沈亞菊，馮高樂，邵 高，朱 贊，張志方，夏天中，林瑞平*

(1.平湖市畜牧獸醫(yī)站，浙江 平湖 314200；2.平湖市動物衛(wèi)生監(jiān)督所)

高致病性禽流感在世界范圍內的家禽和野鳥中廣泛流行[1]，給我國的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失。當前我國家禽H5亞型禽流感主要流行H5N6亞型，少量H5N1亞型，偶爾分離到H5N3、H5N8和H5N2等，在野鳥和鴨上H5N8的發(fā)生呈增多趨勢，病毒HA基因進化分支有3個，主要流行的是呈全國性分布的2.3.4.4d分支，其次為在不同區(qū)域的省份出現的2.3.2.1d分支，個別病毒屬于野鳥分支。H7亞型禽流感流行主要以H7N9為主，偶爾分離出H7N8、H7N7、H7N3和H7N2等亞型，病毒HA基因分為以雞為主的H7N9分支和鴨源H7病毒，H7N9病毒隨時間出現了不同的小分支[1-3]。為有效防控高致病性禽流感，我國采取了強制免疫政策。2020年，農業(yè)部批準了針對高致病性禽流感病毒的最新疫苗“重組禽流感(H5+H7)三價滅活苗(H5N1 Re-11株+Re-12株，H7N9 H7-Re3株)”和“重組禽流感(H5+H7)三價滅活苗(H5N2 rSD57株+rFJ56株，H7N9 rLN79株)”。為了解浙江平湖市規(guī)模雞場禽流感防控現狀及免疫情況，本課題組對部分養(yǎng)雞場做了問卷調查，并對其中部分雞場進行了高致病性禽流感免疫抗體水平和病原學檢測，另選擇某雞場開展政府采購重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗(H5N1 Re-11株、Re-12株和H7N9 H7-Re3株)免疫試驗。

1 材料與方法

1.1問卷調查 通過問卷調查的形式，對8戶規(guī)模雞場進行了問卷調查，分別編號肉雞1、肉雞2至肉雞8。

1.2血清學和病原學檢測 全血樣品來自8個使用重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗(H5N1 Re-11株Re-12株 H7N9 H7-Re3株)免疫的養(yǎng)禽場，在免疫后30 d以上采集，每場采集30份，共分離血清239份，同時采集210份咽喉和泄殖腔拭子。

1.3免疫試驗

1.3.1試驗疫苗 政府采購重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗(H5N1 Re-11株、Re-12株和H7N9 H7-Re3株)，哈藥集團生物疫苗有限公司生產，批號202041，生產日期20200906。

1.3.2試驗方法 試驗用雞來自浙江省平湖市新埭鎮(zhèn)某養(yǎng)雞場，27日齡快速型黃羽肉雞120羽。免疫前先測定雞群高致病性禽流感母源抗體水平。隨機選擇60羽進行重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗一次免疫試驗，雞右側胸部肌肉注射疫苗0.5 mL/羽，于免疫后14 d、28 d、42 d采血進行抗體監(jiān)測。另擇60羽進行重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗二次免疫試驗， 首免27日齡，間隔30 d加強免疫一次，雞右側胸部肌肉注射疫苗0.5 mL/羽，首免后14 d、28 d和二免后14 d、28 d、42 d采血進行抗體監(jiān)測。

1.4檢測方法 依據《高致病性禽流感診斷技術》(GB/T 18936-2020)，采用HA和HI試驗，對H5和H7亞型免疫抗體進行檢測和結果判定。HI抗體滴度≥42為免疫抗體合格，群體陽性率≥70%為合格。病原學檢測采用禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測。

1.5診斷試劑 禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗抗原(H7-Re3株)、禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原(H5N1 Re-11株和Re-12株)和陽性血清均由哈爾濱維科生物技術開發(fā)有限公司生產，批號分別為：2021001、2019009、2019007。禽流感病毒通用型熒光 RT-PCR檢測試劑盒(B盒)，哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產，批號：20200820。

2 結果

2.1問卷調查

2.1.1養(yǎng)殖戶基本情況 本次調查的8個雞場均是家庭飼養(yǎng)場，雞場場主全部是男性，年齡45-59歲4人占50%，18-44歲3人占37.5%，60-69歲1人占12.5%。文化程度小學或初中學歷4人占50%，高中或中專學歷2人占25%，沒上過學和大專及以上各為1人，分別占12.5%。從事養(yǎng)雞5-15年5人占62.5%，5年以下2人占25%，15年以上1人占12.5%。

2.1.2養(yǎng)殖規(guī)模 8個雞場均是飼養(yǎng)肉雞，年出欄肉雞1萬-5萬羽占37.5%，10萬羽以上和1萬羽以下各占25%，5-10萬羽的12.5%。雞場死淘率2%-5%為5個占62.5%，5%-8%為2個占25%，15%以上為1個占12.5%。

