陳皓，付雪蓉，鈕成拓，鄭飛云，劉春鳳，李崎，王金晶 *

(1.工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室(江南大學(xué))，江蘇 無錫 214122;2.江南大學(xué) 釀酒科學(xué)與工程研究室，江蘇 無錫 214122)

RNA是生命的重要組成部分之一，普遍存在于所有生命體中，與生物合成蛋白質(zhì)有著緊密的聯(lián)系[1]。核酸及其衍生物可以開發(fā)二代味精、醬油等新型食品調(diào)味品；用作水稻、瓜果等農(nóng)作物的生長促進(jìn)物質(zhì)；用作制造治療冠心病、腫瘤、心肌梗塞等疾病的藥物等，其工業(yè)化生產(chǎn)就顯得意義非凡。

目前生產(chǎn)RNA應(yīng)用最多的是酵母菌，其RNA含量最高可達(dá)到菌體干重的14%～15%，且易于培養(yǎng)。并且釀酒酵母是一種公認(rèn)的安全(GRAS)微生物，是RNA的首選工業(yè)來源。日本是最早開始研究利用酵母來生產(chǎn)RNA的國家，自20世紀(jì)60年代開始，通過不斷改進(jìn)酵母發(fā)酵生產(chǎn)RNA的工藝，實現(xiàn)了相當(dāng)成熟的技術(shù)應(yīng)用[2]。目前，RNA的各項功能與應(yīng)用擴(kuò)展已經(jīng)引起重視，RNA的高效分離提取對酵母選育工作效率的提升也有著促進(jìn)作用，富含核糖核酸的酵母選育研究在酵母生產(chǎn)RNA領(lǐng)域中具有十分重要的意義，也逐漸成為研究的主要方向之一。

1 酵母RNA的功能及應(yīng)用

酵母RNA不僅在基因表達(dá)和蛋白質(zhì)生物合成方面起著決定性作用，而且具有風(fēng)味功能以及促進(jìn)其他生命體細(xì)胞生命活動等諸多生理功能和相關(guān)應(yīng)用，見圖1。隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，科研工作者已經(jīng)闡明其在生物體內(nèi)的一些作用機(jī)理，它在食品、醫(yī)藥、保健、農(nóng)業(yè)等行業(yè)具有十分廣泛的應(yīng)用前景，未來利用酵母RNA時也將更加具有針對性和開闊性。

圖1 酵母RNA的功能及應(yīng)用[3]

1.1 風(fēng)味功能與應(yīng)用

酵母抽提物是一種天然的調(diào)味品，帶有濃郁的肉香味和酵母特有的香味，既可為食品增香，又可掩蓋食物的異味，同時還具有減鹽、緩酸、除苦的效果。其中酵母RNA在鮮味增強(qiáng)作用中占主導(dǎo)，主要體現(xiàn)在呈味核苷酸——鳥苷酸(IMP)和肌苷酸(GMP)上，IMP呈鮮菇味，GMP呈雞肉鮮味。研究表明IMP和GMP的呈味作用取決于其化學(xué)結(jié)構(gòu)，只有核苷5′-位上的-OH與磷酸基團(tuán)發(fā)生酯化才表現(xiàn)出鮮味活性，而2′-和3′-位上的-OH磷酸酯化無鮮味[4]。

在食品領(lǐng)域中，酵母RNA利用其獨特的風(fēng)味功能可以用作醬油等調(diào)料，在肉類加工、魚類加工、罐頭等生產(chǎn)工序上還可以用作鮮味增強(qiáng)劑以及風(fēng)味掩蓋劑。例如，以一定比例同時添加IMP及GMP不僅能增強(qiáng)產(chǎn)品的甜、鮮等風(fēng)味，而且能改善產(chǎn)品的口感[5]；在方便面調(diào)料中，將酵母抽提物與其他調(diào)料配合使用，香味將更加濃郁[6]；在醬油、調(diào)味醬汁中添加IMP等此類核苷酸，可增強(qiáng)呈味性；在魚罐頭等水產(chǎn)品中添加酵母抽提物，可以掩蓋魚腥味[7]。近年來，我國的醬油、調(diào)味醬產(chǎn)業(yè)發(fā)展穩(wěn)健，是食品工業(yè)中不可分割的組成部分，以酵母RNA為原料生產(chǎn)新一代調(diào)味品以及健康型食品添加劑將成為熱點方向。

