劉硯涵，黨安坤，徐 鴻，張 棟，李玉杰，藺曉月，蘭鄒然，王貴升

（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250100）

2019 年底至今，新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）引起的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）疫情（以下簡(jiǎn)稱新冠疫情）在世界范圍內(nèi)大流行，不僅導(dǎo)致全球多數(shù)國(guó)家和地區(qū)人員的嚴(yán)重感染和死亡，還影響了全球人民的工作和生活，更是給全球經(jīng)濟(jì)發(fā)展和公共衛(wèi)生帶了巨大挑戰(zhàn)，也給經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖和畜牧業(yè)健康發(fā)展帶來(lái)了巨大威脅。

近幾年，我國(guó)水貂、狐貍等毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)處于谷底，很多養(yǎng)殖場(chǎng)戶喪失信心放棄飼養(yǎng)[1]。雪上加霜的是，新冠疫情初期，《新京報(bào)》報(bào)道了北京大學(xué)朱懷球團(tuán)隊(duì)的研究成果，認(rèn)為蝙蝠和水貂可能是SARS-CoV-2 的潛在宿主，而水貂可能是潛在中間宿主，從而引發(fā)了水貂養(yǎng)殖者的巨大恐慌。2020 年4 月，荷蘭首次報(bào)道在一家水貂養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)現(xiàn)水貂感染SARS-CoV-2，隨后丹麥、波蘭等多個(gè)國(guó)家相繼報(bào)道水貂及其雇員出現(xiàn)SARS-CoV-2 陽(yáng)性，甚至出現(xiàn)了“人—水貂—人”的跨種傳播鏈條。為此，丹麥、荷蘭政府撲殺了近270 萬(wàn)只水貂，荷蘭還出臺(tái)了禁止飼養(yǎng)水貂的法律[2-4]。截至目前，我國(guó)雖然尚未報(bào)道有水貂或其養(yǎng)殖戶感染SARSCoV-2，但丹麥、荷蘭等國(guó)家撲殺或禁飼水貂的情況引起了大多數(shù)養(yǎng)殖場(chǎng)戶的擔(dān)憂，這將直接影響到水貂養(yǎng)殖業(yè)的生存。

水貂冠狀病毒（mink coronavirus，MCoV）主要引起水貂的卡他性腹瀉（也稱水貂流行性卡他性胃腸炎），導(dǎo)致感染水貂出現(xiàn)精神萎靡、食欲不振、被毛無(wú)光澤、腹瀉以及排綠色、灰白色及粉黃色黏液狀稀便等臨床癥狀[5]。1987 年我國(guó)從丹麥、美國(guó)等國(guó)家引進(jìn)種貂時(shí)引入MCoV。近年來(lái)，山東省水貂養(yǎng)殖場(chǎng)戶偶有MCoV 感染發(fā)生，感染率不高，引起的死亡率通常也較低[6]。目前的研究[7]表明，SARS-CoV-2 由貂源冠狀病毒重組而來(lái)的可能性較小，但水貂養(yǎng)殖戶對(duì)MCoV 和SARS-CoV-2的區(qū)別及其關(guān)聯(lián)性的認(rèn)知程度以及基層養(yǎng)殖場(chǎng)戶是否受到國(guó)外撲殺水貂事件的影響尚不清楚。同時(shí)，為證實(shí)水貂是否感染或攜帶SARS-CoV-2，本研究對(duì)表現(xiàn)腹瀉癥狀的水貂采集糞便進(jìn)行了MCoV 和SARS-CoV-2 檢測(cè)，以期為新冠疫情的聯(lián)防聯(lián)控以及水貂養(yǎng)殖業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 認(rèn)識(shí)調(diào)查

2021 年5—7 月，在山東省部分水貂養(yǎng)殖密集地區(qū)（威海、青島、煙臺(tái)、濰坊、臨沂、日照、菏澤和泰安），對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶開(kāi)展MCoV 和SARSCoV-2 相關(guān)性認(rèn)知調(diào)查。采用問(wèn)卷調(diào)查方式，題型以單選和多選為主，內(nèi)容涉及養(yǎng)殖場(chǎng)戶基本情況以及水貂感染MCoV 和SARS-CoV-2 的認(rèn)知情況等。問(wèn)卷設(shè)計(jì)完成后，利用專家咨詢法進(jìn)行修改完善，最后使用“問(wèn)卷星”平臺(tái)生成問(wèn)卷二維碼，發(fā)放問(wèn)卷，回收調(diào)查結(jié)果。

1.2 樣品采集

采集來(lái)自19 個(gè)水貂養(yǎng)殖場(chǎng)戶中有腹瀉癥狀的水貂糞便樣品310 份，其中菏澤30 份、臨沂30 份、青島40 份、日照30 份、濰坊30 份、煙臺(tái)30 份、威海30 份、泰安90 份。

1.3 病原檢測(cè)

將新鮮糞便置于1.5 mL 離心管中用PBS 溶解，震蕩混勻，8 000 r/min 離心5 min，取上清液200 μL，用羅氏全自動(dòng)核酸提取儀提取核酸，然后將提取的核酸使用MCoV 和SARS-CoV-2 雙重?zé)晒釸T-PCR 檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自北京森康生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）按照說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

選定FAM 檢測(cè)通道讀取SARS-CoV-2 檢測(cè)結(jié)果，選定VIC 檢測(cè)通道讀取MCoV 檢測(cè)結(jié)果。當(dāng)兩個(gè)檢測(cè)通道均無(wú)Ct 值，且無(wú)特征性擴(kuò)增曲線，陽(yáng)性對(duì)照Ct 值均≤32，并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，表明樣品為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

