■劉敏杰 熊銘鑫 楊嘉成 劉 宇 汪志明 齊德生*

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北武漢 430070；2.嘉必優(yōu)生物技術(shù)（武漢）股份有限公司，湖北武漢 430223）

二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，DHA）為n-3 多不飽和脂肪酸，具有調(diào)控心血管疾病、益智、降膽固醇和三酰甘油、抗炎癥等功效[1]。我國多數(shù)地區(qū)居民膳食中普遍缺乏富含DHA 的食物，導(dǎo)致體內(nèi)DHA攝入量不足，因此需要進(jìn)行額外補(bǔ)充[2]。目前用于補(bǔ)充DHA的產(chǎn)品主要有魚油或磷蝦油、富含DHA藻類、魚肝油制劑等，但魚油類產(chǎn)品帶有異味且價格昂貴[3]。而雞蛋是人們最常見的食物之一，且蛋雞飼糧中的脂肪酸和活性營養(yǎng)成分易在蛋黃中沉積，因此通過在蛋雞飼糧中添加富含DHA的添加劑來生產(chǎn)富含DHA的雞蛋，對改善我國居民健康具有重要意義[4]。裂殖壺菌是一種單細(xì)胞海洋真菌，其胞內(nèi)油脂含量可達(dá)細(xì)胞干重的70%以上，其中DHA 含量占總脂肪含量的30%～50%，是一類含DHA 較高的藻類[5]。已有研究表明在海蘭褐蛋雞飼糧中添加裂殖壺藻粉會促進(jìn)蛋黃中DHA沉積[6-7]。但DHA是否可在蛋雞肝臟、肌肉等可食用機(jī)體組織中沉積未見有關(guān)報道。因此本研究通過在蛋雞飼糧中添加裂殖壺藻粉，研究其對蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、DHA沉積及抗氧化能力的影響，以期為裂殖壺藻粉的合理應(yīng)用及富DHA蛋生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因子重復(fù)設(shè)計，選取180只32周齡體況良好、體重相近的京粉一號商品蛋雞，隨機(jī)分為4 組，每組5 個重復(fù)，每個重復(fù)9 只雞，預(yù)飼1 周，正式試驗(yàn)4周?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加1%、2%、3%裂殖壺藻粉。試驗(yàn)用裂殖壺藻粉（DHA 含量為7.51%）由武漢某公司提供，其營養(yǎng)成分見表2。試驗(yàn)期間，采用半開放式雞舍三層立體籠養(yǎng)，自然光照加人工補(bǔ)光，光照時間16 h/d，光照強(qiáng)度20 Lx，溫度25～28 ℃；每日人工喂料2次（9：00和16：00各1次），自由采食和飲水。

表2 裂殖壺藻粉的營養(yǎng)成分(%)

1.2 樣品采集與制備

分別于試驗(yàn)的第1、2、3、4 周末從每重復(fù)隨機(jī)取4 枚雞蛋，用于測定蛋品質(zhì)指標(biāo)，隨機(jī)挑取2枚雞蛋分離蛋黃與蛋清，測定蛋黃中DHA含量（結(jié)果以鮮樣表示）。試驗(yàn)結(jié)束前禁食12 h，從每重復(fù)隨機(jī)選取2 只雞頸動脈采血于離心管中，3 500 r/min離心10 min取上清液，-20 ℃保存待測。解剖雞只取出肝臟、胸肌、腿肌等組織于-80 ℃保存待測。

1.3 測定指標(biāo)及測定方法

1.3.1 生產(chǎn)性能的測定

試驗(yàn)期每天以重復(fù)為單位準(zhǔn)確記錄產(chǎn)蛋數(shù)、總蛋重和采食量。每周末清料1次，計算該周耗料量。計算全期的平均日采食量、料蛋比、產(chǎn)蛋率、平均蛋重等生產(chǎn)性能指標(biāo)。

1.3.2 蛋品質(zhì)的測定

蛋形指數(shù)：采用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測量雞蛋的最大縱徑和最大橫徑，蛋形指數(shù)=縱徑長度/橫徑長度。

