葛 琦郭穎昕

1上海上藥中西制藥有限公司（上海 201806）2江南大學（無錫 214028）

阿爾茨海默癥（Alzheimer's disease，AD）又稱老年性癡呆，是老年人的常見病之一，主要表現(xiàn)為記憶力減退及識別能力障礙等，是一種漸進性的神經(jīng)功能退行性變性疾病[1-4]。目前，膽堿酯酶抑制劑和鹽酸美金剛被批準用于治療阿爾茨海默癥[5]。其中，鹽酸美金剛是由德國Merz公司研制的癡呆癥治療藥物，是新一代改善認知功能的藥物，也是美國聯(lián)邦食品和藥品管理局（FDA）批準治療中度與重度老年癡呆癥的第一種藥物[6]。

鹽酸美金剛即1-氨基-3,5-二甲基-金剛烷鹽酸鹽（C12H21N·HCl）,其化學結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 鹽酸美金剛的化學結(jié)構(gòu)

鹽酸美金剛是一種新型N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受體拮抗藥，在人體中可非競爭性阻滯NMDA受體，降低谷氨酸引起的NMDA受體興奮度，防止細胞凋亡，改善記憶，且不良反應(yīng)輕微、安全性高、服用方便，深受醫(yī)生和患者的青睞。為了進一步控制上海上藥中西醫(yī)制藥有限公司產(chǎn)品鹽酸美金剛的質(zhì)量，參考國內(nèi)外相關(guān)文獻材料[7-10]，系統(tǒng)地研究分析了鹽酸美金剛有關(guān)物質(zhì)的測定，并采用DB-5色譜柱、利用高效氣相色譜建立了鹽酸美金剛有關(guān)物質(zhì)的測定方法。實驗結(jié)果證實：該方法具有良好的專屬性、耐用性、穩(wěn)定性，以及較高的靈敏度，進一步說明該法適用于鹽酸美金剛產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)項的檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器

XPE105電子天平、Seven Easy S20精密pH計，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Agilent 7890B氣相色譜儀、Agilent DB-5色譜柱（50 m×0.32 mm×0.52μm），安捷倫科技有限公司。

1.2 試劑

氫氧化鉀，分析純，國藥集團化學試劑有限公司；甲醇，色譜純，賽默飛世爾科技公司。

1.3 標準品

實驗過程中所使用的標準品信息如表1所示。

表1 標準品信息

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

采用DB-5（50 m×0.32 mm×0.52μm）或效能相當?shù)纳V柱；以氫氣為燃氣，流速為40 mL/min；以空氣為助燃氣，流速為400 mL/min；以氦氣為載氣，恒流速4.0 mL/min，分流比為20∶1；尾吹流速為35 mL/min。升溫程序：115℃維持6 min，以5℃/min的速率升溫至145℃，再以10℃/min的速率升溫至250℃，維持9.5 min。進樣口溫度為220℃，檢測器溫度為300℃。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 系統(tǒng)適用性溶液的制備

（1）系統(tǒng)適用性儲備液A：分別精密稱取鹽酸美金剛相關(guān)雜質(zhì)A，B，C，D，II各10 mg于20 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解后稀釋至刻度。

（2）系統(tǒng)適用性儲備液B：分別稱取鹽酸美金剛相關(guān)雜質(zhì)E，I各25 mg于50 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解后稀釋至刻度。

（3）系統(tǒng)適用性儲備液C：準確稱取鹽酸美金剛標準品100 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解后稀釋至刻度。

分別移取系統(tǒng)適用性儲備液A 0.5 mL，系統(tǒng)適用性儲備液B 0.5 mL，系統(tǒng)適用性儲備液C 5 mL置于25 mL容量瓶中，加入7.5 mL水，用甲醇溶解后稀釋至刻度，定容后加入0.25 mL 10 mol/L的KOH溶液，混勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。

1.4.2.2 供試品溶液的制備

精密稱取公司產(chǎn)品，約相當于鹽酸美金剛100 mg，置于50 mL容量瓶中，加入15 mL水，用甲醇稀釋至刻度。定容后加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，混勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.4.2.3 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸美金剛13 mg置于50 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解后稀釋至刻度，作為標準儲備液。精密移取標準儲備液2 mL于50 mL容量瓶中，加入15 mL水后用甲醇稀釋至刻度，定容后加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，混勻，作為對照品溶液。

1.4.2.4 輔料溶液的配置

精密稱取輔料2.23 g，置于50 mL容量瓶中，加入15 mL水，用甲醇稀釋至刻度，定容后加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，混勻，過濾，取續(xù)濾液作為輔料溶液。

1.4.2.5 線性溶液的配置

分別移取系統(tǒng)適用性儲備液B 10 mL、系統(tǒng)適用性儲備液C 0.5 mL，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為線性貯備液。移取線性貯備液1，2，3，4，5，6 mL，分別置于50 mL容量瓶中，各加入15 mL水，用甲醇稀釋至刻度后加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，混勻，即得線性溶液。

1.4.2.6 測定方法

分別取系統(tǒng)適用性溶液1μL注入高效氣相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度使主成分峰高的信噪比大于10，并考察分離度。再取對照溶液與供試品溶液1 μL，分別注入高效氣相色譜儀記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍，采用自身對照法計算供試品中雜質(zhì)含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性試驗

取上述輔料溶液、系統(tǒng)適用性溶液、對照品溶液、供試品溶液各1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，并扣除輔料溶液色譜峰，結(jié)果表明，在有關(guān)物質(zhì)色譜條件下，理論板數(shù)按鹽酸美金剛計為279 396，系統(tǒng)適用性試驗溶液中鹽酸美金剛與雜質(zhì)B的分離度為7.78，雜質(zhì)B與雜質(zhì)C的分離度為9.53，說明該法色譜條件分離效果良好。

