張洪志，孫育欣，潘曉華

（南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳寶安人民醫(yī)院骨科，廣東 深圳 518101)

骨性關(guān)節(jié)炎（OA)是由關(guān)節(jié)軟骨變性、骨質(zhì)增生導(dǎo)致的慢性進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)疾病，屬于骨科臨床常見疾病，目前尚未明確其發(fā)病機(jī)制［1］。研究［2］指出，OA的滑膜組織分泌活性因子參與了關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過程，其中S100A12在骨性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病中均有較高的血清反應(yīng)，但目前關(guān)于血清鈣結(jié)合蛋白S100B水平與OA的獨(dú)立相關(guān)性研究較少。本研究以我院收治的膝關(guān)節(jié)OA患者為研究對象，探討血清和關(guān)節(jié)液中S100B水平與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2020年6月至2020年12月我院收治的50例膝關(guān)節(jié)OA患者為觀察組。診斷標(biāo)準(zhǔn)：①≥40歲的中老年患者；②1個月內(nèi)反復(fù)出現(xiàn)膝痛；③晨僵超過30 min；④關(guān)節(jié)活動時伴有骨摩擦音；⑤X線片顯示關(guān)節(jié)間隙變窄，膝關(guān)節(jié)邊緣出現(xiàn)骨贅；⑥關(guān)節(jié)液檢查清晰、黏稠，白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于2×109/L。上述條件中同時具備②⑤或②③④⑥或①②③④可診斷為膝關(guān)節(jié)OA。選取同期我院50例未累及膝關(guān)節(jié)軟骨的患者作為對照組。觀察組男26例、女24例，對照組男28例、女22例，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。觀察組年齡為（63.33±8.14)歲，對照組年齡為（55.46±15.28)歲，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。兩組均行膝關(guān)節(jié)X線及MRI檢查，均在傷后1周內(nèi)進(jìn)行關(guān)節(jié)鏡或內(nèi)固定手術(shù)。本研究已獲得我院倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.2 研究方法①樣本采集。血清：所有患者禁食12 h后采集靜脈血，并在4℃的環(huán)境下，2 000×g離心處理血液樣本10 min，離心完畢后提取上清液在-80℃環(huán)境中保存?zhèn)溆?。關(guān)節(jié)液：觀察組在無菌條件下穿刺提取關(guān)節(jié)液，對照組在手術(shù)前抽取關(guān)節(jié)液，關(guān)節(jié)液提取后均在4℃的環(huán)境下，5 000×g離心處理15 min，提取上清液置于-80℃環(huán)境中保存?zhèn)溆?。②檢測方法：采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法)對血清及關(guān)節(jié)液中的S100B水平進(jìn)行測定，ELISA試劑盒由美國Abnove公司提供，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明執(zhí)行（S100B/EN-RAGE ELISA Kit Cat.No：KOA091V.04)。在使用前24 h內(nèi)配制S100A12蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，并取0.1 mL的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液置于孔板中，取0.1 mL的樣品稀釋液置于“0”孔中作為空白對照；取50μL樣品上清液加入到50μL的樣品稀釋液中并置于空的孔中；加蓋后以37℃的溫度孵育90 min，孵育完畢后，將孔板上的液體去除，再取0.1 mL抗體工作液置于每孔中，在37℃的溫度中孵育60 min；孵育完畢后用PBS洗板3次，去掉板孔上的液體；然后取0.1 mL稀釋后的ABC工作液置于每孔中，以37℃的溫度孵育30 min；孵育完畢后，用PBS洗板5次，并將孔板上的液體去掉；加入90μL TMB顯色液，以37℃的溫度孵育30 min；孵育完畢后，在每孔中加入100μL TMB終止液，30 min后采用美國BIO-RAD公司生產(chǎn)的內(nèi)酶標(biāo)儀對A450的OD值進(jìn)行測定，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白含量，實(shí)際S100B水平=測試結(jié)果×稀釋倍數(shù)。

