王 麗，嚴(yán)志銳，黃丹菊，夏耀雄

昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，云南省腫瘤醫(yī)院 放射治療科，云南昆明 650118

乳腺癌為女性癌癥死亡的第一大原因[1]。三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)約占所有乳腺癌發(fā)病率的15%[2]。由于分子表達(dá)模式的原因，TNBC不能用激素或Her-2靶向治療，目前化療和免疫治療是唯一可用的全身治療策略。但并非所有患者都能從化療中獲益[3]。多藥耐藥(multi-drug resistance，MDR)的出現(xiàn)是化療失敗的主要原因。有研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞可以通過(guò)外泌體將化療藥物阿霉素排出到細(xì)胞外培養(yǎng)基[4]。還有大量研究表明，膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABC超家族編碼的重要藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp蛋白可通過(guò)外泌體從腫瘤耐藥細(xì)胞轉(zhuǎn)移到敏感細(xì)胞，導(dǎo)致敏感細(xì)胞獲得性耐藥[5-6]。外泌體還能通過(guò)介導(dǎo)某些功能蛋白或miRNA的轉(zhuǎn)移對(duì)細(xì)胞耐藥進(jìn)行間接調(diào)控[7]；轉(zhuǎn)移耐藥細(xì)胞的某些促細(xì)胞增殖、遷移和抗凋亡的信號(hào)分子至受體細(xì)胞[8-9]；轉(zhuǎn)移藥物代謝酶誘導(dǎo)藥物失活[10]。眾所周知，Rab家族控制了幾乎所有的膜轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，包括囊泡出芽、外泌體釋放以及與受體膜的對(duì)接和融合[11]。其中，Rab27家族與外泌體的釋放密切相關(guān)，包括Rab27a和Rab27b這兩個(gè)不同的分子[12]。已有研究表明Rab27a和Rab27b能夠控制包括乳腺癌細(xì)胞在內(nèi)的多種不同類型腫瘤細(xì)胞的外泌體分泌[13-14]。但另外一項(xiàng)對(duì)乳腺癌細(xì)胞4T1和TS/A的研究表明，Rab27a才是外泌體分泌所必需的，而非Rab27b[15]。本研究通過(guò)靶向與外泌體分泌密切相關(guān)的Rab27家族，探究該家族在三陰性乳腺癌細(xì)胞MDR過(guò)程中的具體作用，期望為因MDR導(dǎo)致化療失敗的TNBC患者提供可能的分子治療方案。

材料與方法

1 主要試劑與儀器 三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDAMB-231購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物所細(xì)胞庫(kù)；DMEM高糖培養(yǎng)基、外泌體去除胎牛血清(fetal calf serum，F(xiàn)BS)購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；外泌體提取試劑盒購(gòu)自美國(guó)Life公司；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑、Opti-MEM培養(yǎng)基以及本研究中用到的siRNA均購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司；CCK-8試劑盒、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司；Trizol購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司；熒光定量分析試劑盒購(gòu)自ABI公司；RIPA裂解液購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司；Rab27A、Rab27B、CD9、MHCⅡ和GAPDH蛋白抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；順鉑、阿霉素和紫杉醇均購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；熒光定量PCR儀(ABI)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(TECAN)；光學(xué)顯微鏡(奧林巴斯)；二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo熱電)；NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)(Thermo熱電)；流 式細(xì)胞儀(BD)。

2 細(xì)胞培養(yǎng)及外泌體的提取 MDA-MB-231細(xì)胞使用含10% FBS、1%雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基置于37℃、5% CO2條件的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2 d換液。收取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好、匯合程度達(dá)到70% ～80%時(shí)的細(xì)胞上清液，采用外泌體提取試劑盒分離提取外泌體，隨后使用NanoDrop測(cè)定外泌體蛋白質(zhì)濃度后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果無(wú)法立即進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，提取出的外泌體 重懸在PBS緩沖液中，保存于-80℃冰箱。

