江民海

江西省都昌縣疾病預(yù)防控制中心 （江西九江 332600）

艾滋病是對(duì)人體危害較大的免疫缺陷型疾病，是因感染人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）所致，可經(jīng)性接觸、血液及母嬰傳播。隨著病情發(fā)展，患者的免疫系統(tǒng)遭到破壞，可出現(xiàn)反復(fù)感染，甚至危及患者生命安全[1]。艾滋病防治為目前全世界關(guān)注的重要課題，我國(guó)艾滋病防治工作也面臨嚴(yán)峻考驗(yàn)，早發(fā)現(xiàn)、早治療是艾滋病防治工作的基本原則和有效手段[2]。在日常艾滋病防治工作中，血清學(xué)HIV抗體檢測(cè)的應(yīng)用廣泛，其中較為常見(jiàn)的檢測(cè)方法為膠體金快速法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。本研究比較膠體金快速法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在HIV 抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1—12月于都昌縣疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行艾滋病咨詢檢測(cè)的58例疑似HIV 感染患者，其中男43例，女15例；年齡27～44歲，平均（35.56±0.66）歲；體質(zhì)量45～82 kg，平均（58.42±2.50）kg。所有患者均簽署HIV檢測(cè)知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：有高危行為史并出現(xiàn)HIV 感染的某些癥狀，如長(zhǎng)期發(fā)熱、腹瀉、淋巴結(jié)增大、體質(zhì)量持續(xù)性減輕等，但并未確診HIV 感染；意識(shí)清晰、能正常交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期服用過(guò)退燒藥、抗病毒治療藥物；肝腎功能異常；已確認(rèn)為HIV 陽(yáng)性或陰性；精神疾病患者；處于妊娠或哺乳期的婦女。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集及處理

用不含抗凝劑的真空采血管抽取被檢測(cè)者10 ml 靜脈血，分離血清2～3 ml，平均分為兩份，分別置于兩支血清管中，一份用于本研究檢測(cè)，一份送至九江市疾病預(yù)防控制中心HIV 確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行免疫印跡法確證試驗(yàn)。

1.2.2 膠體金快速法

膠體金快速法試劑為廣州市萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，在有效期內(nèi)；取待檢血清3～4滴（80 μl ）置于膠體金快速反應(yīng)板加樣孔內(nèi)，滴加1滴樣本稀釋液，于室溫（25 ℃）下靜置，10～15 min內(nèi)判定結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)區(qū)及質(zhì)控區(qū)各出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線為陽(yáng)性，僅在質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)區(qū)為陰性，質(zhì)控區(qū)無(wú)紅色反應(yīng)線出現(xiàn)為結(jié)果無(wú)效。

1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑為珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)，在有效期內(nèi)。（1）加樣：將預(yù)包被板條固定于板架，在孔內(nèi)加入50 μl 待檢血清，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照各3孔，分別加入50 μl 對(duì)照品。（2）溫育：蓋上封板膜，置于溫度（37±1）℃環(huán)境下溫育60 min。（3）洗滌：棄去孔內(nèi)液體，將洗滌液注滿各孔，靜置時(shí)間不超過(guò)60 s，再棄去孔內(nèi)洗滌液，重復(fù)此步驟5次后拍干。（4）加酶：各孔內(nèi)加入酶標(biāo)記物50 μl 。（5）再次溫育：蓋上封板膜，置于溫度（37±1）℃環(huán)境下溫育30 min。（6）再次洗滌：棄去孔內(nèi)液體，將洗滌液注滿各孔，靜置時(shí)間不超過(guò)60 s，再棄去孔內(nèi)洗滌液，重復(fù)此步驟5次后拍干。（7）顯色：每個(gè)孔內(nèi)都加入底物緩沖液50 μl ，再加入底物液50 μl ，振蕩混勻，蓋上封板膜，置于溫度（37±1）℃環(huán)境下溫育30 min。（8）終止：每個(gè)孔內(nèi)加入終止液50 μl ，混勻。（9）讀值：用酶標(biāo)儀（北京普朗DNM9602）在單波長(zhǎng)450 nm 下讀取各孔A 值。（10）結(jié)果判斷：樣本A 值≥臨界值為陽(yáng)性，<臨界值為陰性，臨界值=陰性對(duì)照平均A 值+0.150。