1.3 評價指標(biāo)①比較兩組患者的血清S100B水平和關(guān)節(jié)液S100B水平。②根據(jù)X片檢查結(jié)果，按照K-L分級標(biāo)準(zhǔn)，將OA分為5級：關(guān)節(jié)正常為0級；關(guān)節(jié)間隙可疑變窄為1級；關(guān)節(jié)間隙可疑變窄且有骨贅為2級；關(guān)節(jié)間隙明顯變窄且有中等骨贅為3級；關(guān)節(jié)間隙明顯變窄，有大量骨贅，且存在嚴(yán)重硬化性病變及明顯畸形為4級。以K-L分級標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，比較不同分級患者的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平，并分析K-L分級與血清S100B水平、關(guān)節(jié)液S100B水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以±s表示，兩組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平比較觀察組患者的血清S100B水平和關(guān)節(jié)液S100B水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平比較（±s，ng/mL）

表1 兩組患者的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平比較（±s，ng/mL）

組別 n 血清S100B 關(guān)節(jié)液S100B觀察組 50 36.26±27.57 15.75±9.86對照組 50 23.35±14.86 9.68±5.25 t 3.864 4.136 P 0.027 0.021

2.2 K-L分級與血清、關(guān)節(jié)液S100B水平的相關(guān)性Pearson相關(guān)分析顯示，K-L分級與血清S100B水平（r=0.640)、關(guān)節(jié)液S100B水平（r=0.750)均呈正相關(guān)（P＜0.05)。見表2。

表2 K-L分級與血清、關(guān)節(jié)液S100B水平的相關(guān)性

2.3 不同K-L分級患者的血清、關(guān)節(jié)液S100B水平比較不同K-L分級患者的血清S100B、關(guān)節(jié)液S100B水平均存在顯著差異（P＜0.05)。見表3。

表3 不同K-L分級的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平比較（±s，ng/mL）

表3 不同K-L分級的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平比較（±s，ng/mL）

K-L分級 n 血清S100B 關(guān)節(jié)液S100B 2級 23 9.63±2.23 5.75±3.42 3級 18 22.96±5.75 9.43±6.76 4級 9 45.75±15.71 17.58±4.81 F 7.926 5.405 P 0.000 0.000

3 討論

膝關(guān)節(jié)OA是臨床上常見的膝關(guān)節(jié)慢性退行性疾病，患者主要表現(xiàn)為持續(xù)性疼痛、畸形、關(guān)節(jié)功能障礙等癥狀，給患者生活質(zhì)量、家庭負(fù)擔(dān)帶來了極大的影響。近年來，S100家族分子與滑膜炎和OA之間的關(guān)系逐漸成為學(xué)界研究的重點(diǎn)，但有關(guān)S100B在OA發(fā)生發(fā)展中的作用研究較少。S100B是S100鈣結(jié)合蛋白家族成員，與生物機(jī)械力學(xué)信號的傳遞息息相關(guān)，在機(jī)械磨損導(dǎo)致的軟骨細(xì)胞凋亡和滑膜組織炎癥中起到重要作用。Riuzzi等［3］的研究表明，S100B與堿性成纖維細(xì)胞生長因子互相作用可增加其與FGF受體結(jié)合的穩(wěn)定性，最終促進(jìn)急性增殖，提示S100B參與了肌細(xì)胞的增殖與分化。此外，S100B可持續(xù)激活RAGE，進(jìn)而破壞細(xì)胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生氧自由基，在細(xì)胞炎性反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。

本研究結(jié)果顯示，觀察組的血清和關(guān)節(jié)液S100B水平均高于對照組（P＜0.05)，提示關(guān)節(jié)外組織及血液中分泌的S100B可以通過血液循環(huán)系統(tǒng)到達(dá)OA患者的關(guān)節(jié)周圍組織，增加滑膜炎發(fā)生率，這可能與S100B可誘導(dǎo)SF分泌FGF等細(xì)胞因子，進(jìn)而與FGFR1、FGFR2受體結(jié)合，并通過多種信號通路調(diào)節(jié)TNF-α、IL-1β等炎性因子的表達(dá)有關(guān)［4］。另外，本研究結(jié)果還顯示，K-L分級與血清S100B水平（r=0.640)、關(guān)節(jié)液S100B水平（r=0.750)均呈正相關(guān)（P＜0.05)，表明K-L分級越高，血清S100B、關(guān)節(jié)液S100B水平越高；同時也表明S100B作為一種炎性介質(zhì)可能在膝關(guān)節(jié)OA的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮其介導(dǎo)作用，對OA的臨床診斷和預(yù)后評估具有重要的價值。

綜上，血清和關(guān)節(jié)液S100B水平與膝關(guān)節(jié)OA的疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可為疾病的早期診斷及病情評估提供依據(jù)。