3 Rab27a和Rab27b siRNA轉(zhuǎn)染 按照Lipofectamine RNAi-MAX轉(zhuǎn)染試劑盒說(shuō)明書(shū)，添加10 nmol/L siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，24 h后收集細(xì)胞檢測(cè)干擾效率。關(guān)于siRNA的詳細(xì)信息可通過(guò)ID號(hào)登陸https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html搜索查詢，Rab27A siRNA ID號(hào)為HSS108985，Rab27B siRNA的ID號(hào)為HSS184177，陰性對(duì)照N C siRNA的ID號(hào)為D-001810-10。

4 Western blot檢測(cè)Rab27家族蛋白的表達(dá)以及外泌體分泌的定量 使用RIPA裂解液提取細(xì)胞和組織中的總蛋白，用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)所得總蛋白濃度后，取等量總蛋白進(jìn)行SDSPAGE凝膠電泳分離不同大小蛋白，隨后將目的蛋白采用半干轉(zhuǎn)膜法轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，一抗標(biāo)記目的蛋白，二抗與一抗結(jié)合顯色，洗凈后用化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)蛋白條帶，以條帶的深淺反映Rab27a和Rab27b蛋白表達(dá)量的變化。外泌體分泌的定量方法與上述方法基本一致，樣本使用提取出的外泌體，最后通過(guò)用圖像分析軟件Image J對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白CD9和MHC Ⅱ及內(nèi)參蛋白(GAPDH)條帶進(jìn)行灰度值測(cè)試，以CD9和MHCⅡ /內(nèi)參灰度值比值表示外泌體的相對(duì)分泌量。

5 CCK-8檢測(cè)不同濃度藥物處理細(xì)胞增殖情況 待轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期并且匯合程度達(dá)到70% ～80%時(shí)，消化重懸細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后，每組設(shè)5復(fù)孔，共設(shè)18個(gè)不同藥物濃度處理組和1個(gè)不含藥物的完全培養(yǎng)基對(duì)照組，按104/孔的細(xì)胞密度重懸細(xì)胞鋪板于96孔板內(nèi)，培養(yǎng)24 h后按CCK-8試劑盒說(shuō)明書(shū)加入CCK-8試劑孵育細(xì)胞，隨后直接使用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD450的數(shù)值表示各組細(xì)胞的增殖情況。18個(gè)不同藥物濃度處理組的設(shè)置：分別含0.03 μg/mL、0.3 μg/mL、3 μg/mL、7.5 μg/mL、15 μg/mL和30 μg/mL順鉑的完全培養(yǎng)基6組；分別含0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2.5 μg/mL、10 μg/mL和25 μg/mL阿霉素的完全培養(yǎng)基6組；以及分別含2.67 μg/L、5.34 μg/L、10.67 μg/L、21.35 μg/L、42.70 μg/L和8 5.39 μg/L紫杉醇的完全培養(yǎng)基6組。

6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率 待轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期并且匯合程度達(dá)到70% ～80%時(shí)，消化重懸細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后，每組設(shè)3復(fù)孔，分別用含7.5 μg/mL順鉑、2.5 μg/mL阿霉素、10.67 μg/L紫杉醇的完全培養(yǎng)基，以及不含藥物的完全培養(yǎng)基，按105/孔的細(xì)胞密度重懸細(xì)胞鋪板于6孔板內(nèi)，每組設(shè)3復(fù)孔，培養(yǎng)24 h后按照細(xì)胞凋亡與壞死試劑盒說(shuō)明書(shū)收集細(xì)胞染色孵育，隨后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)處理好的細(xì)胞，以處于特定象限內(nèi)的細(xì)胞比率表示各組細(xì)胞的凋亡 率。

7 qPCR檢測(cè)耐藥相關(guān)基因的表達(dá) Trizol法提取細(xì)胞中的總RNA，參照ABI High capacity cDNA reverse transcription反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA的合成。以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，按照ABI公司的熒光定量分析試劑盒(SYBR Select Master Mix)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(2×) 10 μL，上、下游引物各1 μL，cDNA模板2 μL，RNase-free water 6 μL，總體積20 μL。反應(yīng)結(jié)束后，以GAPDH為內(nèi)參使用2-ΔΔCt法分別計(jì)算IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量。內(nèi)參基因G APDH和其他4個(gè)基因的引物序列見(jiàn)表1。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所用引物Tab. 1 Real-time quantity of PCR primers

