王玉燕，遲 蘭，昌莉麗，黃坤朋，任士飛

(1.徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 徐州 221006；2.徐州市三羽家禽診療服務(wù)有限公司，江蘇 徐州 221006)

雞球蟲病是由一種或多種艾美耳屬球蟲寄生于雞的腸道不同部位而引起的急性流行性腸道寄生蟲病。雞球蟲病以柔嫩艾美耳球蟲的致病力最強，寄生于盲腸，俗稱盲腸球蟲病。該病在養(yǎng)雞生產(chǎn)中較為常見，能嚴重影響雞的生長發(fā)育、降低生產(chǎn)性能、抑制免疫功能甚至繼發(fā)其它疾病，雖然死亡率不高但是發(fā)病率較高，給現(xiàn)代集約化家禽養(yǎng)殖帶來巨大的經(jīng)濟損失。在養(yǎng)雞生產(chǎn)中因球蟲疫苗使用效果的穩(wěn)定性差、存在弱毒返強等原因，目前藥物防控仍然是控制雞球蟲病的主要措施[1]。

隨著抗球蟲藥物的長期使用，球蟲耐藥性問題日趨普遍和嚴重，已成為藥物控制球蟲病的主要障礙。養(yǎng)殖場及時地掌握和評價本場球蟲的耐藥情況，才能合理地使用抗球蟲藥，正確地用藥物防控雞球蟲病。本研究以5種徐州本地常用抗球蟲藥物對某雞場柔嫩艾美耳球蟲進行耐藥性分析，以期為雞場柔嫩艾美耳球蟲病的防控提供依據(jù)，減少盲目用藥和過度用藥。

1 材料與方法

1.1 試驗蟲株

試驗蟲株由徐州市三羽家禽門診病例中某雞場球蟲病死雞分離得到?，F(xiàn)場采集病死雞盲腸內(nèi)容物，采用飽和鹽水漂浮法分離得到球蟲卵囊，經(jīng)單卵囊分離純化后，依據(jù)球蟲寄生部位、卵囊形態(tài)[2]、孢子化時間[3]鑒定為柔嫩艾美爾球蟲。將鑒定后的柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊口服接種無球蟲感染的健康雛雞，獲取擴增后的新鮮卵囊置于重鉻酸鉀溶液中，在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)至孢子化，孢子化后的卵囊液置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗藥物

百球清(托曲珠利溶液，含量2.5%)，拜耳(四川)動物保健有限公司，批號2017100801；球痢克(地克珠利溶液，含量0.5%)，河南惠康動物藥業(yè)有限公司，批號201612164；磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉，合肥中龍神力動物藥業(yè)有限公司，批號20170529；復(fù)方磺胺喹惡啉鈉可溶性粉(磺胺喹惡啉鈉、氧芐啶)，合肥中龍神力動物藥業(yè)有限公司，批號20170315；青蒿球蟲粉(荊芥、防風、青蒿等)，河南得康(致遠國際)動物藥業(yè)有限公司，批號178042701。

1.3 試驗動物

1日齡黃羽肉公雞飼養(yǎng)于徐州生物工程學(xué)院實習(xí)牧場，動物房嚴格消毒，飼養(yǎng)籠經(jīng)火焰消毒，保障飼養(yǎng)環(huán)境無球蟲，飼養(yǎng)過程中飼喂無抗球蟲添加藥物的全價飼料，按正常飼養(yǎng)管理程序飼喂至14日齡。連續(xù)2 d收集試驗雞糞便檢查無球蟲卵囊。