1.2 營養(yǎng)功能與應(yīng)用

作為構(gòu)成生命最基本物質(zhì)之一的RNA在生物遺傳、變異、生長發(fā)育以及蛋白質(zhì)合成等方面起著重要作用。核酸功能的改變是一些疾病發(fā)病的重要因素，如惡性腫瘤、病毒性疾病、遺傳性疾病等，所以核酸類藥物對防治這幾類危害性巨大的疾病有著重大的意義。利用酵母RNA來開發(fā)核酸類藥物也正在成為醫(yī)藥保健領(lǐng)域的主流，比如核酸降解產(chǎn)物三磷酸腺苷是一種有效的心肌梗塞搶救藥物，還可以用于冠心病的預(yù)防[8]。除此之外，研究者們在動物實驗中還發(fā)現(xiàn)酵母RNA具有提高免疫力、保護(hù)肝臟、增加食欲以及延緩衰老的功能。核酸型膳食對高血壓、高血脂、動脈粥樣硬化病具有改善功效[9]；外源性ATP對腫瘤增殖和細(xì)胞凋亡分別具有抵抗和誘導(dǎo)作用；三磷酸胞苷(CTP)對突發(fā)性耳聾具有治療痊愈功能[10]。

RNA的保健功能已被挖掘與接受，廣泛應(yīng)用于保健食品、嬰兒奶粉等，由RNA和DNA、維生素C等組合的制品，也得到了市場認(rèn)可并獲得多項專利，酵母來源的RNA，更是用作具有保健、營養(yǎng)強(qiáng)化等功能食品原料的代表。例如，國外已經(jīng)出現(xiàn)許多核酸類保健產(chǎn)品，如核酸健腦素、核酸豆腐、KR核酸等，這些產(chǎn)品已經(jīng)投入市場并受到了消費者的廣泛追捧。國內(nèi)自主研發(fā)的核酸類產(chǎn)品還是鳳毛麟角，所以利用酵母RNA生產(chǎn)核苷酸及其衍生物，并將其應(yīng)用到營養(yǎng)保健品與藥物治療中具有很高的應(yīng)用價值和前景。

1.3 其他功能與應(yīng)用

在食品領(lǐng)域中，除了用作食品添加劑外，還可以把RNA與其他核酸類物質(zhì)相配合制成功能性食品[11]，這種食品不僅可以起到補充核酸；促進(jìn)核酸代謝的作用，而且還可以防止機(jī)體衰老，強(qiáng)化免疫功能，進(jìn)而實現(xiàn)人們追求日常保健的目的。此外，RNA及其降解物的衍生物可以生產(chǎn)抗菌素農(nóng)藥來防治植物病菌，值得一提的是，這類農(nóng)藥無毒害、無污染，是一種環(huán)境友好型的新型農(nóng)藥，對環(huán)境保護(hù)、飲食健康方面有重要的意義。RNA及其水解物還可以作為一種生長素，這種生產(chǎn)素可以促進(jìn)作物生長、結(jié)果，達(dá)到增產(chǎn)的效果，用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上將會帶來很大的經(jīng)濟(jì)效益。甚至對于日常接觸的化妝品，將RNA添加到其中，也可以達(dá)到滋潤皮膚、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成的效果[12]。

綜上可知，目前RNA的應(yīng)用多集中于食品、醫(yī)藥、保健、農(nóng)業(yè)等行業(yè)，所以開發(fā)更多RNA的應(yīng)用價值，甚至擴(kuò)寬RNA的應(yīng)用領(lǐng)域，將會對酵母RNA的研究生產(chǎn)具有非常重要的推動作用。

2 酵母RNA的生產(chǎn)技術(shù)