8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS22.0進(jìn)行分析。計(jì)量數(shù)據(jù)(均為正態(tài)或輕微偏態(tài))以± s表示，兩組間的差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。結(jié)果用軟件Graphpad Prism 6作圖。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

結(jié) 果

1 抑制Rab27家族對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞外泌體分泌的影響 熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)siRNA干預(yù)細(xì)胞24 h后，結(jié)果顯示siRNA-RAB27a和siRNA-RAB27b序列在基因(圖1A)和蛋白(圖1B)表達(dá)水平上均能夠有效抑制Rab27a和Rab27b表達(dá)。隨后對(duì)外泌體含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)抑制Rab27a表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞的外泌體分泌量與對(duì)照組、siRNA-RAB27b組比較均降低(P＜ 0.05)；但抑制Rab27b表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞外泌體分泌量與對(duì)照組相比差異不大，CD9的相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞ 0.05)，MHC Ⅱ的相對(duì)表達(dá)量降低(P＜ 0.05)。提示siRNA-RAB27a有效抑制了MDA-MB-231細(xì)胞的外泌體分泌，而siRNA-RAB27b對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的外泌體分泌雖然有抑制作用，但作用較小。見(jiàn)圖2。

圖1 siRNA-RAB27a和siRNA-RAB27b轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后對(duì)Rab27a和Rab27b基因和蛋白表達(dá)的影響(aP ＜ 0.05，vs對(duì)照組)A：轉(zhuǎn)染siRNA-RAB27a和siRNA-RAB27b后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞Rab27a和Rab27b蛋白表達(dá)的影響(n=6)；B：轉(zhuǎn)染siRNA-RAB27a和siRNA-RAB27b后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞Rab27a和Rab27b基因mRNA表達(dá)的影響(n=9)Fig.1 Effects of siRNA-RAB27a and siRNA-RAB27b on the expression level of Rab27a and Rab27b genes and proteins after transfection of MDA-MB-231 cells (bP ＜ 0.05, vs control)A: Effects of transfection of siRNA-RAB27a and siRNARAB27b on the protein expression of Rab27a and Rab27b in MDA-MB-231 cells (n=6); B: Effects of transfection of siRNA-RAB27a and siRNA-RAB27b on the mRNA expression of Rab27a and Rab27b genes in MDA-MB-231 cells(n=9)

圖2 抑制Rab27a和Rab27b表達(dá)后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞外泌體分泌量的影響(aP ＜ 0.05，vs對(duì)照組；bP ＜ 0.05，vs si-RAB27a組。n=6)Fig.2 Effect of inhibiting Rab27a and Rab27b expression on exosome secretion of MDA-MB-231 cells (aP ＜ 0.05, vs EXOControl;bP ＜ 0.05, vs EXOsi-RAB27a. n=6)

2 抑制Rab27家族對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞耐藥的影響 分別用不同濃度的順鉑、阿霉素和紫杉醇處理MDA-MB-231細(xì)胞并分別抑制Rab27a和Rab27b的MDA-MB-231細(xì)胞48 h后，用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)藥物濃度為0時(shí)，抑制Rab27a后MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力會(huì)受到一定影響，而抑制Rab27b對(duì)細(xì)胞增殖能力無(wú)影響。隨著三組藥物濃度的升高，可以看出Rab27b被抑制后的MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)藥物更加敏感，而抑制Rab27a后的MDA-MB-231細(xì)胞增殖情況受到藥物濃度升高的影響，但影響程度小于抑制Rab27b組。尤其在三組藥物的最高濃度組可以明顯看到，抑制Rab27b組的細(xì)胞受藥物干預(yù)后的增殖能力低于抑制Rab27a組，說(shuō)明抑制Rab27家族使三陰性乳腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑、阿霉素和紫杉醇的藥物耐受程度降低，并且抑制Rab27b對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞藥物耐受程度的降低作用強(qiáng)于抑制Rab27a。見(jiàn)圖3。