1.4 分組及試驗處理

對14日齡試驗雞進行空腹稱重，選取體重相近的試驗雞隨機分為百球清組(Ⅰ組，按1 mL/L兌水給藥)；球痢克組(Ⅱ組，0.2 mL/L兌水給藥)；磺胺氯吡嗪納可溶性粉組(Ⅲ組，0.3 g/L兌水給藥)；復(fù)方磺胺喹惡啉鈉禽用可溶性粉組(Ⅳ組，1 g/L兌水給藥)；青蒿球蟲粉組(Ⅴ組，1 g拌料500 g)；空白對照組(Ⅵ組不感染不給藥組)、感染對照組(Ⅶ組感染不給藥組)，共7組，每組15只。除空白對照組其它各組分別用注射器經(jīng)口向嗉囊內(nèi)灌服柔嫩艾美爾球蟲孢子化卵囊5×104個。

接種柔嫩艾美耳球蟲24 h后開始給藥，連續(xù)給藥7 d。每組試驗雞死亡后不再補充，觀察和記錄各組試驗雞的發(fā)病情況及臨床表現(xiàn)至試驗結(jié)束。

1.5 耐藥性綜合評定指標及標準

本試驗以病變記分減少率(RLS)、相對卵囊產(chǎn)量(ROP)、最適抗球蟲活性百分率(POAA)和抗球蟲指數(shù)(ACI)四項指標來綜合評定分析藥物的耐藥性。RSL=[(感染對照組病變記分-試驗組病變記分)/感染對照組病變記分]×100% ；ROP=試驗組卵囊數(shù)或者空白對照組卵囊數(shù)/感染對照組卵囊數(shù)×100%；POAA=[(試驗組增重與存活率-感染對照組增重與存活率)/(空白對照組增重與存活率-感染對照組增重與存活率)]×100%；ACI=(相對增重率+存活率)×100-(病變值+卵囊值)。

式中：卵囊值是根據(jù)角田清[4]方法計算，病變記分按照Johnson等[5]的方法進行；增重與存活率(GSR)=試驗籠末重/試驗籠初重[6]；相對增重率=(用藥組平均增重÷空白對照組平均增重)×100%；存活率=存活只數(shù)/實驗雞數(shù)×100%；病變值=每組平均病變記分×10。

1.6 耐藥性定標準

耐藥性定按照黃兵[7]方法。RSL>50%，判為陰性；RSL<50%，判為陽性；ROP<15%，判為陰性；ROP≥15%，判為陽性；POAA>50%，判為陰性；POAA<50%，判為陽性；ACI≥160，判為陰性；ACI<160，判為陽性。四項指標中有三項及以上為陽性時可判定為完全耐藥；有兩項指標為陽性時判定為中度耐藥；有一項指標為陽性時判定為輕度耐藥；各項指標均為陰性時判定為不耐藥。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

用統(tǒng)計軟件 SPSS 17.0 的 ANOVA模塊對不同藥物組的試驗數(shù)據(jù)進行方差分析，以P<0. 05 作為組間試驗數(shù)據(jù)差異顯著性的判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗球蟲藥物對艾美爾球蟲卵囊排出的影響

由表1可見，青蒿球蟲粉、球痢克、百球清組的ROP均小于15%，表現(xiàn)為耐藥陰性，復(fù)方磺胺喹惡啉鈉可溶性粉、磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉的ROP均大于15%表現(xiàn)為耐藥陽性。

表1 不同抗球蟲藥物對雞球蟲卵囊排出的影響Table 1 Effect of different anticoccidial drugs on oocystexcretion of coccidia in chickens

2.2 抗球蟲藥物對盲腸病變的影響

空白對照組未出現(xiàn)盲腸病變，RLS是從減輕腸道病變方面來評定球蟲耐藥性，青蒿球蟲粉組和百球清組RLS均大于50%為耐藥陰性，其中百球清組RLS值為56.65%在減輕腸道病變方面最表現(xiàn)最優(yōu)，復(fù)方磺胺喹惡啉鈉可溶性粉、磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉、球痢克組RLS值均小于50%為耐藥陽性(見表2)。

表2 不同抗球蟲藥物的盲腸病變計分及RLS結(jié)果Table 2 Lesion score and RLS of cecal lesions withdifferent anticoccidial drugs

