張 龍，屈撐囤，史文政，李金靈，魚 濤，楊 博

（1.西安石油大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，陜西 西安710065；2.西安石油大學(xué)陜西省油田環(huán)境污染控制技術(shù)與儲(chǔ)層保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安710065；3.天津市中海油招標(biāo)代理有限公司，天津 濱海新區(qū)300452；4.石油石化污染物控制與處理國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京102206）

在石油、天然氣的生產(chǎn)和加工過程中，沉積于油罐罐底的罐底泥、污水池池底的活性污泥以及石油作業(yè)時(shí)形成的落地油泥等多種形態(tài)的含油混合物，被統(tǒng)稱為含油污泥。含油污泥多為黑褐色黏稠狀，含油率10%～50%，含水率＞50%，是典型的多相體系。含油污泥中含有殘留油類、多氯聯(lián)苯、多環(huán)芳烴、氮、磷、寄生蟲等多種有毒有害物質(zhì)，其中的多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯等會(huì)引起大氣污染和水污染；未經(jīng)處理而任意堆放的含油污泥會(huì)嚴(yán)重影響土壤的理化性質(zhì)，導(dǎo)致人和動(dòng)物的“三致效應(yīng)”（致突變、致癌、致畸）[1]。

由于其復(fù)雜的成分及對環(huán)境的污染特性，含油污泥已被列入“國家危險(xiǎn)廢物名錄”。2019 年，我國石油石化行業(yè)產(chǎn)生的含油污泥量在1200 萬t 以上，對其進(jìn)行“三化”（減量化、無害化、資源化）處理勢在必行。在眾多的利用處置方法中，生物法具有成本低且無二次污染的優(yōu)點(diǎn)。近年來，隨著微生物學(xué)、蛋白質(zhì)生物化學(xué)、基因工程學(xué)及大數(shù)據(jù)的不斷發(fā)展，微生物法受到廣泛關(guān)注，從含油污泥中分離的微生物能更好地應(yīng)對其中的不利因素，降解效率會(huì)顯著提高。利用基因工程構(gòu)建“高效降解菌”，結(jié)合計(jì)算機(jī)大數(shù)據(jù)建立“菌種信息庫”，也將會(huì)為微生物法的發(fā)展帶來新的可能。

1 含油污泥的利用與處置方法

目前現(xiàn)有的國內(nèi)外處置利用含油污泥的方法多種多樣。含油污泥利用處置方法的基本原理及優(yōu)缺點(diǎn)如表1 所示。

表1 含油污泥利用與處置主要方法一覽表[2-7]Table1 List of main treatment, utilization and disposal methods of oily sludge

單一的利用處置方法缺點(diǎn)明顯，將利用法與處置法相結(jié)合的處理方法已逐漸應(yīng)用于油氣田含油污泥的“三化”過程。處置法解決了處理過程中殘余污染物的問題，利用法則解決了前者難資源化的問題。處置方法中的焚燒法因能耗高及二次污染大，已逐步淘汰；填埋法和固化法對前期處理方法的處理效果依賴較大；生物法具有耗能小、無二次污染的優(yōu)點(diǎn)，其中的微生物法更是以投入少、效果好的特點(diǎn)，得到快速發(fā)展。相較于其他利用處置法，微生物法在低含油污泥的處置方面更是能達(dá)到事半功倍的效果，而且處置的污泥回用后，還可以增加土壤腐殖質(zhì)含量[8]。

2 微生物法處理含油污泥

生物法處理含油污泥是指利用動(dòng)物、植物或微生物，將TPHs（Total Petroleum Hydrocarbons，總石油烴）降解為無毒無害物質(zhì)的方法，主要包括植物法、動(dòng)物法和微生物法等。利用高羊茅、苜蓿、大豆、圣奧古斯丁草和黑麥草等處理含油污泥時(shí)，TPHs降解率普遍偏低[9]。土壤中的線蟲通過自身的生長繁殖，不但可以吸收降解TPHs 還可以增強(qiáng)土壤中相關(guān)酶的活性，但是土壤中的TPHs 含量過高，會(huì)導(dǎo)致線蟲數(shù)量急劇減少[10-11]。植物法僅適合用于修復(fù)大面積的原油污染土壤，而且植物根系大多集中在土壤表層，無法降解深層的TPHs，生長出來的植株的安全性也有待進(jìn)一步考察。同樣的，土壤中的動(dòng)物可利用的有機(jī)物種類和含量都十分有限，導(dǎo)致動(dòng)物法的降解效率低下。自然界和被石油污染的環(huán)境中，有著種類繁多、能以TPHs 作為碳源和能源的微生物，將它們加以培養(yǎng)，可以快速、高效、徹底地降解TPHs。

