馮柳娟
(深圳市深業(yè)航天食品與環(huán)境檢測(cè)科技有限公司,廣東深圳 518040)
氯蟲苯甲酰胺(Chlorantraniliprole) 是一種雙酰胺類殺蟲劑,于2008年上市,目前已在世界上100多個(gè)國(guó)家銷售,中國(guó)也是氯蟲苯甲酰胺的大市場(chǎng)。氯蟲苯甲酰胺具有高效廣譜的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物中。據(jù)報(bào)道大豆、水稻是氯蟲苯甲酰胺的最大的用藥作物[1]。大豆是中國(guó)重要糧食作物之一,常用于制作各種豆制品、榨取豆油、釀造醬油和提取蛋白質(zhì)。目前,對(duì)大豆中氯蟲苯甲酰胺的研究較少,氯蟲苯甲酰胺常用的檢測(cè)技術(shù)有液相色譜法、液相色譜質(zhì)譜法、氣相色譜質(zhì)譜法。楊森等人[2]利用液相色譜法測(cè)定大豆中的氯蟲苯甲酰胺殘留量。趙軍溪[3]利用LC-MS/MS測(cè)定蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量。林毅楠等人[4]利用LC-MS/MS測(cè)定茶葉中氯蟲苯甲酰胺殘留量。國(guó)際《GB 2763—2019食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中氯蟲苯甲酰胺的限量為臨時(shí)限量,沒有相應(yīng)的檢測(cè)方法。采用GC-MS/MS法建立大豆中氯蟲苯甲酰胺殘留量測(cè)定的分析方法,為大豆的安全檢測(cè)提供技術(shù)支持。
氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(TRACE 1300-TSQ 9000),美國(guó)賽默飛公司產(chǎn)品;氮吹儀(可控溫)、電子天平(感量0.01 g)、均質(zhì)器(轉(zhuǎn)速不低于15 000 r/min)、渦旋振蕩器、粉碎機(jī)。
乙腈(色譜純)、正己烷(色譜純)、氯化鈉(分析純)、乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠(PSA)(40~60 μm)、HC-C18 專用超潔凈填料 (40~63 μm)、100 mg/L氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Anpel)、純度≥95%環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Dr.Ehrenstorfer GmbH)。
1.3.1 色譜條件
色譜柱:TG-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛細(xì)管柱。
色譜柱溫度程序:初始溫度40℃,保持1.5 min,然后以25℃/min程序升溫至90℃,保持1.5 min,以25℃/min程序升溫至180℃,以5℃/min程序升溫至280℃,以10℃/min程序升溫至300℃,保持5 min。
載氣為氦氣(純度≥99.999%),恒流,流速1.2 mL/min。進(jìn)樣量1 μL,不分流進(jìn)樣。進(jìn)樣口溫度270℃。
1.3.2 質(zhì)譜條件
離子源溫度300℃,傳輸線溫度280℃,掃描方式為SRM,方法模式為Timed,離子化模式為EI。
1.4.1 提取
取整粒大豆樣品充分混勻,將其粉碎,放入聚乙烯瓶中。用電子天平準(zhǔn)確稱取均勻的試樣5 g(精確至0.01 g)于50 mL塑料離心管中,加入10 mL水混勻,靜置30 min。再加入15 mL乙腈,均質(zhì)2 min,倒入已稱好的NaCl 5 g,劇烈振蕩1 min,以轉(zhuǎn)速5 000 r/min離心5 min。
1.4.2 凈化
取8 mL上清液至400 mg PSA、800 mg C18、1 200 mg無水硫酸鎂的離心管中,充分渦旋混勻1 min后,取凈化后的上清液2 mL于40℃水浴中氮吹至近干,加入正己烷980 μL,環(huán)氧七氯20 μL復(fù)溶后,過0.22 μm疏水性濾膜上機(jī)待測(cè)。同時(shí),做基質(zhì)空白試驗(yàn)。
配制500 μg/mL的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液,采用Full Scan、AUTOSRM及SRM等方式確定氯蟲苯甲酰胺的保留時(shí)間及特征離子對(duì),通過調(diào)節(jié)程序升溫得到較優(yōu)的儀器方法。
氯蟲苯甲酰胺和環(huán)氧七氯的離子信息見表1。
表1 氯蟲苯甲酰胺和環(huán)氧七氯的離子信息
試驗(yàn)方法前處理是采用凈化填料的不同比例(PSA∶C18=1∶1,PSA∶C18=1∶2,PSA∶C18=2∶1)進(jìn)行優(yōu)化,C18主要吸附油脂等弱極性雜質(zhì),PSA去除有機(jī)酸、色素、金屬離子和酚類等。結(jié)果顯示,3種方式的回收率均能達(dá)到回收率合格范圍(80%~120%),但PSA∶C18=1∶2雜質(zhì)峰的干擾較小,故試驗(yàn)選擇PSA 400 mg,C18 800 mg進(jìn)行凈化。
不同的凈化填料比例對(duì)氯蟲苯甲酰胺試驗(yàn)結(jié)果回收率的影響見表2,不同的凈化填料比例在空白基質(zhì)中對(duì)氯蟲苯甲酰胺的干擾情況見圖1。
表2 不同的凈化填料比例對(duì)氯蟲苯甲酰胺試驗(yàn)結(jié)果回收率的影響
圖1 不同的凈化填料比例在空白基質(zhì)中對(duì)氯蟲苯甲酰胺的干擾情況
通過逐級(jí)稀釋確定氯蟲苯甲酰胺的測(cè)定低限為0.01 mg/kg (S/N=10)。
精確吸取一定量的10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用基質(zhì)空白溶液配制標(biāo)準(zhǔn)工作液,加入20 μL內(nèi)標(biāo),配制成質(zhì)量濃度依次為20,50,100,200,500 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,曲線回歸方程為Y=2.433×106X-3.152×104,相關(guān)系數(shù)為0.999,表明該方法線性良好。
空白基質(zhì)配制的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。
圖2 空白基質(zhì)配制的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線
稱取大豆樣品各6份,按照0.02,0.06,0.10 mg/kg的質(zhì)量濃度進(jìn)行試驗(yàn)。
氯蟲苯甲酰胺試驗(yàn)結(jié)果回收率及重復(fù)性結(jié)果見表3。
表3 氯蟲苯甲酰胺試驗(yàn)結(jié)果回收率及重復(fù)性結(jié)果
結(jié)果顯示,0.02,0.06,0.10 mg/kg質(zhì)量濃度對(duì)氯蟲苯甲酰胺回收率的影響不大,均可以達(dá)到90%以上。
將處理好的大豆樣品中的氯蟲苯甲酰胺試樣重復(fù)進(jìn)樣6次,查看峰面積,試驗(yàn)結(jié)果顯示RSD為2.9%。
采用GC-MS/MS進(jìn)行大豆中的氯蟲苯甲酰胺的殘留量的測(cè)定試驗(yàn)可靠性高、準(zhǔn)確度好,可用于日常檢測(cè)工作中,可為消費(fèi)者的食品安全提供保障,可為推動(dòng)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建立提供一份依據(jù),同時(shí)滿足市場(chǎng)的需求,將大豆中的氯蟲本甲酰胺的研究延伸到多個(gè)領(lǐng)域。