潘成娜，楊小苗，懷建國

(蕪湖市第一人民醫(yī)院病理科，安徽 蕪湖 241000)

根據(jù)國際權(quán)威組織的報(bào)告，肺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，病死率也是高居不下，嚴(yán)重威脅著人類的健康[1-2]。最重要的原因是大多數(shù)患者在確診時(shí)已經(jīng)是晚期，5年生存率較低，僅為10%左右[3]，如果能早發(fā)現(xiàn)、早診斷并行手術(shù)治療，可將患者的5年生存率明顯提高，達(dá)到50%以上[4]。目前，臨床上最常用、最便捷的肺癌早期診斷技術(shù)是痰脫落細(xì)胞學(xué)涂片檢查，但痰涂片中所能收集的腫瘤細(xì)胞較少，且易發(fā)生重疊、退變、血液覆蓋等，導(dǎo)致較高的漏診率[5]。因此，研究一種更有效且便捷的早期診斷技術(shù)對(duì)其預(yù)后有著重要的臨床價(jià)值。近年來，痰沉渣細(xì)胞蠟塊技術(shù)在病理科慢慢推廣開來，該方法可收集到標(biāo)本中的幾乎全部的細(xì)胞，也能去除痰液中雜質(zhì)對(duì)結(jié)果的影響，并且可以加做特殊染色及免疫組化，進(jìn)一步提高了肺癌的檢出率[6]，但其缺點(diǎn)是檢查時(shí)間較長、費(fèi)用高。本研究旨在將細(xì)胞蠟塊技術(shù)用于痰液細(xì)胞沉渣檢驗(yàn)中，通過分析痰沉渣細(xì)胞蠟塊與痰涂片在肺癌早期診斷中檢出率與準(zhǔn)確率的差異，進(jìn)而探討痰沉渣細(xì)胞蠟塊技術(shù)對(duì)肺癌早期診斷的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2019年12月本院就診的共251例影像學(xué)檢查提示肺占位的患者進(jìn)行回顧性分析。其中男152例，女99例，男女比例1.54∶1；年齡31～79歲，平均(59.7±9.8)歲。對(duì)上述251例疑似肺癌患者同時(shí)進(jìn)行痰涂片及痰沉渣細(xì)胞石蠟切片進(jìn)行病理檢查并記錄結(jié)果。251例疑似患者經(jīng)支氣管鏡活檢、穿刺活檢、手術(shù)病理進(jìn)行確診，最終有212例患者診斷為肺癌，39例患者診斷為肺良性疾病。

1.2標(biāo)本的收集 臨床醫(yī)生指導(dǎo)患者晨起吐掉第一口痰并漱口，再用力咳出深處的痰液，收集于病理科專門的無菌容器中，每例患者取2份，每份痰量3～5 mL，1 h內(nèi)送至病理科，連送3 d。

1.3標(biāo)本的制作

1.3.1痰涂片法 隨機(jī)取患者痰液中的1份，選取標(biāo)本中帶有血絲、膿樣物或絲狀物的痰液涂于載玻片上，自然風(fēng)干后再用95%乙醇固定，時(shí)間15～30 min，再行蘇木精-伊紅(HE)染色及中性樹膠封片。

1.3.2痰沉渣細(xì)胞石蠟切片法 取患者另一份送檢痰液，向其中加入0.3～0.5 mL的二硫蘇糖醇，充分混合后置于振蕩器上振蕩10 min，將液體倒入離心管中，以3 000 r/min離心10 min，棄去上清液后加入細(xì)胞清洗劑，再次以3 000 r/min離心10 min，棄去上清液后加入10%中性福爾馬林溶液20 mL，固定1 h后再次以上述方法離心10 min，加入95%乙醇再次離心，靜置1 h后去除上清液，取細(xì)胞塊置于包埋紙中依次置于75%、85%、95%、100%乙醇中行脫水處理，二甲苯處理45 min，應(yīng)用液體石蠟浸透后包埋成蠟塊，4 μm連續(xù)切片，切片置于85 ℃烤箱中烤片20 min，脫蠟后再進(jìn)行HE染色及中性樹膠封片。

1.4細(xì)胞學(xué)診斷 將涂片與切片掃描后采用雙盲法進(jìn)行讀片，讀片醫(yī)師由2位以上高年資病理診斷醫(yī)師組成，采用3級(jí)分類診斷法將診斷結(jié)果分為陽性、可疑、陰性。同一患者的3次標(biāo)本中若有1次以上為陽性則診斷為陽性，若3次均為可疑也劃入陽性組。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)算兩種診斷方法的Youden指數(shù)，并運(yùn)用ROC曲線評(píng)價(jià)2種方法對(duì)初診肺癌的診斷價(jià)值，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩種診斷方法的診斷結(jié)果 251例患者的組織病理學(xué)診斷結(jié)果與痰涂片及痰沉渣細(xì)胞蠟塊法診斷結(jié)果見表1、圖1～2。

表1 痰涂片和痰沉渣細(xì)胞蠟塊切片診斷結(jié)果

圖1 痰涂片(HE染色，10×)

圖2 痰細(xì)胞蠟塊(HE染色，10×)

