劉 暢，趙新宇

（1.鞍山市檢驗(yàn)檢測認(rèn)證中心 食藥所，遼寧鞍山 114000；2.輝山乳業(yè)（沈陽）銷售有限公司研發(fā)部，遼寧沈陽 110000）

隨著我國人們生活水平的不斷提高，人們對食品安全越來越關(guān)注，農(nóng)藥殘留問題是關(guān)注的焦點(diǎn)之一。植物性食品農(nóng)藥殘留除直接來源于農(nóng)藥噴灑外，還來源于土壤和水，農(nóng)藥殘留污染是阻礙我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要原因，完善現(xiàn)有的農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)，建立健全農(nóng)藥使用管理制度是保護(hù)人們身體健康，保護(hù)土壤和水生態(tài)環(huán)境的重要手段。

吡蟲啉屬于煙堿類超高效殺蟲劑，可廣泛應(yīng)用于花生、小麥、水稻、蔬菜等作物。啶蟲脒屬于氯化煙堿類新型殺蟲劑，對有機(jī)磷、氨基甲酸酯以及擬除蟲菊酯類等農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性的害蟲具有較好效果，可防治花生、煙草、棉花等作物的蚜蟲[1-2]。《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規(guī)定，植物源性食品堅(jiān)果吡蟲啉最大殘留限量為0.01 mg/kg，堅(jiān)果啶蟲脒最大殘留限量為0.06 mg/kg[3]。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

市售花生米、榛子；甲酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙酸銨（優(yōu)級純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；甲醇（色譜純，F(xiàn)isher，美國制造）；乙酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher，美國制造）； ESI-L低濃度混合調(diào)諧液（安捷倫））；QuEChERS 萃取鹽包（深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司）；QuEChERS 凈化管（深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司）；吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所）；啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所）

1260-6460液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀配SB-C18RRHD（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色譜柱（美國安捷倫科技有限公司）；T-203電子天平（賽多利斯）；101-1AB 渦旋混合儀（天津市泰斯特儀器有限公司）；R206超聲儀（上海申生科技有限公司）；NS-10氮吹儀（上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；ALLEGRA X-30離心機(jī)（BECKMAN，美國制造）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 設(shè)備參數(shù)

柱溫：35 ℃；流動相A：0.1%（V/V）甲酸甲醇（含5 mmol/L乙酸銨），

流動相B：0.1%（V/V）甲酸水（含5 mmol/L乙酸銨），梯度洗脫：0～1 min，95%B；1～6 min，60%B；6～ 34 min，0%B；34～ 38 min，0%B；38.1 min，95%B；流速 0.2 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

離子源：AJS；掃描方式：正離子掃描；反應(yīng)監(jiān)測模式：MRM；干燥氣溫度：300 ℃；干燥氣流速：11 L/min；鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣流速：11 L/min；噴霧氣壓力：25 psi；毛細(xì)管電壓：4 000 V。質(zhì)譜的其他參數(shù)見表1。

表1 質(zhì)譜參數(shù)

1.2.2 樣品處理

（1）市售花生米。稱取粉碎后混合均勻的10 g樣品于50 mL離心管中，加入20 mL 1%乙酸乙腈，超聲提取15 min。加QuEChERS萃取鹽包于離心管中，渦旋 1 min，以8 000 r/min離心5 min。取全部上清液入QuEChERS凈化管中，渦旋1 min，以8 000 r/min離心5 min，轉(zhuǎn)移上清液，40 ℃氮吹至近干，用初始流動相定容至1 mL，渦旋混勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后備用，同時做基質(zhì)空白[4-6]。

（2）市售榛子。稱取去殼粉碎后混合均勻的5 g樣品于50 mL離心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液，超聲提取15 min。加QuEChERS萃取鹽包于離心管中，渦旋1 min，以8 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中。向裝有試樣的離心管中，再加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液，重復(fù)上述操作，合并提取液，用乙腈定容至10 mL，混勻。移取上述提取液4.5 mL至凈化管中，渦旋混勻，以8 000 r/min離心5 min，取上清液600 μL，用初始流動相定容3 mL，渦旋混勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后備用，同時做基質(zhì)空白。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別移取100 μg/mL吡蟲啉、啶蟲脒儲備液適量體積，用空白基質(zhì)稀釋成濃度為10 μg/mL的中間液，再用初始流動相稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，臨用現(xiàn)配。

1.2.4 定性測定

根據(jù)待測樣品目標(biāo)物保留時間、所選離子相對豐度比（Ratio）與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否一致來判斷待測樣品中是否存在目標(biāo)物。保留時間±5%；相對豐度＞50%，允許±20%偏差；相對豐度＞20%～50%，允許±25%偏差；相對豐度＞10%～20%，允許±30%偏差。

1.2.5 定量測定

以基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制曲線，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

采用梯度洗脫方式有效分離開吡蟲啉和啶蟲脒，見圖1；配制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液使得在扣除背景后目標(biāo)離子得以出現(xiàn)，見圖2；在55～1 000 ng/mL范圍內(nèi)，吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=103.248 239x-1 277.036 977，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 6，見圖3；在1.0～100.0 ng/mL范圍內(nèi)，啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=11 218.377 831x-23 553.253 060，相關(guān)系數(shù)R2=0.997 3，見圖3。

圖1 吡蟲啉、啶蟲脒混合標(biāo)準(zhǔn)溶液MRM色譜圖

圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液某一濃度點(diǎn)MRM色譜圖、Ratio值、質(zhì)譜圖

圖3 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

圖4 啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

采用陰性堅(jiān)果樣品，進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，測得吡蟲啉檢出限為5.50 μg/kg、定量限為11.0 μg/kg；啶蟲脒檢出限為3.0 μg/kg，定量限為10.0 μg/kg；在5.50～55 μg/kg，吡蟲啉回收率為64%～101%，精密度為3%～14%；在10.0～60.0 μg/kg，啶蟲脒回收率為93%～113%，精密度為3%～10%，詳見表2。

表2 吡蟲啉、啶蟲脒加標(biāo)回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

3 結(jié)論

通過本研究得出液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法能有效分離、定性和定量堅(jiān)果中吡蟲啉和啶蟲脒，前處理采用QuEChERS方法操作簡單、去除堅(jiān)果脂肪效果明顯、回收率高，解決了傳統(tǒng)方法多次旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、多次氮吹的耗時耗力且回收率低的困擾。