早期工業(yè)生產(chǎn)中有利用新鮮的動物肝臟來提取RNA，但是由于這種原料存在弊端，且產(chǎn)品收率低、價格昂貴、污染嚴(yán)重，所以應(yīng)當(dāng)采用更經(jīng)濟(jì)合理的RNA制取方法。20世紀(jì)90年代有研究從味精生產(chǎn)廢水中提取核糖核酸[13]，主要是因為這種廢水中含有1%～2%富含RNA的菌體，從而為RNA的制取開辟了一條綠色經(jīng)濟(jì)途徑。國內(nèi)多用淀粉廠廢水、豆腐廢水培養(yǎng)白地霉，然后進(jìn)行RNA提取，這一方法可以達(dá)到改善環(huán)境污染的目的[14]。在分子技術(shù)方面，人們對高效、穩(wěn)定地生產(chǎn)短RNA分子的需求越來越大，有研究對T7RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄法進(jìn)行了改進(jìn)，提出轉(zhuǎn)錄目標(biāo)RNA序列的串聯(lián)重復(fù)序列，再定點切割以獲得高純度和高產(chǎn)量的RNA[15]。此外，還有體內(nèi)發(fā)酵生產(chǎn)RNA等多種新技術(shù)不斷出現(xiàn)。

關(guān)于從酵母菌體內(nèi)提取RNA的研究較多，酵母RNA提取主要分破壁、除蛋白、離心三步進(jìn)行，再調(diào)等電點，沉淀后經(jīng)純化、干燥得到成品。作為提取首要步驟的破壁，此類方法有機(jī)械、化學(xué)和酶法破壁等多種方法，易弋等[16]比較了液氮碾磨、反復(fù)凍融、超聲波、加玻璃珠漩渦振蕩和蝸牛酶酶解5種破壁方法提取酵母菌總RNA的差異，結(jié)果表明反復(fù)凍融和液氮碾磨是其中最為有效且簡便的酵母菌細(xì)胞壁破碎方法。Miguel L的實驗數(shù)據(jù)則表明，冷凍酵母細(xì)胞在超低溫下的機(jī)械破碎是純化完整RNA復(fù)合物的首選裂解方法[17]。

實際實驗中往往需要對數(shù)量較多的菌株進(jìn)行RNA含量的測定，為了提高實驗效率，高效的RNA提取測定方法必定是一個突破口。龍燕等[18]對比Trizol法、熱酚法、酵母RNA提取試劑盒法3種方法，發(fā)現(xiàn)酵母RNA提取試劑盒法是較為有效且簡便的方法。B?hler等[19]的研究創(chuàng)新性地使用了相鎖凝膠(一種可作為物理屏障的惰性材料)分離水相和有機(jī)相來完成脫蛋白，該方法可用于從多個平行生長的培養(yǎng)基中提取RNA，進(jìn)而提高效率。Wang等[20]在室溫下用Fe2(SO4)3進(jìn)行鄰苯二胺的化學(xué)氧化聚合反應(yīng)形成復(fù)合材料，該復(fù)合物作為熒光探針可用于酵母RNA的快速測定。這些新的RNA高效提取技術(shù)有很多優(yōu)點，在后期研究中應(yīng)當(dāng)提倡應(yīng)用這些技術(shù)，提高實驗效率。

3 高RNA酵母菌株的選育

3.1 高RNA酵母菌種的來源及特性

3.1.1 高RNA酵母菌種的來源

不同微生物細(xì)胞內(nèi)的RNA含量差異較大，通常細(xì)菌中RNA含量為5%～25%，酵母為2.7%～15%，霉菌為0.7%～28%。其中，酵母中以熱帶假絲酵母RNA的含量較高，可達(dá)8%以上，但是念珠菌類沒有被歸類為公認(rèn)的安全菌株，因此從熱帶假絲酵母中分離出的RNA作為食品添加劑使用時受到了嚴(yán)格控制。其次，念珠菌菌株的生長速度比釀酒酵母慢，故該類菌株的選育效率和應(yīng)用價值相對較低。在一些發(fā)酵液和某些生產(chǎn)廢液、廢渣中也有一些富含RNA的菌體，這些菌體也可用來制取RNA，達(dá)到綠色環(huán)保的目的。在啤酒酵母中RNA含量可高達(dá)6%～8%，目前則多以啤酒酵母提取RNA，這種方法具有工藝簡單、成本低、應(yīng)用安全性高等優(yōu)點，可作為高RNA酵母選育的優(yōu)選菌株，以及生產(chǎn)RNA的有效途徑。