微生物通過新陳代謝作用，將含油污泥中的TPHs 加以吸收、轉(zhuǎn)化、分離，最終降解成CO2、H2O和其它無毒無害物質(zhì)[12]。微生物自身可產(chǎn)生多種酶，再加上其超常的繁殖變異能力，使得其可用于環(huán)境污染治理的多個(gè)方面。目前微生物法主要有地耕法、堆肥法、生物強(qiáng)化法和生物泥漿法等。

2.1 地耕法

地耕法是指在露天環(huán)境中將含油污泥和土壤混合均勻后，平鋪大約10cm 厚，TPHs 在土壤土著微生物的新陳代謝作用下，被降解為CO2、H2O 和其它無毒無害物質(zhì)[13]。地耕法若配合外源菌劑使用，TPHs 去除率會(huì)大大增加，而且十二烷基硫酸鈉（SDS）可促進(jìn)TPHs 的生物降解，且只有在超臨界濃度下加入，才有利于瀝青質(zhì)的降解[14]。地耕法在處理過程中若加入外源菌種（假單胞菌、白腐真菌等）和表面活性劑，可大大提高降解效率。處理過程中需調(diào)節(jié)污泥的溫度、濕度、C/N/P 比值、pH 等條件，以優(yōu)化TPHs 的降解環(huán)境。

2.2 堆肥法

堆肥法也稱堆腐法，是將含油污泥與木屑、碎稻草、泥炭、樹皮、草等填充劑混合堆置，通過微生物將TPHs 降解為簡單無機(jī)物的過程。這一降解過程中釋放的能量，可以促進(jìn)微生物進(jìn)行自身活動(dòng)和生長繁殖。一般情況下，添加外援混合菌的處理效果比單菌的效果更好[15]。將Fenton 氧化法與氧化堆肥聯(lián)用，則可降解難降解的芳香烴和瀝青質(zhì)，但氧化劑濃度對其去除率的影響較大[16]。堆肥法雖然可以充分利用生活廢棄物，為微生物的生長提供依附地和調(diào)節(jié)體系溫度和濕度，但其處理過程會(huì)產(chǎn)生大量惡臭性氣體，造成大氣污染，且其占地面積大，一般情況下只能處理少量含油污泥。

2.3 生物強(qiáng)化法

生物強(qiáng)化法[17]是指在處理含油污泥時(shí)，通過營養(yǎng)強(qiáng)化、外源菌強(qiáng)化等手段，強(qiáng)化微生物的降解作用。其中營養(yǎng)強(qiáng)化在微生物法的發(fā)展初期運(yùn)用較多。近年來，向含油污泥中添加高效石油烴降解菌劑的外源菌強(qiáng)化法，得到快速發(fā)展，此方法可以快速降解含油污泥中難降解的脂肪烴和多環(huán)芳烴等[18]。投加的高效石油烴降解菌劑可來自原體系，也可以是外源菌種。菌劑中的菌種可以是單一的，也可以是混合菌，一般來說多菌種聯(lián)合處理含油污泥的效果，比單一菌種的處理效果好。目前國內(nèi)外使用生物強(qiáng)化法的大致現(xiàn)狀如表2 所示。

表2 國內(nèi)外使用生物強(qiáng)化法的大致現(xiàn)狀[19-25]Table2 General situation of bioaugmentation in China and abroad