蛋殼厚度：先將雞蛋敲破取出內(nèi)容物，洗凈去膜，取雞蛋尖端、赤道、鈍端各部位一小片蛋殼，采用螺旋測微器進(jìn)行測定，結(jié)果為3個部位測定值的平均值。

蛋殼強(qiáng)度：采用EFG-0503 蛋殼強(qiáng)度測定儀測定。

蛋重、蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色：采用EMT-5200多功能蛋品質(zhì)檢測儀測定。

1.3.3 DHA含量的測定

①標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將DHA 標(biāo)準(zhǔn)品（購自Sigma公司）用異辛烷稀釋成不同濃度梯度上機(jī)測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，不同標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度梯度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立回歸方程。

②稱取2 g 左右待測樣品于50 mL 的帶蓋離心管中，加入20 mL 氯仿/甲醇（V/V，2∶1）溶液，使用TS-2 振蕩器振蕩30 min 后，靜置24 h，提取總脂肪。3 500 r/min離心10 min，上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中，加入1～2 mL純化水渦旋振蕩，分層后取下層液體吹干。取20～60 mg 脂肪于玻璃試管中，加入1 mL 0.5 mol/L氫氧化鈉甲醇溶液，沸水浴15 min。冷卻后加入2 mL 14%三氟化硼甲醇溶液，沸水浴15 min。冷卻之后再加入1 mL 異辛烷和2 mL 飽和NaCl。震蕩后靜置分層。取上清液上機(jī)待測[8-9]。

③色譜柱：Supelco 毛細(xì)血管柱（SPTM-2560，100 m×0.25 mm×0.20 μm），載氣：N2。

④將測得的樣品峰面積代入回歸方程進(jìn)行計算，得出樣品中的含量，再根據(jù)樣品重折合計算。

1.3.4 血液抗氧化指標(biāo)

血清中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量均采用試劑盒測定（南京建成生物工程有限公司）。測定步驟嚴(yán)格按照試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計分析

使用Excel 2016 整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計，用單因素方差（one-way ANOVA）進(jìn)行差異顯著性分析，對組間差異的指標(biāo)用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為顯著水平，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 裂殖壺藻粉對蛋雞生產(chǎn)性能的影響（見表2）

表3可見，與對照組相比，在飼糧中添加裂殖壺藻粉對蛋雞試驗(yàn)全期的料蛋比、產(chǎn)蛋率、平均蛋重等生產(chǎn)性能指標(biāo)無顯著影響（P>0.05）。

表3 裂殖壺藻粉對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 裂殖壺藻粉對蛋品質(zhì)的影響（見表4）

表4 裂殖壺藻粉對蛋品質(zhì)的影響

表4可見，飼糧中添加不同水平的裂殖壺藻粉不影響蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼厚度、蛋白高度（P>0.05），但可以顯著提高雞蛋蛋黃顏色值（P<0.05）。3 個試驗(yàn)組中均以1%裂殖壺藻粉添加水平的蛋黃顏色值最高，2%、3%水平組依次降低。

2.3 裂殖壺藻粉對蛋黃DHA含量的影響（見表5）

表5可見，飼糧中添加不同水平的裂殖壺藻粉可以顯著提高雞蛋蛋黃DHA 含量（P<0.05）。與對照組相比，試驗(yàn)Ⅲ組4 周的蛋黃DHA 沉積增長率分別為157%、203%、104%、192%，在第2周蛋黃中DHA沉積增長最為明顯。

表5 裂殖壺藻粉對蛋黃DHA含量的影響（%）

2.4 裂殖壺藻粉對蛋雞肌肉、肝臟組織中DHA 含量的影響（見表6）

表6 可見，飼糧中添加1%裂殖壺藻粉可以顯著提高蛋雞肝臟、腿肌中DHA 含量（P<0.05）。飼糧中添加2%、3%裂殖壺藻粉可以顯著提高蛋雞肝臟、胸肌、腿肌中DHA含量（P<0.05）。