原始數(shù)據(jù)使用Excel 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 養(yǎng)殖情況

此次認(rèn)知調(diào)查共收到問(wèn)卷207 份，經(jīng)核驗(yàn)全部有效。統(tǒng)計(jì)結(jié)果（圖1）顯示：山東省水貂養(yǎng)殖模式以散養(yǎng)戶（63.77%）為主，其次是商品代場(chǎng)（33.82%）；養(yǎng)殖種類以僅養(yǎng)水貂一種（44.93%）為主，其次是水貂和貉子混養(yǎng)（29.47%）以及水貂和犬混養(yǎng)（17.39%）。

2.2 認(rèn)知情況

調(diào)查結(jié)果（圖2～3）顯示：47.83%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)荷蘭、丹麥水貂因感染SARS-CoV-2 被撲殺事件較為了解，且36.23%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶認(rèn)為該事件會(huì)對(duì)水貂養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)影響；33.33%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶進(jìn)行過(guò)養(yǎng)殖人員SARS-CoV-2 核酸檢測(cè)，其中10.14%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶進(jìn)行過(guò)水貂SARS-CoV-2 核酸檢測(cè)；84.06%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶認(rèn)為，MCoV 不感染人；57.94%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶認(rèn)為，荷蘭、丹麥等國(guó)家水貂感染SARS-CoV-2 的途徑是通過(guò)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的其他動(dòng)物（如犬貓等），37.68%認(rèn)為是通過(guò)人傳染給水貂的，37.68%認(rèn)為是水貂自身攜帶病毒；0.97%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶認(rèn)為，MCoV 和SARS-CoV-2 有關(guān)系，更多的（52.17%）是不清楚。

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

檢測(cè)結(jié)果顯示，310 水貂糞便樣品兩個(gè)檢測(cè)通道均無(wú)Ct 值，且無(wú)特征性擴(kuò)增曲線，均為陰性，說(shuō)明均未感染MCoV 和SARS-CoV-2。

3 討論

新冠疫情流行至今，全球已有多個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道多種動(dòng)物感染SARS-CoV-2，涉及貓、犬、雪貂、水貂、大熊貓等[8]，其中水貂報(bào)道出現(xiàn)了與人的互相傳播，導(dǎo)致荷蘭、丹麥、美國(guó)等國(guó)家撲殺水貂超過(guò)270 萬(wàn)只，使水貂養(yǎng)殖業(yè)幾乎瀕臨絕境[3]。山東作為水貂養(yǎng)殖大省，養(yǎng)殖戶對(duì)于國(guó)外水貂遭到撲殺事件的認(rèn)知程度對(duì)其養(yǎng)殖信心十分重要。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山東省近半數(shù)的養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)荷蘭、丹麥水貂因感染SARS-CoV-2 被撲殺事件有所了解，有10.14%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶給自家水貂也進(jìn)行過(guò)SARS-CoV-2 核酸檢測(cè)，可見(jiàn)國(guó)外撲殺染水貂事件引發(fā)了養(yǎng)殖戶的擔(dān)憂，或擔(dān)心水貂感染SARSCoV-2 后傳染給人。此外，絕大多數(shù)養(yǎng)殖戶認(rèn)為撲殺水貂事件對(duì)水貂養(yǎng)殖業(yè)影響甚微，且84.06%的養(yǎng)殖戶認(rèn)為MCoV 不會(huì)感染人，僅有0.97%認(rèn)為MCoV 和SARS-CoV-2 可能存在一定關(guān)系，可見(jiàn)養(yǎng)殖戶們對(duì)于水貂養(yǎng)殖依然持樂(lè)觀態(tài)度，這對(duì)于水貂養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展十分重要。此外，大多數(shù)養(yǎng)殖戶認(rèn)為荷蘭、丹麥等國(guó)家的水貂感染SARS-CoV-2 的主要途徑是通過(guò)水貂養(yǎng)殖場(chǎng)其他動(dòng)物（如犬貓）感染，這可能是受到家養(yǎng)貓出現(xiàn)SARS-CoV-2 核酸陽(yáng)性報(bào)道的影響。

在病毒學(xué)分類上，SARS-CoV-2 與MCoV 不是同一屬的冠狀病毒[9-10]。本研究中310 份來(lái)自山東省8 個(gè)水貂養(yǎng)殖密集市的腹瀉樣品中均未檢測(cè)到MCoV 與SARS-CoV-2，說(shuō)明目前水貂中并未發(fā)現(xiàn)MCoV 和SARS-CoV-2 感染。然而，動(dòng)物冠狀病毒具有遺傳多樣性，容易發(fā)生變異和重組，且人工感染試驗(yàn)證實(shí)雪貂對(duì)SARS-CoV-2 易感[11-12]。水貂、狐貍和貉等特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖近年來(lái)在山東省得到了長(zhǎng)足發(fā)展，已經(jīng)成為全省畜牧業(yè)養(yǎng)殖的重要組成部分，基于全球同一健康的防控理念，要繼續(xù)加強(qiáng)毛皮動(dòng)物的MCoV 和SARS-CoV-2 監(jiān)測(cè)工作，重視養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全水平的提升。

4 結(jié)論

山東省水貂養(yǎng)殖場(chǎng)戶普遍認(rèn)為MCoV 和SARS-CoV-2 相關(guān)性較小，對(duì)水貂養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展影響不大，但鑒于其對(duì)水貂的潛在危害和公共衛(wèi)生威脅以及部分場(chǎng)戶對(duì)其不了解，需要繼續(xù)對(duì)水貂養(yǎng)殖場(chǎng)戶開(kāi)展MCoV和SARS-CoV-2認(rèn)知宣傳和監(jiān)測(cè)。