圖3 抑制Rab27a和Rab27b表達(dá)后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞耐藥的影響(n=9)A：抑制Rab27a和Rab27b表達(dá)后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞在不同濃度順鉑處理下細(xì)胞增殖能力的影響；B：抑制Rab27a和Rab27b表達(dá)后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞在不同濃度阿霉素處理下細(xì)胞增殖能力的影響；C：抑制Rab27a和Rab27b表達(dá)后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞在不同濃度紫杉醇處理下細(xì)胞增殖能力的影響Fig.3 Effect of inhibition of Rab27a and Rab27b expression on drug resistance of MDA-MB-231cells (n=9)A: Effects of inhibiting the expression of Rab27A and Rab27B on the proliferation ability of MDA-MB-231 cells treated with different concentrations of cisplatin; B: Effects of inhibiting the expression of Rab27A and Rab27B on the proliferation ability of MDA-MB-231 cells treated with different concentrations of Dox; C: Effects of inhibiting the expression of Rab27A and Rab27B on the proliferation ability of MDA-MB-231 cells treated with different concentrations of PTX

3 抑制Rab27家族對(duì)不同藥物處理下MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的影響 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示用順鉑處理的MDA-MB-231細(xì)胞抑制Rab27a和Rab27b后，與正常MDA-MB-231細(xì)胞相比，細(xì)胞凋亡率均顯著上升(P＜ 0.05)，抑制Rab27b組的細(xì)胞凋亡率顯著高于抑制Rab27a組(P＜ 0.05)。使用阿霉素處理細(xì)胞后的結(jié)果與順鉑類似，抑制Rab27a組和抑制Rab27b組的細(xì)胞凋亡率均顯著高于對(duì)照組(P＜ 0.05)，并且抑制Rab27b組的細(xì)胞凋亡率同樣顯著高于抑制Rab27a組(P＜ 0.05)。紫杉醇處理細(xì)胞后，雖然抑制Rab27a組和抑制Rab27b組的細(xì)胞凋亡率與順鉑和阿霉素類似，但抑制Rab27a組與抑制Rab27b組的細(xì)胞凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0 .05)。見(jiàn)圖4。

4 抑制Rab27家族對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞耐藥相關(guān)基因表達(dá)的影響 qPCR法檢測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞在Rab27a和Rab27b被抑制后的耐藥相關(guān)基因IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6 mRNA表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)si-NC組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但抑制Rab27家族后IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6 mRNA的表達(dá)量與對(duì)照組相比均顯著下降(P＜0.05)。抑制Rab27b組IL-6基因的表達(dá)顯著低于抑制Rab27a組(P＜ 0.05)，而EGR1基因的表達(dá)在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，ABCC3和ABCC6基因在抑制Rab27b組的表達(dá)量顯著低于抑制R ab27a組(P＜ 0.05)。見(jiàn)圖5。

圖5 抑制RAB27家族表達(dá)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞耐藥相關(guān)基因表達(dá)的影響(aP ＜ 0.05，vs對(duì)照組；bP ＜ 0.05，vs si-RAB27a組。n=9)Fig.5 Effect of inhibiting the expression of RAB27 family on gene expression related to drug resistance in triple negative breast cancer cells(aP ＜ 0.05, vs control; bP ＜ 0.05, vs si-RAB27a. n=9)

討 論

TNBC 是預(yù)后最差的乳腺癌亞型， 目前手術(shù)、放療和化療相結(jié)合是治療TNBC 的唯一手段。順鉑(誘導(dǎo)DNA 雙鏈斷裂)、阿霉素(DNA 破壞劑) 和紫杉醇(微管穩(wěn)定藥物) 等抗癌藥物應(yīng)用于包括TNBC 在內(nèi)的癌癥化療治療策略，然而治療的有效性受到耐藥的嚴(yán)重影響[16-18]。已有研究表明，耐藥的癌細(xì)胞能夠?qū)⒒熕幬锇谕饷隗w中，并將抗癌藥物從腫瘤細(xì)胞中穿梭出來(lái)[19]。外泌體還能夠?qū)⑴c腫瘤耐藥性相關(guān)的microRNA、mRNA和蛋白質(zhì)運(yùn)送到癌細(xì)胞，由于外泌體在腫瘤微環(huán)境中被用作基因交換的載體，耐藥腫瘤細(xì)胞會(huì)劫持這一機(jī)制，使敏感細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性[20]。在脊椎動(dòng)物中，Rab27家族由Rab27a和Rab27b組成[21]。許多研究表明，Rab27a和Rab27b能夠控制包括子宮頸癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞在內(nèi)的多種不同類型癌細(xì)胞的外泌體分泌[12]。盡管Rab27a和Rab27b具有很高的序列相似性(71%的氨基酸序列同一性)并募集相同的效應(yīng)蛋白，但之前的研究發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)Rab27亞型在不同類型的癌細(xì)胞中功能不同，即使在同一細(xì)胞類型中也發(fā)揮不同的作用[22]。

