程瑜，先潔，黃佳佳，李月

1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400010；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，重慶 400016

有核紅細(xì)胞(nucleated red blood cell,NRBC)是一種幼稚的骨髓紅系細(xì)胞，健康成年人血液中無(wú)NRBC,但在新生兒或幼兒血液中可見(jiàn)[1-3]。一旦成年人外周血中出現(xiàn)NRBC，則多為病理狀態(tài)[4-6]，常見(jiàn)于血液系統(tǒng)疾病，如溶血性貧血、急慢性白血病等。由于外周血NRBC具有細(xì)胞核，血液分析儀可能會(huì)將其當(dāng)作白細(xì)胞，而干擾白細(xì)胞計(jì)數(shù)[7-8],所以檢測(cè)NRBC以校正白細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)保證血液分析結(jié)果的可靠性具有關(guān)鍵意義。大量研究報(bào)道NRBC增多與病死率升高和疾病預(yù)后不良密切相關(guān)，故檢測(cè)NRBC亦有重要的臨床作用[9-11]。

ISO15189 CNAS-CL02:2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在設(shè)備安裝和使用前驗(yàn)證其性能并符合相關(guān)檢驗(yàn)的要求[12]。為了解XN-3000對(duì)外周血NRBC計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和可靠性，該研究參考WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》等[13]指南文件對(duì)XN-3000檢測(cè)的NRBC進(jìn)行項(xiàng)目性能驗(yàn)證，并進(jìn)一步分析臨床患者樣本的NRBC百分率與疾?。ǚ茄合到y(tǒng)疾?。┺D(zhuǎn)歸的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

所用標(biāo)本均來(lái)自重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院住院患者；儀器提示有核紅細(xì)胞陽(yáng)性，且入組對(duì)象為非血液系統(tǒng)疾病患者。

1.2 儀器與耗材

日本SYSMEX全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀XN-3000及原裝配套的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，BASO瑞氏吉姆薩染液，Olymus光學(xué)顯微鏡。

1.3 方法

標(biāo)本性能驗(yàn)證方案參考相關(guān)指南文件，判斷標(biāo)準(zhǔn)由于沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，研究采用廠家說(shuō)明書有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的性能要求。

1.3.1 儀器檢測(cè)NRBC血液采集后2 h內(nèi)完成測(cè)定。儀器按計(jì)劃進(jìn)行校準(zhǔn)，檢測(cè)前按要求進(jìn)行每日室內(nèi)質(zhì)控，在控后按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程檢測(cè)樣本。

1.3.2 攜帶污染率 將混勻的高濃度血液樣本連續(xù)測(cè)定3次，其測(cè)定值分別為H1、H2、H3；再連續(xù)測(cè)定低濃度血液樣本3次，其測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3。按公式計(jì)算攜帶污染率（CR=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%）。

1.3.3 精密度 批內(nèi)精密度：取含高、中、低3個(gè)水平NRBC%的新鮮全血,按常規(guī)檢測(cè)方法連續(xù)重復(fù)檢測(cè)11次,取后10次結(jié)果計(jì)算均值（Mean）、變異系數(shù)(Coefficient of Variation,CV)和標(biāo)準(zhǔn)差(Standard Deviation,SD)；批間精密度：取含高、中、低3個(gè)水平NRBC%的新鮮全血，每天檢測(cè)1次，計(jì)算連續(xù)6 d的NRBC%數(shù)據(jù)的變異系數(shù)。

1.3.4 線性范圍 選取1份高值NRBC%的全血樣本（H），用儀器的稀釋液分別按照0%、20%、40%、60%、80%、100%的比例進(jìn)行混合配置，每個(gè)稀釋度測(cè)定2次計(jì)算平均值，將實(shí)測(cè)值與理論值求偏差，計(jì)算Y=aX+b，驗(yàn)證線性范圍。

1.3.5 NRBC百分率與病死率的相關(guān)性分析 選擇在該院住院期間外周血NRBC＞0的患者進(jìn)行回顧性研究。收集入組患者的基本信息、預(yù)后結(jié)果，分成80例死亡組與197例好轉(zhuǎn)組，將兩組的NRBC%進(jìn)行分析。

1.3.6 NRBC百分率的趨勢(shì)性分析 分析死亡組與好轉(zhuǎn)組的多次檢測(cè)結(jié)果，對(duì)死亡組與好轉(zhuǎn)組的NRBC%作趨勢(shì)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，協(xié)方差統(tǒng)計(jì)采用多次測(cè)定數(shù)據(jù)的趨勢(shì)性分析；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)或率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 攜帶污染率

SYSMEX XN-3000檢測(cè)高、低濃度NRBC的攜帶污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%=0.12%（廠家標(biāo)準(zhǔn)≤2.0%），故該檢測(cè)系統(tǒng)攜帶污染率可接收，見(jiàn)表1。

2.2 精密度驗(yàn)證

SYSMEX XN-3000檢測(cè)NRBC批內(nèi)精密度（低、中、高值）變異系數(shù)分別為6.11%、3.35%、0.88%；批間精密度（低、中、高值）變異系數(shù)分別為5.34%、3.54%、1.43%。結(jié)果均符合廠家要求（廠家標(biāo)準(zhǔn)≤25%），故該檢測(cè)系統(tǒng)精密度可接收，見(jiàn)表2、表3。

