馬 濤

(山西省檢驗(yàn)檢測中心(山西省標(biāo)準(zhǔn)計量技術(shù)研究院)，山西 太原 030025 )

1 前言

氟啶蟲酰胺(Flonicamid)最早由日本石原產(chǎn)業(yè)株式會社于2007年在我國登記，分子式為C9H6F3N3O，CAS登錄號158062-67-0，易溶于丙酮和甲醇，對熱穩(wěn)定[1]。是一種新型低毒吡啶酰胺類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類殺蟲劑，除具有觸殺和胃毒作用外，還具有很好的神經(jīng)毒性和快速拒食作用，對蜜蜂、環(huán)境友好。蚜蟲等刺吸式口器害蟲吸入帶有氟啶蟲酰胺的植物汁液后，會很快停止吮吸，最終因饑餓而死亡。啶蟲脒(Acetamiprid)，最早于1998年在我國取得登記，分子式為C10H11ClN4， CAS登錄號135410-20-7，能溶于丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃等有機(jī)溶劑，對光穩(wěn)定[1]。屬氯化煙堿類化合物，是一種廣譜、低毒且具有一定殺螨活性的殺蟲劑。廣泛用于水稻、蔬菜、果樹、茶葉等作物的蚜蟲、飛虱、薊馬、部分鱗翅目害蟲等的防治，由于不科學(xué)合理使用，已在多地多種防治對象上形成抗藥性。目前防治蚜蟲的常用殺蟲劑主要是菊酯類農(nóng)藥和新煙堿類農(nóng)藥，該兩類藥劑在蚜蟲的綠色防控中面臨2個問題。一個是抗藥性問題，由于長期使用上述兩種類型的農(nóng)藥防治蚜蟲，導(dǎo)致蚜蟲對其的抗藥水平大幅上升，有的地區(qū)抗性倍數(shù)達(dá)到了數(shù)萬倍以上；一個是對有益昆蟲的殺傷力問題，特別是對蜜蜂等傳媒昆蟲的毒性問題。氟啶蟲酰胺是一種新型的昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類殺蟲劑，很好的解決了上述兩個問題，可作為蚜蟲綠色防控的首選藥劑[2]。

國內(nèi)農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)從2016年開始陸續(xù)取得氟啶蟲酰胺和啶蟲脒混配制劑的登記證，劑型多為水分散粒劑，截止2021年11月底，國內(nèi)已有11個產(chǎn)品取得登記，增長迅速。國內(nèi)該混劑的分析方法尚未見報道，本文介紹了一種用高效液相色譜法同時測定啶蟲脒和氟啶蟲酰胺的方法。該方法操作比較簡單、快速，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析要求，是一種比較實(shí)用的方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器和試劑

2.1.1 儀器與設(shè)備 Waters ACQUITY UPLC 液相色譜儀(配原廠工作站、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器)；梅特勒 AG285 十萬分之一電子天平；過濾器(0.45μm)；Millipore QG超純水機(jī)；超聲波清洗機(jī)；常用玻璃器皿。

2.1.2 試劑 超純水(電阻率：25℃，18.2MΩ.cm)；甲醇(色譜純)；啶蟲脒標(biāo)樣98.0%；氟啶蟲酰胺標(biāo)樣98.9%；35%氟啶·啶蟲脒水分散粒劑(啶蟲脒15%、氟啶蟲酰胺 20%)。

2.2 液相色譜條件 色譜柱：Ultimate 4.60×250mm，5μm XB-C18(Ⅱ)不銹鋼柱；柱溫：30℃；流動相：甲醇：水=50：50(V/V)；流速：1.0mL/min；檢測波長：260nm；進(jìn)樣量：20.0μL。在上述條件下，氟啶蟲酰胺和啶蟲脒的保留時間分別約為3.3min和4.4min。

2.3 操作步驟

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱取啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品0.03g(精確至0.000 2g)、氟啶蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.04g(精確至0.000 2g) 置于同一50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液10mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲振蕩10min，靜置到室溫，用 0.45μm 孔徑濾膜過濾，備用。

2.3.2 試樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱取0.2g(準(zhǔn)確至0.000 2g)的試樣，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液10mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲振蕩10min，靜置到室溫，用 0.45μm 孔徑濾膜過濾，備用。

2.3.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化≤1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

2.3.4 計算 采用外標(biāo)法計算。將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣中的啶蟲脒(或氟啶蟲酰胺)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中啶蟲脒(或氟啶蟲酰胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計算：