2.2兩種診斷方法的診斷價(jià)值對(duì)比 痰沉渣細(xì)胞蠟塊切片的靈敏度(93.40%)、準(zhǔn)確度(94.02%)、陽性預(yù)測(cè)值(99.50%)、陰性預(yù)測(cè)值(73.08%)均明顯高于痰涂片的33.96%、43.03%、96.00%、20.45%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩者的特異度分別為97.44%、92.31%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 兩種診斷方法對(duì)肺癌的診斷價(jià)值(%)

2.3涂片與切片的ROC曲線分析 痰涂片診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.631(95%CI0.548～0.715)，痰沉渣細(xì)胞蠟塊診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.954(95%CI0.919～0.989)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3 討 論

肺癌有著較高的發(fā)病率與病死率，嚴(yán)重危害人類生命和健康[7]。早診斷、早治療可明顯延長肺癌的生存期，對(duì)降低其病死率有著重要的意義，但早期肺癌缺乏特異性臨床表現(xiàn)，給確診帶來了困難，目前低劑量CT、腫瘤標(biāo)志物、痰涂片是早期篩查肺癌的主要方法[8]，但肺癌的確診仍然要依靠病理技術(shù)。病理學(xué)細(xì)胞蠟塊技術(shù)已經(jīng)開展數(shù)十年，是腫瘤診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域也有著較高的地位，但目前開展痰液細(xì)胞蠟塊技術(shù)的醫(yī)院少之又少。本研究對(duì)痰涂片與痰沉渣細(xì)胞蠟塊切片在肺癌診斷的臨床價(jià)值進(jìn)行了對(duì)比。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，連續(xù)3次痰涂片檢查對(duì)周圍型肺癌的診斷率為50%，對(duì)中央型肺癌的診斷率高達(dá)80%[9-10]，但本研究中Youden指數(shù)僅為26.27%，總結(jié)原因?yàn)樵跇?biāo)本收集、處理過程、制作過程中易受到外界因素影響，會(huì)出現(xiàn)黏液成分過多、癌細(xì)胞未被涂片、壞死物較多、厚薄不均、癌細(xì)胞未經(jīng)固定處理而變性、其他雜質(zhì)掩蓋癌細(xì)胞從而影響檢測(cè)陽性率[6，11]。痰沉渣細(xì)胞蠟塊技術(shù)可很好地彌補(bǔ)痰涂片的相關(guān)不足，對(duì)標(biāo)本的采集、制片、染色等階段進(jìn)行改進(jìn)，使得病變細(xì)胞的收集率、診斷的陽性率、準(zhǔn)確率均得到了顯著地提高，國內(nèi)外也有類似的文獻(xiàn)報(bào)道[12-13]。本研究中痰沉渣細(xì)胞蠟塊切片診斷肺癌的準(zhǔn)確度、靈敏度分別為94.02%、93.40%，顯著高于痰涂片的43.03%、33.96%。此外，本研究分析了兩種技術(shù)的ROC曲線，痰涂片診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.631(95%CI0.548～0.715)，痰沉渣細(xì)胞蠟塊診斷肺癌的ROC曲線下面積為0.954(95%CI0.919～0.989)，不難看出痰沉渣細(xì)胞蠟塊法在肺癌早期診斷的效能較痰涂片法明顯提升。

痰液細(xì)胞蠟塊是在普通細(xì)胞學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)上，把痰液中有形細(xì)胞成分通過離心濃縮制作成蠟塊，可以進(jìn)一步行HE染色，鏡下細(xì)胞比較集中，類似于組織切片且背景干凈，易于讀片，且可以連續(xù)切片進(jìn)行免疫組化染色及其他特殊檢查等，以微小的創(chuàng)傷代價(jià)獲得較明確的病理診斷，對(duì)于那些難以取得活檢組織及復(fù)發(fā)的中晚期腫瘤患者優(yōu)點(diǎn)更為突出[14]。與傳統(tǒng)痰涂片相比，能明顯提高肺癌的檢出率，并能對(duì)肺癌進(jìn)行進(jìn)一步的定性分類及分子水平檢測(cè)，優(yōu)點(diǎn)為無明顯禁忌證及不良反應(yīng)，診斷費(fèi)用低，為臨床開展微創(chuàng)性診療技術(shù)提供最權(quán)威的病理診斷保證。在董志廣[15]、HEYMANN 等[16]的研究中表明細(xì)胞蠟塊切片檢查與免疫組化染色聯(lián)合診斷惡性腫瘤的最佳組合，說明細(xì)胞蠟塊切片比細(xì)胞涂片有較大的診斷優(yōu)勢(shì)。

痰液標(biāo)本易于收集，有著無創(chuàng)、對(duì)標(biāo)本量要求不高的特點(diǎn)，為制作蠟塊提供了堅(jiān)實(shí)的現(xiàn)實(shí)基礎(chǔ)。痰沉渣細(xì)胞蠟塊技術(shù)在肺癌的早期診斷中有著較高的靈敏度、準(zhǔn)確度及較高的診斷效能，隨著肺癌治療方式的不斷更新，痰沉渣細(xì)胞蠟塊可為后期進(jìn)行特殊染色、基因檢測(cè)提供可行性，隨著病理技術(shù)的不斷進(jìn)展，肺癌的治療方式也呈現(xiàn)出多元化，為肺癌患者在不斷進(jìn)步的醫(yī)療進(jìn)程中增加生存機(jī)會(huì)，為肺癌的防治奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，是值得推廣的技術(shù)之一。