表1 不同微生物中RNA的含量比較

3.1.2 高RNA酵母菌種的特性

高RNA酵母菌種在細(xì)胞形態(tài)、菌落特征等方面變化不大，細(xì)胞直徑約為2～6 μm，呈橢球形，以出芽方式無性繁殖，在固體培養(yǎng)基平板上28 ℃培養(yǎng)24 h后，為乳白色、不透明、圓形菌落[21]。特殊的是，國外有學(xué)者篩選了一系列熱帶假絲酵母，通過研究發(fā)現(xiàn)含高核苷酸的酵母菌株對鉀比較敏感，但是具體的分子機(jī)制尚不清楚，國內(nèi)也已有一些研究在篩選培養(yǎng)基中加入一定量的氯化鉀來對誘變后的高RNA含量菌株進(jìn)行篩選[22-23]，這對目的菌株的篩選效率提升有較大意義。

通過大量的提取工藝對比發(fā)現(xiàn)，利用培養(yǎng)高RNA含量酵母來生產(chǎn)RNA的方法具有很多優(yōu)勢：第一，酵母RNA含量普遍高于其他微生物，且提取容易，與DNA含量的比例差距也很大；第二，菌體更容易收集，容易生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的RNA；第三，高RNA酵母對培養(yǎng)基條件的要求極低，可連續(xù)培養(yǎng)，脫核酵母可作為優(yōu)質(zhì)的蛋白飼料，經(jīng)濟(jì)效益相對提高。

3.2 高RNA酵母菌種的選育研究

酵母的選育方法有很多，包括自然篩選、雜交、突變、原生質(zhì)體融合以及基因工程等技術(shù)。目前大多采用自然篩選以及不定向誘變法育種高RNA酵母菌株，步驟主要為：菌種的純化和活化，自然培養(yǎng)或誘變育種，RNA等指標(biāo)測定，發(fā)酵復(fù)篩，菌種鑒定。

3.2.1 誘變育種技術(shù)

自然篩選是獲得高RNA酵母的有效途徑，而誘變育種可大幅度提高突變率，從而選育到性能更加優(yōu)良的菌種。以微生物的自然變異作為基礎(chǔ)的生產(chǎn)選種的幾率并不是很高，因為這種變異率太小，一個基因的自然突變頻率僅在10-8～10-10左右。為了加大其變異頻率，可采用物理或化學(xué)因素促進(jìn)誘發(fā)突變。這種以誘發(fā)突變?yōu)榛A(chǔ)的育種就是誘變育種，是迄今為止國內(nèi)外提高菌種產(chǎn)量、性能的主要手段[24]。

陳文明等通過搖瓶初篩以及發(fā)酵罐復(fù)篩從眾多酵母菌株中挑選出了性能最優(yōu)的酵母菌株J-5，RNA含量達(dá)9.86%，為酵母抽提物生產(chǎn)優(yōu)良酵母菌株。進(jìn)一步進(jìn)行誘變選育后，得到了一株RNA含量更高的誘變菌株J-5-9，再通過高密度培養(yǎng)工藝使RNA產(chǎn)量比優(yōu)化前提高了18.22%[25]。倪曉豐等[26]以DES誘變釀酒酵母BY23，篩選出了一株生長性能好、胞內(nèi)RNA含量高的突變株。李小坤的研究中則是采用了常壓室溫等離子體(ARTP)技術(shù)進(jìn)行釀酒酵母誘變育種。為了提高誘變效率和效果，往往還可以采用復(fù)合誘變的方式，比如紫外-氟尿嘧啶復(fù)合誘變法等[27]。

3.2.2 基因工程技術(shù)

