增殖性疾病患者染色體異常檢出率為77.89%(74/95),Ph 染色體陽性率為70.53%(67/95),其他染色體異常檢出率為7.37%(7/95)。見表1。

表1 95例骨髓增殖性疾病患者染色體異常檢出率 (n,%)

2.2 慢性粒細(xì)胞白血病染色體異常檢出率 82例慢性粒細(xì)胞白血病患者,染色體異常檢出率為81.71%(67/82),其中Ph 染色體陽性率為76.83%(63/82),其他染色體異常率為4.88%(4/82)。見表2。

表2 82例慢性粒細(xì)胞白血病患者染色體異常檢出率(n,%)

2.3 不同方法治療染色體變化情況比較 動(dòng)態(tài)分析24例慢性骨髓增殖性疾病患者治療情況,其中17例Ph 染色體陽性的慢性粒細(xì)胞白血病患者經(jīng)格列衛(wèi)治療,用藥至今,14例達(dá)到CCyR,轉(zhuǎn)正常核型,占82.35%(14/17)；7例Ph 染色體陽性的慢性粒細(xì)胞白血病患者經(jīng)異基因骨髓移植治療,隨訪至今,6例轉(zhuǎn)正常核型,占85.71%(6/7)；經(jīng)格列衛(wèi)治療與經(jīng)異基因骨髓移植治療轉(zhuǎn)正常核型的比例比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.040,P=0.841＞0.05)。見表3。

表3 不同方法治療染色體變化情況比較［n(%)］

3 討論

慢性骨髓增殖性疾病類型多,發(fā)生機(jī)制復(fù)雜不明,既往疾病診斷僅依靠臨床表現(xiàn)、血液學(xué)及骨髓細(xì)胞學(xué)檢查,難以準(zhǔn)確診斷疾病。染色體分析是在細(xì)胞遺傳學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展而來,并逐級(jí)成為診斷惡性血液病的重要方法,不僅能診斷惡性血液病,也能為疾病預(yù)后判斷、個(gè)體化治療提供依據(jù)［6,7］。對(duì)慢性骨髓增殖性疾病患者行染色體分析時(shí),因血液病染色體呈數(shù)量、結(jié)構(gòu)異常,其中數(shù)量異常為整倍體及非整倍體異常,結(jié)構(gòu)異常為結(jié)構(gòu)斷裂、易位、缺失等［8,9］。慢性粒細(xì)胞白血病發(fā)病機(jī)制過程中,染色體易位會(huì)促使BCR-ABL 融合基因形成,但慢性向加速期、急變期進(jìn)展時(shí),可能使BCR-ABL 陽性克隆出現(xiàn)遺傳學(xué)變化［10］。真性紅細(xì)胞增多癥出現(xiàn)重現(xiàn)性染色體異常,克隆性異常及染色體雙排發(fā)生率均＞20%。原發(fā)性血小板增多癥患者染色體異常與疾病轉(zhuǎn)歸、轉(zhuǎn)化密切相關(guān),且能提示疾病預(yù)后不良［11］。原發(fā)性骨髓纖維化多見1 號(hào)、13 號(hào)及20 號(hào)染色體重現(xiàn)性異常,為細(xì)胞遺傳學(xué)診斷提供有利信息。慢性骨髓增殖性疾病中的多種病癥均有共同的發(fā)病、表現(xiàn)及病情轉(zhuǎn)歸特征,各病癥之間可相互存在及轉(zhuǎn)化［12,13］。本組研究中,95例慢性骨髓增殖性疾病患者染色體異常檢出率為77.89%,其中Ph 染色體陽性率70.53%,其他染色體異常檢出率7.37%。82例慢性粒細(xì)胞白血病患者,染色體異常檢出率81.71%,其中Ph 染色體陽性率76.83%,其他染色體異常率4.88%。研究發(fā)現(xiàn),慢性骨髓增殖性疾病存在明顯的染色體異常,其中以Ph 染色體陽性為主。

慢性粒細(xì)胞白血病治療時(shí)主要為異基因骨髓移植,格列衛(wèi)的運(yùn)用,為腫瘤靶向治療開創(chuàng)了一個(gè)新時(shí)代。該藥物能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,阻斷Ph 染色體陽性細(xì)胞向BCR-ABL 絡(luò)氨酸激酶轉(zhuǎn)化。本組研究中,動(dòng)態(tài)分析24例慢性骨髓增殖性疾病患者治療情況,其中17例Ph 染色體陽性的慢性粒細(xì)胞白血病患者經(jīng)格列衛(wèi)治療,用藥至今,14例達(dá)到CCyR,轉(zhuǎn)正常核型,占82.35%(14/17)；7例Ph 染色體陽性的慢性粒細(xì)胞白血病患者經(jīng)異基因骨髓移植治療,隨訪至今,6例轉(zhuǎn)正常核型,占85.71%(6/7)；經(jīng)格列衛(wèi)治療與經(jīng)異基因骨髓移植治療轉(zhuǎn)正常核型的比例比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。因此格列衛(wèi)對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病的治療具有一定效果,但因研究樣本量少,是否會(huì)影響其他染色體,仍需研究。

綜上所述,染色體分析能有效診斷慢性骨髓增殖性疾病,為疾病治療提供系統(tǒng)依據(jù),具有一定應(yīng)用價(jià)值。