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中啶蟲脒(氟啶蟲酰胺)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中啶蟲脒(氟啶蟲酰胺)峰面積的平均值；

m1—標(biāo)樣啶蟲脒(氟啶蟲酰胺)的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

p—標(biāo)樣啶蟲脒(氟啶蟲酰胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相的選擇 35%氟啶·啶蟲脒水分散粒劑中雜質(zhì)成分較少，為確保待測組分與雜質(zhì)完全分離，分別用甲醇/水不同比例進(jìn)行了試驗(yàn)。結(jié)果表明：隨著流動相中甲醇所占比例的減小，出峰時間會延遲。在甲醇：水=50：50(V/V)時，各待測組分與雜質(zhì)能得到理想地分離，且基線平穩(wěn)、峰形對稱，分析時間也較短。(圖1、2、3)

圖1 啶蟲脒標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 氟啶蟲酰胺標(biāo)樣液相色譜圖

圖3 試樣液相色譜圖

3.2 檢測波長的選擇性 分別將某一濃度啶蟲脒和氟啶蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，利用PDA檢測器進(jìn)行光譜掃描，得到二者的紫外吸收光譜圖(圖4、5)，可見二者的最大吸收波長約為245nm和201nm。經(jīng)過對照實(shí)驗(yàn)，選擇波長在260nm處時，各雜質(zhì)不影響測定，兩個待測組分都有較大吸收，且遠(yuǎn)離低波長紫外區(qū)。

圖4 啶蟲脒紫外吸收譜圖

圖5 氟啶蟲酰胺紫外吸收譜圖

3.3 精密度測定 將同一樣品分別稱取6份，分別測定，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計分析，啶蟲脒和氟啶蟲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.046 797和0.051 543，變異系數(shù)為0.31%和0.26%。

表1 精密度測量結(jié)果

3.4 準(zhǔn)確度測定 采取添加回收率測定方法來計算本方法的準(zhǔn)確度，稱取5份已知含量的試樣，分別加入不同體積的啶蟲脒和氟啶蟲酰胺標(biāo)樣溶液(用各自單標(biāo)溶液添加)，在上述2.2色譜條件下進(jìn)行測定，測得啶蟲脒的平均回收率為99.87%，氟啶蟲酰胺的平均回收率為100.57%。

表2 添加回收率測定結(jié)果

3.5 線性關(guān)系的測定 將已知含量的標(biāo)樣分別配制成一批已知濃度的梯度溶液(包含分析方法中的檢測濃度)，以濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制相關(guān)曲線。氟啶蟲酰胺線性方程為：y=3E+07x-75 157，線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.999 5；啶蟲脒線性方程為：y= 8E+07x+1E+06，線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.999 5。試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表3)，線性關(guān)系圖(圖6、7)。

表3 氟啶蟲酰胺(啶蟲脒)的線性相關(guān)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖6 啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖7 氟啶蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.6 方法特異性 方法特異性是指分析方法中特定組分產(chǎn)生的特定信號，即在其他成分(如雜質(zhì)、添加劑等)可能存在時，采用的分析方法能夠準(zhǔn)確測定目標(biāo)組分(有效成分、雜質(zhì)等)特性的能力[3]。為確證本方法分析兩種組分的特異性，用二極管陣列檢測器分別對氟啶蟲酰胺和啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品及試樣峰的純度進(jìn)行檢測，結(jié)果(圖8、9)。

圖8 氟啶蟲酰胺標(biāo)樣(左)和試樣(右)峰純度光譜圖

圖9 啶蟲脒標(biāo)樣(左)和試樣(右)峰純度光譜圖

3.7 方法各指標(biāo)結(jié)果判定 按照NY/T 2887-2016《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》要求[3]，判定上述所得線性關(guān)系、精密度、準(zhǔn)確度和峰純度檢測結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求。對于35%氟啶·啶蟲脒水分散粒劑產(chǎn)品，啶蟲脒和氟啶蟲酰胺分析方法精密度要求變異系數(shù)分別<1.79%和2.92%(計算公式：2(1-0.5logC)×0.67，對于啶蟲脒C=0.15，對于氟啶蟲酰胺C=0.20)，線性相關(guān)系數(shù)>0.99，添加回收率要求在97%～103%之間才合乎要求。與上述結(jié)果值相比較可知，該方法線性相關(guān)系數(shù)、精密度和準(zhǔn)確度數(shù)值均符合要求。感興趣組分峰純度指數(shù)均為1.000 000，滿足方法特異性要求，也不存在其他非分析物的干擾。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的準(zhǔn)確度、精密度較高，線性關(guān)系和特異性良好，具有簡便、快速、準(zhǔn)確、分離效果好等特點(diǎn)，是一種比較實(shí)用的方法。