張大坤

膽管癌是臨床發(fā)生率較高的一種消化道腫瘤疾病，主要集中于50～70歲的中老年人群[1]。近年來(lái)隨著社會(huì)的發(fā)展和人口老年化的加快，我國(guó)膽管癌患病人數(shù)逐漸增多，嚴(yán)重危害生命健康。早期階段的膽管癌患者缺少典型癥狀，一般僅出現(xiàn)腹脹、無(wú)力、腹部隱痛、消瘦等表現(xiàn)[2]。現(xiàn)階段臨床對(duì)于膽管癌的發(fā)病原理仍沒(méi)有準(zhǔn)確定論，認(rèn)為可能和原癌基因激活、抑癌基因失活及凋亡基因失衡等因素有關(guān)[3]。本文將對(duì)膽管癌患者中Bcl-2和C-myc表達(dá)情況進(jìn)行分析，以此探討B(tài)cl-2和C-myc和膽管癌病理關(guān)系及在疾病發(fā)生、進(jìn)展中的作用，為膽管癌的臨床診療提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對(duì)象為筆者醫(yī)院普外科2018年4月-2020年4月收治的40例膽管癌患者。其中男17例，女23例；年齡48～67歲，平均（57.45±3.54）歲；臨床分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期17例，Ⅳ期7例；部位：上段膽管癌20例，中段膽管癌6例，下端膽管癌14例。將40例患者的癌旁組織（距離癌組織1 cm的肝管壁組織）標(biāo)本作為對(duì)照組，將40例患者的膽管癌組織（組織學(xué)類型均為腺癌）標(biāo)本作為試驗(yàn)組。本次研究經(jīng)過(guò)筆者所在醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

試驗(yàn)中的試劑均購(gòu)自美國(guó)MarKer生物公司，涵蓋鼠抗人C-myc單克隆抗體、Bcl-2單克隆抗體及S-P超敏試劑盒。所有標(biāo)本經(jīng)過(guò)10%福爾馬林進(jìn)行固定，并通過(guò)石蠟實(shí)施包埋，連續(xù)切片，厚度控制在4 μm。采用免疫組化方法測(cè)定Bcl-2和C-myc表達(dá)，嚴(yán)格按照配套試劑盒說(shuō)明書(shū)操作流程嚴(yán)格執(zhí)行，由專業(yè)人員操作。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性部位在細(xì)胞膜；在顯微鏡觀察下統(tǒng)計(jì)5個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞百分度，根據(jù)平均數(shù)進(jìn)行半定量計(jì)數(shù)。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為切片中陽(yáng)性細(xì)胞率在10%及以上，陰性標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性細(xì)胞率在10%以下。

C-myc陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)：胞核或胞漿染成棕黃色。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為切片中陽(yáng)性細(xì)胞率在10%及以上，陰性標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性細(xì)胞率在10%以下。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Bcl-2和C-myc表達(dá)比較

試驗(yàn)組C-myc、Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組Bcl-2和C-myc表達(dá)比較 例（%）

2.2 不同分化程度膽管癌Bcl-2和C-myc表達(dá)比較

40例膽管癌標(biāo)本均為腺癌，其中23例為高分化腺癌，13例為低分化腺癌，4例為黏液腺癌（腺癌組織學(xué)亞型）。高分化腺癌和黏液腺癌的C-myc陽(yáng)性表達(dá)率均高于低分化腺癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而高分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌的Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同分化程度膽管癌Bcl-2和C-myc表達(dá)比較 例（%）

2.3 不同組織學(xué)級(jí)別膽管癌Bcl-2和C-myc表達(dá)比較

40例膽管癌標(biāo)本根據(jù)Bloom標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)，其中18例為Ⅰ級(jí)，13例為Ⅱ級(jí)，9例為Ⅲ級(jí)。Ⅰ級(jí)膽管癌組織C-myc陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅱ、Ⅲ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)膽管癌組織Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同組織學(xué)級(jí)別膽管癌Bcl-2和C-myc表達(dá)比較 例（%）

