高文秀 佘睿 楊帆 孫宇 霍麗珺 雷雅燕

碳酸飲料對牙體硬組織的危害主要有兩個方面［1－2］：①飲料中的酸對牙齒表面直接脫礦、破壞，其特有的發(fā)泡機制促進(jìn)酸對牙釉質(zhì)的脫礦作用；②飲料中的糖經(jīng)微生物發(fā)酵產(chǎn)酸引起齲病。目前有研究表明氟保護(hù)漆可防止釉質(zhì)脫礦，而對其促進(jìn)再礦化的研究較少。本實驗通過體外研究氟保護(hù)漆Duraphat對碳酸飲料引起恒牙釉質(zhì)脫礦后再礦化的影響及作用，為碳酸飲料導(dǎo)致恒牙釉質(zhì)脫礦的微創(chuàng)治療提供實驗依據(jù)和臨床參考。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑及儀器

可口可樂（可口可樂飲料中國有限公司，pH＝2.77）；氟化鈉（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，中國）；氟保護(hù)漆Duraphat（高露潔棕欖有限公司，德國）；金剛砂片（DFS-Diamon，德國）；pHScan2（Eutech，馬來西亞）；打磨機（Strong，南韓）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；掃描電子顯微鏡（FEIQuanta200，荷蘭）；X線能譜分析儀（FEIQuanta200，荷蘭）。人工唾液：用ISO／TR10271標(biāo)準(zhǔn)配置。

1.2 方法

1.2.1 實驗牙的收集及保存 收集12～25歲因正畸減數(shù)拔除的前磨牙30顆。納入標(biāo)準(zhǔn)：牙體表面釉質(zhì)完整、無齲、無裂紋、無白斑、非四環(huán)素牙、非氟斑牙，未經(jīng)牙體和牙髓治療。貯存于0.9%生理鹽水中備用。

1.2.2 實驗分組及處理 選擇30顆前磨牙，用不含氟的拋光糊劑在低速渦輪機上用橡皮杯拋光牙冠，選擇釉質(zhì)頰、舌側(cè)平滑面，制備成4 mm×4 mm×2 mm釉質(zhì)切片，在釉面中心暴露2 mm×2 mm的開窗區(qū)，其余部分用兩層抗酸性指甲油封閉。30顆前磨牙隨機分為2組，每組15顆前磨牙，第1組每顆離體牙制備2個釉質(zhì)切片，2個釉質(zhì)切片隨機分入A組，B組。A組釉質(zhì)切片置于10 m l可口可樂中10 min后，去離子水沖洗，再置于人工唾液中1 h，每天循環(huán)4次，處理間隙置于人工唾液中，共7 d?？煽诳蓸访看翁幚砗蟾鼡Q，人工唾液每天更換，同樣的方法用去離子水處理B組，實驗過程所有樣本置于37℃恒溫箱中完成。第2組每顆離體牙制備3個釉質(zhì)切片，3個釉質(zhì)切片隨機分入C、D、E組，每組15個樣本，C組為Duraphat組，D組為2%NaF組，E組為空白對照組。采用A組方法處理所有釉質(zhì)切片7 d后。C組釉質(zhì)切片用Duraphat反復(fù)涂擦1 min，靜置2 min后置于人工唾液中；D組釉質(zhì)切片用2%NaF溶液反復(fù)涂擦1 min，靜置4 min后置于人工唾液中；E組釉質(zhì)切片不做處理，直接置于人工唾液中，實驗過程中Duraphat涂布1次，2%NaF涂布2次，人工唾液每天更換，共7 d，實驗過程中所有樣本置于37℃恒溫箱中完成。

1.2.3 掃描電鏡觀察和X線能譜分析 每組樣本隨機選取1枚釉質(zhì)切片，導(dǎo)電膠將牙體試件依次固定于樣品臺上，噴金鍍膜，真空狀態(tài)下于高倍鏡下（×5 000，×10 000）觀察恒牙釉質(zhì)切片表面形態(tài)。所有樣本采用X線能譜分析，導(dǎo)電膠將牙體試件依次固定于樣品臺上，真空狀態(tài)下于倍數(shù)（×500）下測量恒牙釉質(zhì)表面鈣、磷水平（重量百分比）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 恒牙釉質(zhì)表面形態(tài)變化

