方 偉 ，楊 倩 ，楊紅杰 ，任國(guó)鑫 ，李煥榮 ，張永紅 ＊，周雙海 ＊

（1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，北京 102206；2.北京信得威特科技有限公司，北京 101302）

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病，PRV-gE基因缺失疫苗接種是其有效預(yù)防措施，疫苗免疫雖能阻止臨床發(fā)病，但難以完全阻止野毒感染。2010年以來，豬的偽狂犬病在國(guó)內(nèi)出現(xiàn)了明顯反彈，部分豬場(chǎng)的PRV野毒感染率明顯上升，疫苗效價(jià)不足可能是其重要原因之一?，F(xiàn)有多種豬偽狂犬病商品疫苗，不同商品疫苗標(biāo)識(shí)的每頭份劑量之間存在明顯差異。鑒于疫苗免疫效果通常與其免疫劑量或效價(jià)相關(guān)，因此，比較效價(jià)差異明顯的偽狂犬病疫苗的臨床免疫效果無疑具有重要臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 疫苗

PRV-gE基因缺失弱毒活疫苗A（高效價(jià)）與B（低效價(jià)），二者每頭份的標(biāo)識(shí)效價(jià)分別為不小于105.5TCID50和103.3TCID50。

1.2 疫苗臨床免疫

在一個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)選取50頭斷奶空懷母豬，隨機(jī)分成2組，每組各25頭，分別免疫疫苗A與疫苗B，4個(gè)月后進(jìn)行相應(yīng)疫苗的二次免疫。仔豬在出生后35、75、120 d 分別免疫其母豬所用疫苗1次。每次免疫劑量均為1頭份。2個(gè)試驗(yàn)組的豬群相對(duì)隔離飼養(yǎng)，免疫后全程觀察豬群免疫反應(yīng)與健康狀況。豬群其他疫苗免疫與飼養(yǎng)管理參照豬場(chǎng)管理規(guī)定執(zhí)行。

1.3 抗體檢測(cè)與分析

經(jīng)前腔靜脈或頸靜脈無菌采集試驗(yàn)豬的非抗凝血液3 mL，分離收集血清。采集母豬血液的時(shí)間是斷奶空懷期（S0）、妊娠期60 d（S60）與哺乳期15 d（S130）；采集仔豬血液的時(shí)間是生后15、35、55、75、95、115、135、155 d。每頭母豬在產(chǎn)仔后隨機(jī)固定1頭仔豬進(jìn)行全程采血。用IDEXX公司的阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)PRV-gB抗 體 與PRV-gE抗 體。用t檢驗(yàn)對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬群健康狀況

母豬、仔豬與生長(zhǎng)豬在免疫偽狂犬病疫苗后都未被觀察到明顯不良反應(yīng)，兩組豬群的發(fā)病率低、死亡淘汰率也低，且其間無顯著差異。

2.2 PRV-gB抗體S/N值動(dòng)態(tài)變化

從圖1可見，A組PRV-gB抗體平均S/N值一直低于B組，除在95 d生長(zhǎng)豬無顯著差異與在75 d生長(zhǎng)豬為顯著（P＜0.05）差異外，其余階段均為極顯著（P＜0.01）差異。A組與B組的PRV-gB抗體平均S/N值變化趨勢(shì)大體一致，在母豬階段和仔豬階段都維持相對(duì)穩(wěn)定，在95 d生長(zhǎng)豬都出現(xiàn)極顯著（P＜0.01）升高而形成一個(gè)明顯峰值，之后迅速極顯著（P＜0.01）下降并維持相對(duì)穩(wěn)定；但兩組之間也有所區(qū)別，A組在75 d生長(zhǎng)豬時(shí)出現(xiàn)一次比較明顯上升，而B組在35 d仔豬與135 d生長(zhǎng)豬時(shí)各出現(xiàn)一次比較明顯上升。

圖1 PRV-gB抗體S/N值動(dòng)態(tài)變化

2.3 PRV-gB與PRV-gE抗體陽性率動(dòng)態(tài)變化

PRV-gB抗體陽性率在兩組之間存在一些差別（見圖2），雖然兩組之間差異不顯著。A組PRV-gB抗體陽性率僅在95 d生長(zhǎng)豬時(shí)低至95%，其余階段均為100%。B組PRV-gB抗體陽性率在大多數(shù)階段高于95%，但在135 d生長(zhǎng)豬時(shí)為90%，尤其是在95 d生長(zhǎng)豬時(shí)低至80%。