2.2 檢測限（LOD）和定量限（LOQ）試驗

取線性貯備液0.5 mL置于50 mL容量瓶中，加15 mL水后用甲醇定容至刻度，再加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，混勻，作為檢測限溶液。

取線性貯備液1 mL置于50 mL容量瓶中，加15 mL水后用甲醇定容至刻度，加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，混勻，作為定量限溶液。

分別精密量取檢測限溶液、定量限溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，以主成分峰的峰高與基線噪音的信噪比約為10時的質(zhì)量濃度為定量限；將定量限質(zhì)量濃度稀釋3倍后，此時儀器的信噪比約為3，為檢測限。具體結(jié)果見表2。由表2可以看出，在上述色譜條件下，鹽酸美金剛的檢測限為1.062 1 mg/L，定量限為2.124 2 mg/L；鹽酸美金剛雜質(zhì)E的檢測限為0.986 4μg/mL，定量限為1.972 8 mg/L；鹽酸美金剛雜質(zhì)I的檢測限為0.982 1 mg/L，定量限為1.964 2 mg/L。

表2 檢測限和定量限結(jié)果

2.3 專屬性試驗

精密量取輔料溶液1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖并扣除空白溶液色譜峰及輔料溶液色譜峰。結(jié)果表明，在該條件下，輔料不干擾樣品的檢測。

2.4 線性試驗

貯備液制備：分別移取系統(tǒng)適用性儲備液B 10 mL，系統(tǒng)適用性儲備液C 0.5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋制成一系列質(zhì)量濃度的溶液。在有關(guān)物質(zhì)色譜條件下，分別精密量取1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸，結(jié)果如圖2、圖3、圖4所示。

圖2表明鹽酸美金剛線性回歸方程為：

圖2 鹽酸美金剛線性回歸曲線

y=0.592 8x+0.040 8，相關(guān)系數(shù)R2=0.992 5。

圖3表明鹽酸美金剛雜質(zhì)E回歸方程為：

圖3 鹽酸美金剛雜質(zhì)E線性回歸曲線

y=0.521 6x-0.128 5，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 4。

圖4表明鹽酸美金剛雜質(zhì)I回歸方程為：

圖4 鹽酸美金剛雜質(zhì)I線性回歸曲線

y=0.447 6x+0.084 1，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993。

鹽酸美金剛在2.124～12.745 mg/L之間，雜質(zhì)E在1.973～11.837 mg/L之間，雜質(zhì)I在1.964～11.785 mg/L之間，質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

取一份精密度中0.3%溶液，在室溫下分別放置0，6，18，28，38，48，58 h，在各時間點分別精密量取1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，觀察供試品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果見表3。由表3可知，雜質(zhì)E與雜質(zhì)I的含量極差不大于0.05%，總雜的含量極差不大于0.1%，未出現(xiàn)質(zhì)量分數(shù)高于0.05%的新雜質(zhì)，表明供試品溶液在室溫條件下58 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表3 溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果%

2.6 準確度試驗

準確移取系統(tǒng)適用性儲備液B 10 mL置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為準確度貯備液。分別移取準確度貯備液1，3，6 mL置于50 mL容量瓶中，加15 mL水后，用甲醇稀釋至刻度，分別加入0.5 mL 10 mol/L KOH溶液，制成每1 mL分別約含雜質(zhì)I 3.1，7.6，14.3μg和雜質(zhì)E 2.2，6.5，13.0μg的混合溶液，過濾，取續(xù)濾液作為準確度試驗溶液。該溶液中雜質(zhì)I和雜質(zhì)E的質(zhì)量濃度均為供試品溶液的0.1%、0.3%、0.6%。每個質(zhì)量濃度分別配制3份供試品溶液，按上述方法測定回收率。測定結(jié)果為：雜質(zhì)I平均回收率為111.6%，相對標準偏差（RSD）為5.0%；雜質(zhì)E平均回收率為111.0%，RSD為4.0%。結(jié)果表明該方法的準確度高，可靠性好。

2.7 重復(fù)性試驗

取準確度實驗中相對于供試品溶液質(zhì)量濃度0.3%的準確度溶液。同法操作6份，按上述方法檢測有關(guān)物質(zhì)，經(jīng)計算，平均總雜質(zhì)質(zhì)量分數(shù)為0.79%，RSD為11.0%，說明該測定方法具有優(yōu)異的重復(fù)性。

2.8 耐用性試驗

每次只改變一個色譜條件，取同一批供試品溶液分別精密量取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如表4所示。由試驗結(jié)果可知，載氣流速、檢測溫度在一定范圍下均不影響主藥的測定，表明該方法的系統(tǒng)耐用性良好。

表4 檢測方法耐用性試驗結(jié)果

3 結(jié)語

采用Agilent DB-5（50 m×0.32 mm×0.52μm）或效能相當?shù)纳V柱，以氫氣為燃氣、氦氣為載氣，建立利用高效氣相色譜法對鹽酸美金剛片有關(guān)物質(zhì)進行檢測的方法。該法靈敏度高、專屬性強、雜質(zhì)分離效果好、耐用性優(yōu)異、藥物質(zhì)量濃度與峰面積相關(guān)性顯著，處方中輔料不干擾主藥含量的測定，且操作簡便、檢測迅速、準確度高，適用于鹽酸美金剛有關(guān)物質(zhì)的檢測。