2.3 抗球蟲藥物對雞體增重的影響

測定不同抗球蟲藥物對雞體增重的影響，感染對照組體重比空白組相比明顯下降(P<0.01)，各用藥組體重比感染對照組增長明顯(P<0.01)，其中青蒿球蟲粉組增重率最高為74.41%(P<0.01)。各用藥POAA均小于50%，判定為耐藥陽性(見表3)。

表3 試驗雞平均增重、相對增重及POAA結(jié)果Table 3 Average weight gain, relative weight gain and POAA of experimental chickens

2.4 抗球蟲藥物的ACI

五種抗球蟲藥物的ACI值均小于160，均為耐藥陽性(見表4)。

表4 抗球蟲藥物的ACI值及評價Table 4 ACI value and evaluation of anticoccidial drugs

2.5 抗球蟲藥物的藥效綜合評價

按照POAA、RLS、ROP、ACI 四項指標綜合判斷，徐州該雞場柔嫩艾美爾球蟲對百球清、青蒿球蟲粉中度抗藥，對球痢克、復(fù)方磺胺喹惡啉鈉可溶性粉、磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉完全抗藥(見表5)。

表5 抗球蟲藥物的藥效綜合評價Table 5 Comprehensive evaluation of the efficacy of anticoccidial drugs

3 討 論

本次耐藥性評定中所選取的藥物均是徐州獸藥市場最常見的藥物，結(jié)果表明該雞場柔嫩艾美耳球蟲對徐州地區(qū)五種常用的抗球蟲藥物都已形成不同程度的耐藥。該雞場對常用抗球蟲藥物已經(jīng)產(chǎn)生了非常普遍的耐藥性，與全國其它地區(qū)報道一致[8-10]。耐藥性的產(chǎn)生將加速禽類產(chǎn)品中藥物殘留的產(chǎn)生，加大對公共衛(wèi)生的危害。因此需要加強對本地區(qū)球蟲耐藥性的監(jiān)測，選出敏感藥物進行輪換用藥、交叉用藥、聯(lián)合用藥，減少耐藥性的產(chǎn)生。另外還可以開發(fā)新的中草藥。中草藥毒副作用小，長時間使用不易產(chǎn)生耐藥性。研究證實，青蒿素及衍生物均能提高機體免疫能力，有效減輕炎癥反應(yīng)，改善球蟲感染雞盲腸病變，恢復(fù)機體正常的生理功能[11]。黃杰等[12]評價青蒿素(ART)和癸氧喹酯(DQ)對球蟲病的預(yù)防作用結(jié)果發(fā)現(xiàn)ART對柔嫩艾美耳球蟲感染的預(yù)防效果不如 DQ，兩者聯(lián)合應(yīng)用具有明顯協(xié)同作用。青蒿素及衍生物抗球蟲效果與其用藥量、濃度、添加方式、球蟲種類也有密切聯(lián)系[11]。青蒿素與其它藥物聯(lián)合使用具有明顯的協(xié)同作用。陳永亮等[13]將ART和二甲氧芐啶(DVD)聯(lián)合應(yīng)用于抗雞柔嫩艾美爾球蟲結(jié)果發(fā)現(xiàn)存活率、病變記分、平均增重等方面ART+DVD組均高于ART組。本次試驗中選用中草藥青蒿球蟲粉，發(fā)現(xiàn)該雞場柔嫩艾美耳球蟲對青蒿球蟲粉是中度抗藥，但在增重方面青蒿球蟲粉的相對增重率優(yōu)于其它4種常用藥物。

根據(jù)本次試驗結(jié)果，徐州該雞場應(yīng)暫停使用球痢克、復(fù)方磺胺喹惡啉鈉可溶性粉、磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉防治雞柔嫩艾美爾球蟲病。為了降低球蟲對抗球蟲藥物耐藥性的產(chǎn)生，養(yǎng)殖企業(yè)進行球蟲病防控時可以先進行耐藥性測定，選出敏感藥物，再制定合理的抗球蟲防控方案。