本研究采用siRNA分別干擾Rab27a和Rab27b在三陰性乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)抑制Rab27a表達(dá)后顯著降低了三陰性乳腺癌細(xì)胞的外泌體分泌，而抑制Rab27b表達(dá)后三陰性乳腺癌細(xì)胞外泌體的分泌量沒(méi)有受到太大的影響。進(jìn)一步檢測(cè)Rab27a和Rab27b抑制后三陰性乳腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑、阿霉素和紫杉醇的耐受情況，發(fā)現(xiàn)抑制Rab27家族后三陰性乳腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑、阿霉素和紫杉醇的藥物耐受程度降低，抑制Rab27b的效果強(qiáng)于抑制Rab27a，并且在同濃度的順鉑和阿霉素處理?xiàng)l件下檢測(cè)細(xì)胞凋亡率也發(fā)現(xiàn)了相同的情況。通過(guò)對(duì)耐藥相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)，抑制Rab27b組的IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6四個(gè)基因表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組(P＜ 0.05)，除EGR1外其他3個(gè)基因的表達(dá)量均顯著低于抑制Rab27a組(P＜ 0.05)。有研究證實(shí)癌細(xì)胞活躍的外泌體分泌能夠刺激IL-6基因表達(dá)量上調(diào)[23]。對(duì)紫杉醇耐藥乳腺癌細(xì)胞株外泌體的microRNA分析表明，其中含有的microRNA能夠調(diào)控EGR1基因的表達(dá)從而促進(jìn)耐藥的發(fā)展[24]。對(duì)肝癌細(xì)胞的耐藥研究也發(fā)現(xiàn)Rab27b能夠與耐藥蛋白(ABC超家族編碼的P-gp蛋白)相互作用提高腫瘤細(xì)胞的耐藥性[25]。因此，我們推測(cè)Rab27a導(dǎo)致的三陰性乳腺癌細(xì)胞耐藥增強(qiáng)可能是通過(guò)促進(jìn)外泌體的分泌而促成，如通過(guò)外泌體直接轉(zhuǎn)運(yùn)出藥物，或通過(guò)外泌體在癌細(xì)胞中傳遞耐藥相關(guān)的某些功能蛋白、microRNA或mRNA。Rab27b導(dǎo)致的三陰性乳腺癌細(xì)胞耐藥增強(qiáng)機(jī)制可能與Rab27a不同，其可能不直接影響三陰性乳腺癌細(xì)胞外泌體的分泌，但可能對(duì)其他耐藥相關(guān)基因的表達(dá)起到重要的調(diào)控作用，具體的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)還需要進(jìn)一步的研究來(lái)闡明。

綜上所述，本研究使用siRNA抑制Rab27a和Rab27b后對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞株中外泌體的分泌以及耐藥情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)抑制Rab27a和Rab27b均能夠降低三陰性乳腺癌細(xì)胞株耐藥的發(fā)展，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)蛋白可能涉及不同的耐藥機(jī)制，未來(lái)深入研究Rab27b背后的耐藥調(diào)控網(wǎng)絡(luò)對(duì)因MDR導(dǎo)致化療失敗的TNBC患者或許有更大的臨床意義。

作者貢獻(xiàn)：王麗完成本研究大部分的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容；嚴(yán)志銳和黃丹菊協(xié)助完成部分實(shí)驗(yàn)以及數(shù)據(jù)收集與統(tǒng)計(jì)分析；夏耀雄在項(xiàng)目思路、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及文章撰寫方面提出了許多指導(dǎo)性的意見(jiàn)和建議。全體作者都閱讀并同意最終的文本。