霍路曼，李 藝，鄭百芹，李明陽，張淼怡，郝立武，張書宏

河北省唐山市食品藥品綜合檢驗(yàn)檢測中心；河北省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測工程技術(shù)研究中心，河北唐山 063000

0 引言

近年來，乳及其制品因具有豐富的營養(yǎng)價(jià)值已成為人們生活中必不可少的食品之一[1]。據(jù)《2020年中國奶業(yè)統(tǒng)計(jì)摘要》統(tǒng)計(jì)，2018年、2019年、2020年，我國生乳產(chǎn)量分別為3 038.6 萬噸、3 201.2 萬噸、3440.0 萬噸，呈現(xiàn)出逐年遞增的態(tài)勢。乳品市場發(fā)展?jié)摿薮骩2]。生乳作為乳制品的最主要原料，從生產(chǎn)到加工，再到運(yùn)輸，經(jīng)過了較長的產(chǎn)業(yè)鏈，因此如何保障其的質(zhì)量安全問題，成為行業(yè)和消費(fèi)者共同關(guān)注的焦點(diǎn)。

在生產(chǎn)端，生乳的不安全因素之一，是生乳中的獸藥殘留，其主要來自不規(guī)范使用獸藥與不嚴(yán)格執(zhí)行休藥期[3，4]，最終導(dǎo)致生乳中獸藥殘留超過安全值[5]。通過查閱相關(guān)資料，目前生乳中獸藥殘留檢測方法包括酶聯(lián)免疫法[6]、氣相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、液相色譜法[8]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9]。但能在短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確測定生乳中多數(shù)量獸藥殘留的研究與報(bào)道較少。本研究通過對樣品前處理過程進(jìn)行優(yōu)化，采用液相色譜高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)建立了同時(shí)測定生乳中29 種獸藥殘留的快速檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（X500R）：美國AB SCIEX公司；電子天平（PL2002）：上海梅特勒-托利多公司；渦旋儀（MS3 basic）：德國艾卡公司；振蕩器：德國海道爾夫（Heidolph）公司；氮吹儀、離心機(jī)。

1.2 材料

獸藥殘留標(biāo)準(zhǔn)品購自天津阿爾塔公司；甲酸、甲醇、乙腈為質(zhì)譜純，其他試劑為分析純；試驗(yàn)用水為蒸餾水（屈臣氏）；生乳樣品采于河北省唐山市的生鮮乳收購站；0.22 μm濾膜購自DIKMA公司；凈化管（Dikma ProElut QuECHERS獸藥殘留檢測專用）產(chǎn)自Dikma公司。

2 試驗(yàn)方法

2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

分別吸取濃度為10 ng/mL的單個(gè)獸藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100 μL，用乙腈定容至10 mL，得到濃度為100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-20 ℃冰箱內(nèi)保存。

2.2 樣品前處理

分別吸取生乳樣品2.0 mL于50 ml離心管中，加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL，配制成含量為5 μg/mL的待測樣品，渦旋混勻后靜置10.0 min，加入8.0 mL乙腈（含0.2%的甲酸），渦旋混勻后超聲5.0 min，4 000 r/min離心10.0 min，將上層清液全部導(dǎo)入凈化管中，渦旋震蕩10.0 min后靜置20.0 min，隨后吸取上層清液4.0 mL氮吹至近干，用10%乙腈水定容至1.0 mL，渦旋混勻后過0.22 μm濾膜至進(jìn)樣小瓶，待測。

2.3 液相色譜條件

色譜柱條件：Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×50 mm，1.8 μm）。柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流量：0.3 mL/min。正離子模式下流動(dòng)相：A為水溶液加上0.1%甲酸；B為乙腈溶液加上0.1%甲酸。采集時(shí)間為20.0 min，梯度程序見表1。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式，采集方式為非依賴型數(shù)據(jù)采集模式（IDA）。具體參數(shù)見表2。

表2 質(zhì)譜條件參數(shù)

2.4 數(shù)據(jù)處理

結(jié)合已建立的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行定性分析，數(shù)據(jù)采集完后使用SCIEX OS系統(tǒng)（Version 1.6.1.29803）中自帶的Analytics程序進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，分析方式為非靶向分析。

3 結(jié)果與討論

準(zhǔn)確吸取2.00 g生鮮乳樣品，加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL，配制成含量為5 μg/mL的待測樣品，隨后按照上述前處理方法進(jìn)行處理，將數(shù)據(jù)進(jìn)行靶向分析，29 種獸藥能夠在20.0 min內(nèi)被檢測出來，總離子流圖見圖1，結(jié)果見表3。從表1中可以看出29 種獸藥殘留能夠被很好的檢測出來，其中Mass Error在±2.0 mg/kg之內(nèi)，Library Score得分均在90 分以上，能夠滿足快速定性的要求，提高篩查效率與準(zhǔn)確性。

表 3 29 種獸藥殘留上機(jī)結(jié)果

圖1 29種獸藥殘留總離子流圖

表 1 梯度程序

生乳中因含有蛋白質(zhì)會(huì)影響提取效果，前處理方法中，往提取液中加入了0.1%的甲酸，能夠有效地去除樣品中的蛋白質(zhì)，同時(shí)，超聲處理能夠很大程度上提高提取效率。

4 結(jié)論

液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜具有高通量、快速定性的優(yōu)點(diǎn)，在建好譜庫的情況下，能夠不使用標(biāo)準(zhǔn)品來對物質(zhì)進(jìn)行快速定性，并且其前處理方法簡單，能夠在很大程度上節(jié)約檢測時(shí)間，提高檢測效率與準(zhǔn)確性。

本方法通過優(yōu)化的前處理方法結(jié)合液相色譜高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜，開發(fā)了乳制品29 種獸藥殘留的快速定性方法，具有前處理簡單、靈敏度高、檢測時(shí)間快等優(yōu)點(diǎn)，但因其在定量檢測的準(zhǔn)確性上不如三重四級桿，因此，定量檢測暫不考慮該方法。