基因工程技術(shù)是運用體外DNA各種操作或修改手法獲得目的基因，再借助于病毒、細(xì)菌質(zhì)?；蚱渌d體，將目的基因轉(zhuǎn)移至新的宿主細(xì)胞并使其在新的宿主細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)，或者通過細(xì)胞間的相互作用，使一個細(xì)胞的優(yōu)秀性狀經(jīng)其間遺傳物質(zhì)的交換而轉(zhuǎn)移給另一個細(xì)胞的方法[28]。Yu 等[29]發(fā)現(xiàn)將必要rRNA轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RRN5重新引入到Sup16突變體(FOB1基因編碼rDNA復(fù)制叉屏障網(wǎng)站結(jié)合蛋白被破壞)后導(dǎo)致其與野生型相比RNA含量顯著增加了17%。Chuwattanakul等[30]已經(jīng)開發(fā)了一種三步育種程序來產(chǎn)生具有高RNA含量的釀酒酵母菌株的策略：第一步，構(gòu)建RRN10基因的釀酒酵母破壞子，它是rRNA轉(zhuǎn)錄的UAF(上游激活因子)復(fù)合物的成分之一，并顯示出嚴(yán)重的緩慢生長；第二步，分離出7個抑制因子，恢復(fù)RRN10干擾物的緩慢生長；第三步，RRN10野生型基因被整合到每個原始抑制子的第五染色體中。最后得到的整合子的總核糖核酸含量比野生型菌株高1.4～2.3倍。因為FHL1基因的缺失會導(dǎo)致RNA含量下降80%，IFH1基因編碼的蛋白參與核糖體的生物合成，SSF1/SSF2基因可以促進(jìn)細(xì)胞的遺傳能力，而HRP1基因的過量表達(dá)會導(dǎo)致酵母生長速度緩慢，Guo等[31]則通過同時過量表達(dá)FHL1、IFH1、SSF2和缺失HRP1，構(gòu)建了高RNA產(chǎn)量菌株W112，其RNA含量比親本高38.8%。

3.3 高RNA酵母的高密度培養(yǎng)技術(shù)

高密度培養(yǎng)技術(shù)一般指微生物在液體培養(yǎng)中細(xì)胞群體密度超過常規(guī)培養(yǎng)10倍以上時的生長狀態(tài)的培養(yǎng)技術(shù)[32]。通過提升在一定菌液內(nèi)菌體數(shù)目的方法，來獲得更多的菌體，進(jìn)而獲得更多的產(chǎn)物。相較于常規(guī)培養(yǎng)，高密度培養(yǎng)具有生產(chǎn)率高、生產(chǎn)成本低、培養(yǎng)體積小、過程安全、下游產(chǎn)物處理方便、發(fā)酵周期短、工業(yè)污水少、產(chǎn)物效價高等優(yōu)點[33]。

一般來說，菌體生長越快，個體越大，其RNA含量也越高，隨著生長速率的變化，每個細(xì)胞RNA不同時期差異可達(dá)10倍之多，在快速生長的細(xì)胞尤其是在對數(shù)生長時期RNA的含量可以達(dá)到細(xì)胞重量的30%，此外不能使用發(fā)酵許多周期的酵母，因為它們的活力下降也會影響RNA的產(chǎn)量[34]。

3.3.1 培養(yǎng)基條件優(yōu)化

后期培養(yǎng)中，菌體RNA含量與培養(yǎng)基成分有很大的關(guān)聯(lián)。故根據(jù)酵母菌體生長所需的不同營養(yǎng)成分來選擇合適的、針對性的培養(yǎng)基組分及配比，對菌體內(nèi)核酸含量的提高具有重要的意義。

碳、氮、磷源是微生物培養(yǎng)的三大營養(yǎng)素，對于酵母培養(yǎng)以及RNA的積累具有十分重要的作用。陳文明等[35]對高產(chǎn)RNA釀酒酵母基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基的碳、氮、磷成分進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)釀酒酵母J-5體內(nèi)RNA積累量提高到了12.6%以上。盛建國等[36]發(fā)現(xiàn)，對比原糖液、廢糖蜜等幾種不同的碳源在培養(yǎng)菌株時，以原糖液為碳源，K-79酵母的RNA含量可提升至8.6%。黃芳等選取糖蜜為碳源，酵母粉和氯化銨為混合氮源，NaH2PO4·2H2O為磷源，發(fā)酵培養(yǎng)后的菌體RNA產(chǎn)量比優(yōu)化前提高了35.6%。由于酵母的活動少不了微量元素的參與，所以在培養(yǎng)基中要加入適當(dāng)濃度的鎂、鋅和鐵等微量元素將促進(jìn)酵母的生命活動，該實驗研究得到了MgSO4·7H2O 0.20%、FeSO4·7H2O 0.05%、ZnSO4·7H2O 0.10%的優(yōu)化培養(yǎng)基微量元素配方。

另外，由于生物合成酵母細(xì)胞中的嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸需要谷氨酰胺、天冬氨酸的直接參與，所以在培養(yǎng)基中加入一定含量的谷氨酰胺、天冬氨酸可以使酵母的RNA含量提高。周震等[37]在酵母培養(yǎng)時加入0.3%含量的谷氨酰胺后發(fā)現(xiàn)實驗菌株(熱帶假絲酵母QZN0209)RNA含量提高了30%。