掃描電鏡觀察顯示，可口可樂處理組釉質(zhì)表面粗糙，凹凸不平呈蜂窩狀外觀，可見單個釉柱表面呈現(xiàn)明顯酸蝕損傷，釉柱低于相間的釉間質(zhì)，釉間質(zhì)呈薄壁狀，部分倒塌倒伏，脫礦后形成的微孔隙清晰；去離子水處理組釉質(zhì)表面形態(tài)平坦，未見明顯孔隙。Duraphat組釉質(zhì)表面可見大面積沉積物連接成片狀，微孔隙幾乎被覆蓋，釉柱中心及釉柱間質(zhì)形態(tài)模糊不清；2%NaF組釉質(zhì)表面見分布均勻、細(xì)小的沉積物，微孔隙大部分被覆蓋，釉柱間質(zhì)形態(tài)較清晰；空白對照組釉質(zhì)表面有少量沉積物，微孔隙部分被覆蓋，仍可見清晰的釉柱中心及釉柱間質(zhì)形態(tài)（圖1）。

2.2 恒牙釉質(zhì)表面鈣、磷水平變化

X線能譜分析可口可樂組、去離子水組釉質(zhì)表面鈣、磷水平如表1所示；Duraphat組、2%NaF組與空白對照組釉質(zhì)表面鈣、磷水平如表2所示。

3 討 論

釉質(zhì)的脫礦與再礦化之間的臨界pH值范圍為5.0～5.5，可口可樂的 pH值為2.77，長期飲用易導(dǎo)致釉質(zhì)脫礦［3］。Lussi等［4］體外研究發(fā)現(xiàn)由可口可樂引起乳牙釉質(zhì)脫礦與可口可樂pH值，可滴定酸度和Ca2＋濃度有關(guān)，可滴定酸度越高，越易導(dǎo)致釉質(zhì)脫礦［5］。Hamasha等［6－7］研究表明釉質(zhì)脫礦與唾液流速、飲食習(xí)慣有關(guān)，包括飲用量、飲用頻率、長時間不吞咽，飲后即刻刷牙、睡前飲用碳酸飲料等。本實驗以可口可樂制備脫礦模型，采用 Carvalho等［8］提出的 pH循環(huán)法處理釉質(zhì)切片，以模擬口腔內(nèi)釉質(zhì)脫礦與再礦化動態(tài)重復(fù)過程。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)可口可樂處理后釉質(zhì)表面呈蜂窩狀，釉柱低于相間的釉間質(zhì)，釉間質(zhì)呈薄壁狀，部分倒塌倒伏。該結(jié)果與Worawongvasu等［9］研究相似。同時X線能譜分析可口可樂處理后恒牙釉質(zhì)表面的鈣、磷水平較正常對照組明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果與 Wang等［10］、Carvalho等［11］研究一致。說明可口可樂對恒牙釉質(zhì)具有明顯脫礦作用。

圖1 5組恒牙釉質(zhì)表面形態(tài) （SEM，A：×5 000，B：×10 000）Fig 1 The surfacemorphology of permanent enamel of the 5 groups（SEM，A：×5 000，B：×10 000）

表1 A和B組恒牙釉質(zhì)表面鈣、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 1 The Ca2＋ and P3＋contentof enamel surface of group A and B（%，±s，n＝15）

表1 A和B組恒牙釉質(zhì)表面鈣、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 1 The Ca2＋ and P3＋contentof enamel surface of group A and B（%，±s，n＝15）

注：① 與B組比較P＜0.05

分組 鈣（質(zhì)量百分比） 磷（質(zhì)量百分比）A（可口可樂組） 41.47±3.73① 18.17±0.77①45.16±3.67 18.67±0.44 B（去離子水組）

表2 C、D、E組恒牙釉質(zhì)表面鈣、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 2 The Ca and P content of enamel surface of group C，D and E（%，±s，n＝15）