2.4 膽管癌有無(wú)轉(zhuǎn)移患者Bcl-2和C-myc表達(dá)比較

隨訪資料顯示，40例膽管癌患者中11例發(fā)生膽管外轉(zhuǎn)移，29例未發(fā)生轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移的患者C-myc陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而轉(zhuǎn)移的患者和無(wú)轉(zhuǎn)移的患者Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 膽管癌有無(wú)轉(zhuǎn)移患者Bcl-2和C-myc表達(dá)比較 例（%）

3 討論

臨床研究人員通過(guò)對(duì)膽管癌基因和產(chǎn)物的表達(dá)情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，多種基因共同作用和變化是導(dǎo)致膽管癌發(fā)生的重要原因[4]。在腫瘤疾病中，通常會(huì)同時(shí)存在原癌基因激活、抑癌基因失活及凋亡基因失衡的情況[5]。C-myc屬于原癌基因的一種，可以加快細(xì)胞G0、G1期，一旦和其他活化基因結(jié)合并發(fā)揮協(xié)同作用時(shí)，會(huì)促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞[6]。Bcl-2屬于凋亡抑制基因的一種，自身含量大幅上升是導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生的主要原因[7]。Bcl-2存在于18號(hào)染色體，當(dāng)出現(xiàn)移位轉(zhuǎn)移至4號(hào)染色體上時(shí)，會(huì)和免疫球蛋白重鏈基因串聯(lián)成為融合基因，繼而導(dǎo)致Bcl-2基因在B淋巴細(xì)胞中的水平大幅升高，引起B(yǎng)cl-2基因編碼的Bcl-2蛋白含量異常增高，抑制細(xì)胞的正常凋亡，使細(xì)胞大量生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生[8]。

P62核內(nèi)蛋白屬于C-myc癌基因編碼形成的產(chǎn)物之一，能夠促進(jìn)細(xì)胞不間斷的生長(zhǎng)，引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞[9]。膽管癌患者P62陽(yáng)性表達(dá)率較高。王小玲等[10]學(xué)者報(bào)道指出，膽管癌患者P62陽(yáng)性表達(dá)率最高可達(dá)95%，同時(shí)陽(yáng)性率和染色強(qiáng)度與細(xì)胞分化情況之間存在密切聯(lián)系，高分化程度的膽管癌具有更高的陽(yáng)性表達(dá)率和更強(qiáng)的染色強(qiáng)度，而低分化程度膽管癌的P62陽(yáng)性表達(dá)率降低，染色強(qiáng)度下降。本次研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組C-myc陽(yáng)性表達(dá)率為87.50%。同時(shí)在高分化腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率為100%，而低分化腺癌陽(yáng)性表達(dá)率為61.54%。并且Ⅰ級(jí)膽管癌組織C-myc陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅱ、Ⅲ級(jí)，轉(zhuǎn)移得患者C-myc陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移的患者。李灼日等[11]研究中通過(guò)免疫組化法檢測(cè)了膽管癌、癌旁組織中C-myc、Bcl-2表達(dá)，結(jié)果顯示C-myc在膽管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織；在高、中分化腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率高于低分化腺癌；在Ⅰ級(jí)膽管癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅱ、Ⅲ級(jí)膽管癌，于本次研究結(jié)果一致。C-myc的表達(dá)情況和膽管癌細(xì)胞分化程度、組織學(xué)分級(jí)及腫瘤轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性之間存在密切聯(lián)系。

近年來(lái)凋亡在膽管癌的作用愈發(fā)得到關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤自發(fā)性細(xì)胞凋亡中，癌細(xì)胞依然存在對(duì)抗失控性生長(zhǎng)的凋亡機(jī)制[11]。劉菊林等[12]指出，在高分化腺癌患者中，Bcl-2通常呈高表達(dá)狀態(tài)，但和細(xì)胞浸潤(rùn)深度、組織學(xué)分級(jí)之間差異較小。柴春艷等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2在膽管癌組織中的水平明顯高于正常膽管上皮組織。本次研究中，試驗(yàn)組Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，在不同膽管癌分化程度、組織學(xué)分級(jí)及是否轉(zhuǎn)移中，Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這可能表明Bcl-2水平異常改變主要發(fā)生于膽管癌的早期階段[14]。

綜上所述，C-myc體現(xiàn)了膽管癌的惡性程度，良好地反映了膽管癌發(fā)病機(jī)制。