生物強(qiáng)化法是目前應(yīng)用最為廣泛的方法，且多與其他方法聯(lián)用，其難點(diǎn)在于高效降解菌群的構(gòu)建。處理溫度在30℃左右，pH 在7 左右時(shí)，適合大部分菌種生存。外源表面活性劑可以降低油水界面的表面張力，促進(jìn)TPHs 從土壤表面向水界面的擴(kuò)散過程與乳化作用，從而提升降解菌群的降解效率。

2.4 生物泥漿法

生物泥漿法[26]將含油污泥與水、營養(yǎng)物及高效石油烴降解菌混合，降解菌將溶解在水相中的TPHs轉(zhuǎn)化為CO2、H2O 和其它無害物質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)污泥的穩(wěn)定化。生物泥漿法對3 個(gè)苯環(huán)以下的低分子量PAHs（Polycyclic Aromatic Hydrocar-bons，多環(huán)芳烴）的降解效果較好[27]。將生物泥漿反應(yīng)器和固態(tài)堆肥法聯(lián)用，可以顯著提高TPHs 的去除率[28]。生物泥漿法的處理效果較好，但只能處理少量含油污泥，其設(shè)備的研發(fā)、維修也提高了處理成本，故實(shí)際應(yīng)用阻力大，只在少許中試中存在。

綜上所述，微生物降解TPHs 的關(guān)鍵，是合適的降解菌群的構(gòu)建，降解菌群的降解效率，與降解溫度、pH、濕度、TPHs 的種類、外援添加物種類、接種量等，都有密切的關(guān)系[29]。一般情況下，自然界中能在含油污泥和油污土壤中生長的微生物，都對TPHs 有潛在的降解能力。近年來，微生物降解TPHs 朝著多方法聯(lián)動(dòng)的方向發(fā)展，但大多都以外源菌強(qiáng)化法為基礎(chǔ)。

3 石油烴類污染物好氧降解機(jī)理的研究進(jìn)展

自然環(huán)境中存在100 多個(gè)屬、200 多種石油烴降解菌，包括細(xì)菌、放線菌、真菌、藍(lán)細(xì)菌和藻類等[30]，其降解TPHs 的能力由易至難一般為：直鏈烷烴和支鏈烷烴＞低分子量芳香烴＞環(huán)烷烴和多環(huán)芳烴。

3.1 直鏈烷烴好氧降解機(jī)理的研究進(jìn)展

目前，國際上認(rèn)可的直鏈烷烴的降解機(jī)理主要包括單末端氧化、雙末端氧化和次末端氧化等，但在不同的反應(yīng)體系中，三者有著不同的主次作用。如一些假單胞菌或念珠菌主要通過雙末端氧化產(chǎn)生胞外產(chǎn)物二羧基酸，而一些輔助氧化烷烴的芽孢桿菌或鏈霉菌主要通過次末端氧化使烷烴斷鏈，許多霉菌則只可以通過次末端氧化降解烷烴[31]。

3.1.1 單末端氧化

直鏈烷烴在加氧酶、醇脫氫酶以及醛脫氫酶存在時(shí)，最末端的甲基會(huì)被氧化成脂肪酸，一部分脂肪酸進(jìn)入β-氧化循環(huán)和三羧酸（TAC）循環(huán)，被氧化為CO2和H2O，剩余的脂肪酸作為合成微生物自身細(xì)胞物質(zhì)的原料，被微生物利用[32]。過程如式（1）所示：

3.1.2 雙末端氧化

雙末端氧化[33]在直鏈烷烴碳鏈的兩端同時(shí)發(fā)生。直鏈烷烴先通過單末端氧化生成脂肪酸，在ω-羥基脂肪酸單加氧酶的作用下，發(fā)生ω-碳末端羥基化，再被乙醇脫氫酶、乙醛脫氫酶氧化為羧基生成二羧基酸，進(jìn)入β-氧化循環(huán)后進(jìn)行氧化分解。過程如式（2）所示：

3.1.3 次末端氧化

直鏈烷烴的次末端甲基在加氧酶的作用下被氧化成對應(yīng)的仲醇，在乙醇脫氫酶、單加氧酶、酯酶的作用下，生成伯醇和脂肪酸，伯醇再繼續(xù)氧化為醛和羧酸，羧酸與之前生成的脂肪酸進(jìn)入β-氧化循環(huán)，進(jìn)行進(jìn)一步氧化分解[34]。過程如式（3）所示：