表2 C、D、E組恒牙釉質(zhì)表面鈣、磷水平（%，±s，n＝15）Tab 2 The Ca and P content of enamel surface of group C，D and E（%，±s，n＝15）

注：①與E組比較P＜0.05

分組 鈣（質(zhì)量百分比） 磷（質(zhì)量百分比）C（Duraphat組） 39.72±3.94① 18.24±0.47①36.85±2.87 17.70±0.71 D（2%NaF組） 39.54±2.40① 18.02±0.77 E（空白對照組）

有許多研究發(fā)現(xiàn)涂布氟化物（Duraphat和2%NaF凝膠）后進(jìn)行碳酸飲料pH循環(huán)可抑制碳酸飲料引起的釉質(zhì)脫礦［12－14］。本實驗中，掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)Duraphat組恒牙釉質(zhì)表面可見大面積沉積物連接成片狀，微孔隙幾乎被覆蓋；2%NaF組恒牙釉質(zhì)表面可見分布均勻、細(xì)小的沉積物，微孔隙被大部分覆蓋；空白對照組恒牙釉質(zhì)表面有少量沉積物，微孔隙部分被覆蓋，仍可見清晰的釉柱中心及釉柱間質(zhì)形態(tài)。說明氟保護(hù)漆Duraphat、2%NaF和人工唾液均可促進(jìn)脫礦牙釉質(zhì)再礦化，使用氟保護(hù)漆Duraphat后的釉質(zhì)表面形態(tài)更接近正常的釉質(zhì)表面形態(tài)，提示氟保護(hù)漆Duraphat對可口可樂引起的恒牙釉質(zhì)脫礦后的再礦化效果優(yōu)于2%NaF和人工唾液。Carvalho等［11］研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用氟化物（Duraphat和2%NaF凝膠）后進(jìn)行碳酸飲料pH循環(huán)，釉質(zhì)表面鈣、磷水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Medeiros等［15］體外研究表明氟保護(hù)漆Duraphat可明顯增加脫礦牙釉質(zhì)表面硬度。本實驗X線能譜分析結(jié)果顯示，氟保護(hù)漆Duraphat處理后釉質(zhì)表面鈣、磷水平高于空白對照組，2%NaF局部處理后恒牙釉質(zhì)表面鈣水平高于空白對照組，而磷水平無明顯升高，提示氟保護(hù)漆Duraphat促進(jìn)可口可樂引起的釉質(zhì)脫礦后的再礦化。

氟保護(hù)漆Duraphat含5%氟化鈉，固化后在牙面形成黃色透明保護(hù)層，通過緩慢釋氟，在釉面形成礦物沉積。其氟離子與唾液和牙釉質(zhì)溶解產(chǎn)生的鈣離子結(jié)合，在牙體表面生成氟化鈣顆粒沉積，氟化鈣顆粒不會立即溶解，可持續(xù)數(shù)周。當(dāng)pH值降低時再溶解釋放氟離子，游離氟與鈣、磷結(jié)合形成氟磷灰石。釉質(zhì)中氟磷灰石的增加能降低其溶解性，增強其抗酸性，進(jìn)而抑制脫擴、促進(jìn)再礦化。姚博文等［15］在已酸蝕釉質(zhì)表面使用氟保護(hù)漆Duraphat后再次酸蝕，掃描電鏡下仍可見大量沉積物，表明氟化物與牙釉質(zhì)表面結(jié)合穩(wěn)定，不易被碳酸飲料及刷牙等外力去除［13］。氟保護(hù)漆Duraphat對碳酸飲料引起恒牙釉質(zhì)脫礦后再礦化作用有待今后臨床試驗研究進(jìn)一步證明。此外，氟保護(hù)漆Duraphat具有操作簡便，安全，有效，易于被接受等優(yōu)點。綜上所述，氟保護(hù)漆Duraphat可作為長期大量飲用碳酸飲料及口腔衛(wèi)生不良引起的白堊色脫礦斑塊微創(chuàng)治療手段之一，為臨床治療提供更多選擇。