表3 XN-3000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀NRBC批間精密度低、中、高值驗(yàn)證結(jié)果

2.3 線性范圍驗(yàn)證

SYSMEX XN-3000檢測(cè)NRBC的線性范圍回歸方程Y=0.997 9X+0.519 4，a值（斜率）為0.997 9，r2為0.997 6，結(jié)果均符合廠家要求（廠家標(biāo)準(zhǔn)：a值在1±0.05范圍，r≥0.975或r2≥0.95），故檢測(cè)項(xiàng)目線性區(qū)間可接受，見(jiàn)表4。

表4 XN-3000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

2.4 NRBC百分率與病死率的關(guān)系分析

將收集的80例死亡組與197例好轉(zhuǎn)組的NRBC%（若有多次檢測(cè)結(jié)果，取最后一次數(shù)據(jù)）進(jìn)行t檢驗(yàn)，分析兩組的差異性，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-4.332，P＜0.05）。

2.5 NRBC百分率的趨勢(shì)性分析

將收集的進(jìn)行多次檢測(cè)（2～6次不等）的17例死亡組與25例好轉(zhuǎn)組的NRBC%進(jìn)行協(xié)方差分析，分析兩組趨勢(shì)性變化，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.326，P=0.022）。

3 討論

全自動(dòng)血液分析儀計(jì)數(shù)外周血NRBC是近年發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù),已開(kāi)始應(yīng)用于臨床,為臨床實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)NRBC提供了重要依據(jù)。目前國(guó)內(nèi)外開(kāi)始使用SYSMEX XN-3000血液分析儀(簡(jiǎn)稱XN-3000)對(duì)外周血中NRBC進(jìn)行計(jì)數(shù)，其原理是利用熒光染色對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，流式法測(cè)定側(cè)向熒光強(qiáng)度(反映細(xì)胞核酸含量多少)和前向散射光強(qiáng)度(反映細(xì)胞體積大小)，將其與白細(xì)胞、紅細(xì)胞以及血小板區(qū)別。

該次性能驗(yàn)證參照參考WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》，對(duì)SYSMEX XN-3000檢測(cè)NRBC的攜帶污染率、精密度、線性范圍等性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。但因新鮮全血標(biāo)本中NRBC受儲(chǔ)存條件、時(shí)間影響較大，所以實(shí)驗(yàn)中批間精密度只計(jì)算連續(xù)6 d的NRBC%數(shù)據(jù)的變異系數(shù)。由于NRBC的性能驗(yàn)證暫時(shí)沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，該研究采用廠家說(shuō)明書的標(biāo)準(zhǔn)。該研究結(jié)果顯示,該項(xiàng)目的攜帶污染率為0.12%，≤2.0%的廠家標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明不同濃度間的交叉污染很小；批內(nèi)、批間精密度的變異系數(shù)均≤25%，也達(dá)到廠家說(shuō)明書的標(biāo)準(zhǔn)；回歸曲線為Y=0.997 9X+0.519 4，r2=0.997 6均在1±0.05范圍內(nèi)，r≥0.975，說(shuō)明線性良好，可報(bào)告范圍滿足臨床要求。說(shuō)明XN-3000具有精密度高、線性范圍寬、簡(jiǎn)單快速等優(yōu)點(diǎn)。

臨床病例分析的結(jié)果顯示，80例死亡組的NRBC%明顯高于197例好轉(zhuǎn)組的NRBC%，該結(jié)果與相關(guān)學(xué)者研究符合[14-15]。NRBC%趨勢(shì)性分析發(fā)現(xiàn)，進(jìn)行多次檢測(cè)的死亡組，其NRBC%呈上升趨勢(shì)，多次檢測(cè)的好轉(zhuǎn)組的NRBC%呈下升趨勢(shì)或者先升后降的趨勢(shì)?；颊叩腘RBC%的持續(xù)升高與其預(yù)后不良有一定關(guān)系[16-19]。在整個(gè)病情進(jìn)展過(guò)程中，NRBC%持續(xù)降低與病情好轉(zhuǎn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

該課題的啟動(dòng)，也是源于重慶市物價(jià)局在2018年4月20日批準(zhǔn)有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)（CAAY1000）的啟動(dòng)。有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的正常參考范圍為0，臨床大部分樣本的有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均為0，故不推薦每個(gè)樣本的血常規(guī)均出具有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果，這無(wú)疑會(huì)增加患者的經(jīng)濟(jì)支出，且對(duì)大多數(shù)患者的臨床診斷治療與預(yù)后沒(méi)有輔助意義。根據(jù)第3版《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》，推薦NRBC%≥1%的結(jié)果報(bào)告給臨床。實(shí)驗(yàn)室在收取該項(xiàng)目費(fèi)用前，一定要做項(xiàng)目的性能驗(yàn)證和每日室內(nèi)質(zhì)控，期待不久的將來(lái)衛(wèi)健委臨檢中心組織該項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)，完善正確度驗(yàn)證，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。