3.3.2 發(fā)酵工藝優(yōu)化

發(fā)酵工藝對于酵母RNA的積累也尤為重要，各種工藝條件都對酵母RNA含量有著或大或小的作用。在氧氣充足的情況下，酵母細(xì)胞具有較高的生長速率，分裂增殖迅速；一定范圍內(nèi)培養(yǎng)溫度的提高，也能使酵母的生長速率相對增大，引起RNA含量升高，并且實驗表明酵母RNA的積累在溫度為32～33 ℃時最有效。所以，為了保證菌株RNA產(chǎn)量的提高，需要在發(fā)酵溫度、接種量、發(fā)酵時間、搖床轉(zhuǎn)速、初始pH、生長期等方面進(jìn)行優(yōu)化，找到最適的工藝條件，這樣才能在后期培養(yǎng)中達(dá)到菌體RNA含量提升的效果。

俞燦等通過利用優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基和流加補料工藝，實現(xiàn)了誘變選育的釀酒酵母菌株J-5-9的高密度發(fā)酵，酵母RNA含量提高了18.22%。黃芳等的研究則驗證了核酸含量在對數(shù)生長期含量最高的結(jié)論，該實驗發(fā)現(xiàn)在酵母生長0～3 h時，RNA含量開始逐漸積累，3 h時含量最高。Zhang等[38]則通過在搖床發(fā)酵條件下對啤酒酵母菌QH633的發(fā)酵培養(yǎng)進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后酵母RNA的含量增加了34.97%。

4 總結(jié)與展望

酵母RNA及其降解產(chǎn)物核苷酸在醫(yī)藥、保健品和食品加工業(yè)方面有非常廣泛的應(yīng)用前景，但由于目前RNA產(chǎn)品的質(zhì)量和價格因素限制了它的使用。所以,如何高效提取酵母RNA，并提高其純度與產(chǎn)量成為科技工作者研究的重要方向。

通過上述研究分析，實現(xiàn)酵母生產(chǎn)RNA的最有效、最高產(chǎn)途徑主要有以下幾個方面：富含核糖核酸的原始酵母菌株的篩選；高效率針對性篩選培養(yǎng)基的設(shè)計；高效且保證質(zhì)量的RNA提取測定；后期培養(yǎng)條件優(yōu)化；高密度發(fā)酵培養(yǎng)工藝的采用。以此來達(dá)到盡可能從出發(fā)菌株到后期培養(yǎng)不斷得到更高的RNA產(chǎn)量的目的。

不難發(fā)現(xiàn)，高效的篩選方法也是目前高RNA酵母中選育工作較難解決的問題，對于要從數(shù)量眾多的酵母篩選出目的菌株的工作來說，傳統(tǒng)的高核酸酵母篩選工作無法直接反映RNA含量，可謂工作量繁重。目前除了部分研究者利用高RNA酵母氯化鉀敏感性來直接篩選外，一些其他方法還處于創(chuàng)新階段，所以設(shè)計出可以直接篩選出目的菌株的培養(yǎng)基或是利用其他高效篩選技術(shù)體系將會成為一個重點方向。

高RNA酵母菌種選育的常用技術(shù)中也存在一些弊端，比如誘變育種技術(shù)雖然對設(shè)備要求低，操作也較為方便，但是突變方向往往不確定。目前在酵母選育領(lǐng)域還有很多其他高效準(zhǔn)確的技術(shù)，尚未應(yīng)用到高RNA酵母選育研究上來，但是這些技術(shù)的獨特優(yōu)勢可以作為在高RNA酵母選育方面的創(chuàng)新源泉，比如基因組重排技術(shù)、原生質(zhì)體融合技術(shù)、進(jìn)化工程選育技術(shù)、代謝工程技術(shù)等。將這些技術(shù)應(yīng)用到高RNA酵母選育研究中，在提高RNA產(chǎn)量的同時，還能賦予酵母其他如耐受性等優(yōu)良性狀，同時對實現(xiàn)培養(yǎng)與篩選便利性具有十分重要的推動作用，從而更好地加快高RNA酵母的選育進(jìn)程。