本實驗條件下可口可樂導(dǎo)致恒牙釉質(zhì)明顯脫礦，氟保護(hù)漆Duraphat可有效促進(jìn)可口可樂引起恒牙釉質(zhì)脫礦的再礦化，為碳酸飲料導(dǎo)致恒牙釉質(zhì)脫礦的微創(chuàng)治療提供實驗依據(jù)和臨床參考。

［1］劉興容，周學(xué)東，張萍，等.不同種類碳酸飲料導(dǎo)致牙釉質(zhì)脫礦的比較研究［J］.北京口腔醫(yī)學(xué)，2004，12（3）：144－147.

［2］Xavier AM，Rai K，Hegde AM，et al.A spectroscopic and surfacemicrohardness study on enamel exposed to beverages supplemented with lower iron concentrations［J］.JClin Pediatr Dent，2015，39（2）：161－167.

［3］Barac R，Gasic J，Trutic N，etal.Erosive effectof different soft drinks on enamel surfacein vitro：Application of stylus profilometry［J］.Med Princ Pract，2015，24（5）：451－457.

［4］Lussi A，Carvalho TS.Analyses of the erosive effect of dietary substances and medications on deciduous teeth［J］.PLoSOne，2015，10（12）：e0143957.

［5］Wang YL，Chang CC，Chi CW，et al.Erosive potential of soft drinks on human enamel：Anin vitrostudy［J］.JFormos Med Assoc，2014，113（11）：850－856.

［6］Hamasha AA，Zawaideh FI，Al-Hadithy RT.Risk indicators associated with dental erosion among Jordanian school children aged 12-14 years of age［J］.Int J Paediatr Dent，2014，24（1）：56－68.

［7］Kannan A，Ahmed MAA，Duraisamy P，et al.Dental hard tissue erosion rates and soft drinks-A gender based analysis in Chennai city，India［J］.The Saudi J for Dent Res，2014，5：21－27.

［8］de Carvalho Sales-Peres SH，Magalh?es AC，de Andrade Moreira Machado MA，et al.Evaluation of the erosive potential of soft drinks［J］.Eur JDent，2007，1（1）：10－13.

［9］Worawongvasu R.Scanning electron microscope characterization of erosive enamel in human teeth［J］.Ultrastruct Pathol，2015，39（6）：395－401.

［10］Wang CP，Huang SB，Liu Y，et al.The CPP-ACP relieved enamel erosion from a carbonated soft beverage：Anin vitroAFM and XRD study［J］.Arch Oral Biol，2014，59（3）：277－282.

［11］De Carvalho Filho AC，Sanches RP，Martin AA，etal.Energy dispersive X-ray spectrometry study of the protective effects of fluoride varnish and gel on enamel erosion［J］.Microsc Res Tech，2011，74（9）：839－844.

［12］Soares LE，De Carvalho Filho AC.Protective effectof fluoride varnish and fluoride gel on enamel erosion：Roughness，SEM-EDS，andμ-EDXRF studies［J］.Microsc Res Tech，2015，78（3）：240－248.

［13］Levy FM，Magalh?es AC，Gomes MF，et al.The erosion and abrasion-inhibiting effect of TiF（4）and NaF varnishes and solutions on enamelin vitro［J］.Int J Paediatr Dent，2012，22（1）：11－16.

［14］Bansal K，Balhara N，Marwaha M.Remineralizing efficacy of Calcarea Fluorica tablets on the artificial carious enamel lesions using scanning electron microscope and surface microhardness testing：In vivostudy［J］.Indian JDent Res，2014，25（6）：777－782.

［15］Medeiros IC，Brasil VL，Carlo HL，et al.In vitroeffect of calcium nanophosphate and high-concentrated fluoride agents on enamelerosion：An AFM study.［J］.Int JPaediatr Dent，2014，24（3）：168－174.

［16］姚博文，許浩坤，王勝朝.含氟涂料和含氟牙膏對釉面再礦化和抗酸作用的實驗研究［J］.實用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2014，30（5）：611－615.