2.1.3雞場防疫條件 本次調查的8個雞場周邊500 m內有村民住房集聚區(qū)，3個雞場周邊500 m內有養(yǎng)禽場。除了1個雞場門口有消毒池，8個雞場幾乎沒有生物安全防護措施，場內無門禁、圍欄圍墻等物理隔離設施，門口缺乏消毒池或消毒墊，進場無洗澡更衣、更換膠鞋等專門區(qū)域。4個雞場的生產區(qū)和生活辦公區(qū)隔開，1個雞場的供料道與出糞道分開，各養(yǎng)殖棟舍出入口均未設有消毒墊。4個雞場的進場車輛、外來人員需要消毒，5個雞場采取定期全場噴霧消毒或石灰撒播。8個雞場均未設專門的獸醫(yī)診斷室和配備體溫計、常規(guī)解剖器械等診療工具，6個雞場配有疫苗存儲專用冰箱。

2.1.4禽流感臨床知識 本次調查8個雞場場主對高致病性禽流感臨床癥狀知曉率，知曉腳鱗出血、雞冠出血或發(fā)紺、頭部和面部水腫發(fā)紫的5個占62.5%，知曉急性發(fā)病死亡、神經癥狀的4個占50%，知曉肌肉和其他組織器官廣泛性嚴重出血的2個占25%，知曉綠色稀便2個占25%。

2.1.5禽流感免疫 8個雞場均進行了重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗(H5N1 Re-11株、Re-12株和H7N9 H7-Re3株)免疫，4個雞場進行雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)滅活疫苗免疫，另1個雞場進行雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感(H9亞型)三聯(lián)滅活疫苗免疫。使用的禽流感疫苗來自哈藥集團、青島易邦的5個，來自肇慶華農、湖南中岸的各1個。8個雞場均開展禽流感免疫抗體檢測，且對免疫效果滿意。免疫程序多樣化：10日齡首免+20日齡二免，7日齡首免+30日齡二免，9日齡首免+30日齡二免，10日齡首免+30日齡二免，15日齡首免+30日齡二免。免疫劑量或按說明書推薦或比推薦劑量增加0.5倍。8個雞場對家禽疫苗免疫注意事項及具體操作熟練掌握且認真執(zhí)行，對本市的高致病性禽流感防控政策表示滿意。

2.1.6雞場盈利 各雞場盈利水平不一，肉雞平均盈利高的5-6元/羽，低的2-3元/羽，甚至虧損5元/羽。

2.2血清學和病原學檢測

由表1可以看出8個肉雞場的禽流感H5 亞型(Re-11株、Re-12株)及 H7 亞型(Re-3株)免疫抗體合格率均大于70%，達到國家規(guī)定的標準，免疫效果較好。210份咽喉和泄殖腔拭子使用禽流感通用熒光 RT-PCR 試劑盒進行檢測，結果均未檢測到禽流感病原學陽性樣品。

表1 雞場的禽流感免疫抗體檢測結果

2.3免疫試驗結果 27日齡時試驗雞群H5亞型Re-12株和H7-Re3株母源抗體完全消失，H5亞型Re-11株母源抗體的平均滴度為0.682，基本消失。首免14 d后3個疫苗株的免疫抗體平均滴度達62以上，到28 d時3個疫苗株的免疫抗體平均滴度達到高峰，均在92以上。二免14 d后3個疫苗株的免疫抗體平均滴度經過短暫小幅下降后上升至高峰水平。

表2 禽流感免疫后抗體消長規(guī)律

3 分析

問卷調查結果顯示，半數以上養(yǎng)殖戶年齡偏大、文化程度偏低，數字畜牧應用系統(tǒng)養(yǎng)殖管理使用、智能手機養(yǎng)殖APP操作困難，嚴重影響數字化畜牧業(yè)養(yǎng)殖檔案電子臺帳推行。有的肉雞場生物安全防控體系薄弱，沒有設立門崗、管理制度嚴格控制雞場與外界人流、物流，盡管有一套自己的免疫程序和消毒方法，基本做到單一品種飼養(yǎng)、全進全出、不同批次間清欄消毒空置凈化雞舍，但考慮經濟因素較多，會根據周邊疫病流行情況、市場行情來調整，執(zhí)行時可能存在不徹底、不規(guī)范。本調查發(fā)現各規(guī)模雞場禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗首免日齡7-10日齡、15日齡、30日齡均有，所用免疫程序比較混亂。臨床上血清學檢測結果8個肉雞場的禽流感H5 亞型(Re-11株、Re-12株)及 H7 亞型(Re-3株)免疫抗體合格率均大于70%，達到國家規(guī)定的標準，可能與采樣時間距離末次免疫時間長短有關。8個肉雞場的禽流感病原學陰性說明雞群未受野毒感染。

免疫試驗結果表明27日齡肉雞H5N1Re-11、H5N1Re-12、H7N9 H7-Re3三種母源抗體基本消失，這與劉婷婷[4]等研究結果相似。說明禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗的首免日齡不要晚于27日齡，否則會增加野毒感染風險。重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗首免、二免后雞群H5N1 Re-11、H5N1 Re-12、H7N9 H7-Re3三種抗體的整體消長趨勢基本同步。

本研究中8個規(guī)模雞場血清學結果和小群免疫試驗結果顯示，重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活苗(H5N1 Re-11株Re-12株 H7N9 H7-Re3株)是有效的，60日齡出欄肉雞禽流感免疫一次，100日齡出欄肉雞需在首免30 d后加強免疫一次，這樣出欄檢測時肉雞具有較高的抗體效價，能有效的降低雞群感染H5和H7亞型禽流感病毒的風險。