3.2 支鏈烷烴好氧降解機(jī)理的研究進(jìn)展

支鏈烷烴離支鏈點(diǎn)最遠(yuǎn)，甲基在單加氧酶和脫氫酶的作用下，被氧化生成支鏈脂肪酸，在脂肪酸α、ω-氧化或β-堿基的去除過程中，會(huì)被進(jìn)一步降解[35]。過程如式（4）所示：

3.3 環(huán)烷烴的好氧降解機(jī)理研究進(jìn)展

環(huán)烷烴降解的關(guān)鍵是羥基化過程。環(huán)烷烴降解的轉(zhuǎn)折點(diǎn)在于開環(huán)過程，開環(huán)后其降解速率和效率都會(huì)得到大幅度提升[36]。過程如式（5）所示：

3.4 多環(huán)芳烴好氧降解機(jī)理的研究進(jìn)展

PAHs 相對較難降解，目前國際上認(rèn)可的機(jī)理主要有以PAHs 為唯一碳源和氮源的代謝機(jī)理、PAHs 共代謝機(jī)理、PAHs 好氧降解的中心代謝機(jī)理等。對于低分子量PAHs，微生物一般以第一種方式降解，而四環(huán)及以上的高分子量PAHs，則主要通過共代謝的方式來降解[37]。

3.4.1 以PAHs 為唯一碳源和氮源的代謝機(jī)理

在有氧條件下，單、雙加氧酶可在苯環(huán)上形成C-O 鍵，加氫酶則可使苯環(huán)上的C-C 鍵斷裂，以此減少苯環(huán)數(shù)。苯環(huán)被加氧酶和水解酶等氧化為兒茶酸、原兒茶酸和龍膽酸，兒茶酸1.23.4-雙加氧酶(1.2-CAT/3.4-CAT)、原兒茶酸3.4-雙加氧酶(3.4-PCA)、龍膽酸1.2-雙加氧酶(1.2-GDO)，可分別使苯環(huán)開裂，生成琥珀酸、延胡索酸和丙酮酸。這些中間產(chǎn)物有一部分進(jìn)入三羧酸循環(huán)，剩余部分被微生物用來合成其自身生物量[38]。其過程如圖1 所示。

圖1 好氧菌以PAHs 為唯一碳源和氮源的代謝機(jī)理圖Fig.1 metabolic mechanism of aerobic bacteria with PAHs as sole carbon and nitrogen source

3.4.2 PAHs 的共代謝機(jī)理

高分子量PAHs 結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和穩(wěn)定性，以及其本身不能誘導(dǎo)酶的產(chǎn)生，使其不易被微生物降解。但當(dāng)體系中存在苯、甲苯、水楊酸、萘、菲等類似基質(zhì)時(shí)，微生物可在它們的誘導(dǎo)下產(chǎn)生加氧酶，同時(shí)也可以增強(qiáng)加氧酶的活性。此時(shí)微生物以這些基質(zhì)作為生長基質(zhì)進(jìn)行生長繁殖，以高分子量PAHs 作為次要基質(zhì)和非生長基質(zhì)，促進(jìn)其氧化降解，也可直接在體系中添加可產(chǎn)生降解酶的微生物來降解高分子量PAHs。

PAHs 的共代謝機(jī)制大致分為3 種[39]：1）通過“生長基質(zhì)”和“非生長基質(zhì)”共酶降解；2）利用可直接產(chǎn)生降解酶的微生物降解；3）微生物利用存在競爭關(guān)系的“生長基質(zhì)”或“非生長基質(zhì)”產(chǎn)生碳源或能源，來降解PAHs。