兩組之間的PRV-gE抗體陽性率也存在一些差別（見圖2），雖然兩組之間差異也不顯著。兩組PRV-gE抗體陽性率分別介于5%~10%與10%~25%之間，其中A組始終低于B組，隨著仔豬日齡增長(zhǎng)，二者相差從5個(gè)百分點(diǎn)逐漸加大到15個(gè)百分點(diǎn)。

圖2 PRV-gB抗體與PRV-gE抗體陽性率動(dòng)態(tài)變化

3 討論

疫苗免疫抗體的含量與陽性率和野毒感染率是評(píng)估PRV-gE基因缺失疫苗免疫效果的3個(gè)重要參 數(shù)，PRV-gB抗 體 與PRV-gE抗體分別反映偽狂犬病的疫苗免疫抗體與野毒感染抗體。熒光定量PCR結(jié)果顯示不同偽狂犬病商品疫苗的病毒載量存在極顯著差異，而活疫苗效價(jià)與疫苗毒載量高度相關(guān)，故動(dòng)態(tài)比較了高效價(jià)與低效價(jià)的偽狂犬病疫苗免疫后的3個(gè)重要評(píng)估參數(shù)，結(jié)果存在明顯差異。

兩組母豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體陽性率都是100%，說明母豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體全部合格；但是，A組的疫苗免疫抗體平均含量都一直極顯著高于B組，同時(shí)其野毒感染率一直低于B組。這些數(shù)據(jù)表明，提高母豬的偽狂犬病疫苗的效價(jià)能夠提高其免疫抗體含量，并進(jìn)而能夠在一定程度上減少其野毒感染。并且，這種優(yōu)勢(shì)還通過母源抗體而傳遞給了其哺乳仔豬。

在 斷 奶 仔 豬（35 d與55 d）階段，A組的偽狂犬病疫苗免疫抗體的平均含量依然極顯著高于B組仔豬且保持基本穩(wěn)定，同時(shí)其陽性率仍保持100%且野毒感染率沒有增加；而B組仔豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體的平均含量在35 d時(shí)出現(xiàn)比較明顯減少，同時(shí)其陽性率已不足100%，且其野毒感染率在55 d時(shí)增加了。B組仔豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體在35 d出現(xiàn)一定下降后在55 d又出現(xiàn)一定回升，顯示出一定免疫效果，說明其在35 d進(jìn)行偽狂犬病疫苗的首次免疫是比較合適的。A組仔豬在35 d接種偽狂犬病疫苗無明顯效果，這可能與其母源抗體水平仍然很高有關(guān)，朱玲等報(bào)道高水平的母源抗體會(huì)干擾仔豬的偽狂犬病疫苗免疫。

在整個(gè)生長(zhǎng)階段（75~155 d），兩組偽狂犬病疫苗免疫抗體平均含量變化趨勢(shì)大體一致，但A組一直明顯高于B組；同時(shí)，A組疫苗免疫抗體陽性率一直維持在95%以上，而B組僅在80%~95%之間，且B組PRV野毒感染率高于A組的幅度從95 d起增加了。這顯示A組生長(zhǎng)豬的偽狂犬病免疫狀況優(yōu)于B組生長(zhǎng)豬，表明高效價(jià)偽狂犬病疫苗免疫能夠明顯提高疫苗免疫抗體含量及其合格率、并能明顯減少其野毒感染。兩組生長(zhǎng)豬的偽狂犬病疫苗免疫抗體含量都在95 d出現(xiàn)非常明顯的下降，之后在115 d都迅速上升恢復(fù)到較高水平，這很可能與豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）感染有關(guān)。已知PCV2具有免疫抑制特性，有資料報(bào)道PCV2感染會(huì)抑制偽狂犬病疫苗的體液免疫反應(yīng)，而試驗(yàn)豬場(chǎng)斷奶仔豬在轉(zhuǎn)群后一個(gè)月內(nèi)恰好是PCV2感染的一個(gè)高發(fā)階段。

綜合分析顯示，A組 的偽狂犬病疫苗免疫抗體數(shù)據(jù)優(yōu)于B組，而其野毒感染率低于B組，表明高效價(jià)偽狂犬疫苗的臨床免疫效果好于其低效價(jià)疫苗。