1.3 觀察指標(biāo)

以免疫印跡法的檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種方法的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

九江市疾病預(yù)防控制中心HIV 確證實(shí)驗(yàn)室采用免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，58例疑似感染患者中，陽(yáng)性45例，陰性13例。以免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于膠體金快速法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1～2。

表1 兩種方法的檢測(cè)結(jié)果（例）

3 討論

人體感染HIV 后，自身免疫系統(tǒng)遭受嚴(yán)重破壞，發(fā)生各種感染的風(fēng)險(xiǎn)極大，嚴(yán)重威脅患者的生命安全，目前尚無(wú)根除患者體內(nèi)病毒的有效方法[3-4]；但因HIV潛伏期較長(zhǎng)，甚至可10年之久無(wú)明顯癥狀，在一定程度上增大了診斷難度。因此，如何快速、準(zhǔn)確地檢出HIV 感染患者，及時(shí)切斷傳播途徑，減少感染，為目前艾滋病防治工作的關(guān)鍵[5]。

表2 兩種方法的診斷效能比較（%）

目前，免疫印記法是臨床上檢測(cè)HIV 感染的金標(biāo)準(zhǔn)，其兼具信噪比高、無(wú)潛在假陽(yáng)性干擾的特點(diǎn)；但該方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室軟硬件設(shè)施及檢驗(yàn)人員技術(shù)要求較高，短時(shí)間內(nèi)較難普及，因此日常篩查及臨床上急需環(huán)境適應(yīng)性更強(qiáng)的檢測(cè)方法。

近年來(lái)，膠體金快速法在HIV 抗體檢測(cè)中被廣泛應(yīng)用。該方法是將膠體作為標(biāo)記物，檢測(cè)時(shí)不需使用儀器設(shè)備，可直接通過(guò)肉眼觀察結(jié)果，成本較低，且檢測(cè)時(shí)間較短，能快速獲取檢測(cè)結(jié)果；但該方法對(duì)溫度有一定的要求，溫度過(guò)高或過(guò)低均會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，而且受檢驗(yàn)人員的主觀判斷影響，易出現(xiàn)假陽(yáng)性與假陰性。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是目前臨床實(shí)驗(yàn)室常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法之一，具有操作簡(jiǎn)單、設(shè)備普及的優(yōu)勢(shì)，在各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)均有應(yīng)用。其檢測(cè)原理為將待測(cè)抗原或抗體先固定于固相載體表面，再用酶標(biāo)記的抗原或抗體與已被固定的相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生特異性反應(yīng)，最后加底物顯色，用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。有研究顯示，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)?zāi)苤苯訖z測(cè)出血液樣本中的HIV 抗體，靈敏度與特異度均較高[6-7]。本研究結(jié)果顯示，以免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于膠體金快速法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與以上研究結(jié)果相似。本研究使用的酶聯(lián)免疫吸附為兩步法試驗(yàn)，一步法試驗(yàn)?zāi)軌蚶糜H和力較高的抗原，但仍無(wú)法避免鉤狀效應(yīng)（即HOOK 效應(yīng)，是指由于抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致的假陰性現(xiàn)象，其中抗體過(guò)量為前帶效應(yīng)，抗原過(guò)量為后帶效應(yīng)）帶來(lái)的漏檢問(wèn)題；在此基礎(chǔ)上實(shí)施二步檢驗(yàn)，加入標(biāo)本與包被固相抗原反應(yīng)后洗滌，未被結(jié)合的待測(cè)抗體被洗掉后再加入酶標(biāo)記抗原，進(jìn)而可有效提升檢測(cè)準(zhǔn)確度。

綜上所述，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)HIV 抗體的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于膠體金快速法，有利于提高艾滋病的早期診斷率。