3.4.3 PAHs 好氧降解的中心代謝機(jī)理

好氧條件下PAHs 的降解分為3 種[40]：1）雙加氧酶將底物氧化為順式二羥基化合物，再經(jīng)一系列反應(yīng)生成兒茶酚類，最終代謝成為CO2和H2O；2）個(gè)別分枝桿菌屬的細(xì)菌和大部分非木質(zhì)素降解真菌在線粒體單加氧酶P450 的作用下，將多環(huán)芳烴氧化為環(huán)氧化合物，最終代謝成為CO2和H2O；3）木質(zhì)素通過降解真菌生成PAHs 的錕類化合物，實(shí)現(xiàn)PAHs 的氧化降解。通過上述途徑，不同的PAHs 化合物可被降解為鄰苯二酸、原兒茶酸和龍膽酸等。

目前含油污泥中高分子量PAHs 的降解效率低下，關(guān)鍵在于苯環(huán)開環(huán)過程。此外，類似苯、甲苯等誘導(dǎo)微生物產(chǎn)生加氧酶和加氫酶的機(jī)制，也有待深入探究。

4 結(jié)論與展望

微生物法已被應(yīng)用于含油污泥處置、油污土壤原位及異位修復(fù)等方面，相關(guān)的技術(shù)開發(fā)也逐漸深入。在微觀方面，可以通過分子生物學(xué)、酶學(xué)、蛋白質(zhì)生物化學(xué)及基因工程等學(xué)科，研究TPHs 分子的降解動(dòng)力學(xué)，構(gòu)建基因工程菌。在宏觀方面，可以結(jié)合材料化學(xué)、計(jì)算機(jī)大數(shù)據(jù)等，以提高菌群的活性和抗逆性，快速構(gòu)建高效降解菌群。

1）微生物降解TPHs 分子的過程大多發(fā)生在胞內(nèi)，故TPHs 分子的跨膜運(yùn)輸，直接關(guān)系到微生物對其的吸收利用效率。此過程還有許多問題亟待解決：TPHs 分子的跨膜運(yùn)輸是否需要特定膜蛋白的協(xié)助，是否可以通過胞內(nèi)外的濃度差，使TPHs 分子在類似“鈉鉀泵”的作用下進(jìn)行主動(dòng)運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，TPHs 分子在跨膜運(yùn)輸時(shí)消耗的能量來源及大小等。針對TPHs 分子跨膜運(yùn)輸?shù)难芯?，可能有助于在微觀方面，對TPHs 分子的動(dòng)態(tài)運(yùn)動(dòng)過程、規(guī)律及降解初期的動(dòng)力學(xué)方程的研究。

2）在從分子生物學(xué)方面研究TPHs 代謝途徑和機(jī)理的基礎(chǔ)上，結(jié)合酶學(xué)、蛋白質(zhì)生物化學(xué)及基因工程，研發(fā)高效降解工程菌。從關(guān)鍵降解酶、特定蛋白質(zhì)的作用及生成入手，追溯到其最初的功能基因表達(dá)，利用基因強(qiáng)化與沉默技術(shù)，強(qiáng)化或沉默相關(guān)基因片段的表達(dá)，重組構(gòu)建出具有功能優(yōu)化的基因工程菌。

3）目前，生物強(qiáng)化法投加的大多是菌液，或以生物炭、硅藻土為載體的固定化微生物，雖然成本低但效果不顯著?？山Y(jié)合材料化學(xué)，研發(fā)高分子復(fù)合材料、納米材料等具有優(yōu)良性質(zhì)的材料作為微生物的載體，以提高微生物的活性及降解效率。研發(fā)過程中不但要考慮材料的生產(chǎn)成本，也要保證其環(huán)境友好性。

4）國內(nèi)外關(guān)于含油污泥降解菌群的研究幾乎都具有針對性，研發(fā)的降解菌群不具有普適性。隨著微生物基因片段的提取保存及微生物數(shù)據(jù)庫的不斷完善，結(jié)合計(jì)算機(jī)大數(shù)據(jù)分析的手段，進(jìn)行復(fù)合菌群的初步構(gòu)建，以提高菌株之間的協(xié)同作用，并強(qiáng)化菌群的抗逆性和對極端環(huán)境的適應(yīng)性，將會(huì)為含油污泥微生物處置的系統(tǒng)化提供參考，也是未來發(fā)展的方向之一。