表6 裂殖壺藻粉對肝臟、肌肉組織中DHA含量的影響（mg/g）

2.5 裂殖壺藻粉對血清抗氧化能力的影響（見表7）

表7 裂殖壺藻粉對血清抗氧化能力的影響

表7 可見，在飼糧中添加不同水平的裂殖壺藻粉，各處理組與對照組相比，對血清中的超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、總抗氧化能力和谷胱甘肽過氧化物酶等抗氧化指標(biāo)無顯著影響。

3 討論

3.1 裂殖壺藻粉對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響

裂殖壺菌在不同的氮源條件下培養(yǎng)，其營養(yǎng)成分含量會發(fā)生改變。但主要成分均是蛋白質(zhì)和脂肪[10]。已有研究表明在蛋雞飼糧中添加裂殖壺藻粉對蛋雞的平均日采食量、料蛋比、產(chǎn)蛋率等生產(chǎn)性能指標(biāo)無顯著影響[11-13]。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。說明在蛋雞飼糧中添加1%～3%裂殖壺藻粉后造成的營養(yǎng)濃度變化不足以影響其生產(chǎn)性能。

陳秀麗等[7]研究表明，在蛋雞飼糧中添加不同水平裂殖壺藻粉對雞蛋蛋品質(zhì)等指標(biāo)影響不顯著，但添加1%裂殖壺藻粉組蛋黃顏色值顯著高于其他各組。Park等[13]在蛋雞飼糧中分別添加0.5%、1.0%的裂殖壺藻粉，結(jié)果表明蛋品質(zhì)指標(biāo)無顯著差異，但0.5%添加組中蛋黃顏色顯著高于對照組和1%添加組。這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果相似，添加裂殖壺藻粉后蛋品質(zhì)無顯著變化，且1%水平組的蛋黃顏色顯著高于其他各組。裂殖壺藻粉中含有葉綠素、類胡蘿卜等天然色素[11]，這些色素被蛋雞攝入后經(jīng)過一系列轉(zhuǎn)運(yùn)沉積到蛋黃中[12]，從而加深蛋黃顏色。但本試驗(yàn)中，2%、3%水平組蛋黃顏色值反而明顯低于1%水平組，這可能是14～15 已經(jīng)是添加裂殖壺藻粉所能達(dá)到的蛋黃顏色值上限，過高的添加水平反而會干擾蛋雞機(jī)體對蛋黃色素的沉積效率，具體的劑量反應(yīng)關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。

因此，蛋雞飼糧中添加裂殖壺藻粉能夠改善蛋黃著色，且對蛋雞生產(chǎn)性能及其他蛋品質(zhì)無不良影響。

3.2 裂殖壺藻粉對蛋黃、肌肉及肝組織中DHA 含量的影響

有研究表明，在蛋雞飼糧中添加富含DHA的添加劑時，處理組與對照組相比，蛋黃中的DHA含量顯著上升，且DHA 在高含量添加處理組中含量最高[14-15]。在本試驗(yàn)中，還表現(xiàn)出隨著飼喂時間的延長，各組蛋黃DHA 含量呈上升趨勢，這說明DHA 在蛋黃中的沉積有累積效應(yīng)，尤其在3%水平組中效果較明顯。

DHA 被蛋雞采食后不僅在蛋黃中能夠沉積，也能通過血液運(yùn)輸?shù)狡渌M織中沉積。在本試驗(yàn)中DHA 在蛋雞肝臟、腿肌、胸肌中均有不同程度的沉積，尤其是在肝臟中含量較高?？赡苁且?yàn)楦闻K是脂肪酸的代謝中樞器官，而腿肌和胸肌中的DHA 含量不同可能是因?yàn)閮煞N肌肉中脂肪酸組成比例不同而導(dǎo)致的。

本試驗(yàn)結(jié)果表明添加裂殖壺藻粉會提高DHA在蛋黃、肌肉、肝臟組織中的沉積，因此通過在飼糧中添加裂殖壺藻粉促進(jìn)蛋黃中DHA 含量的增加是可行的，且還能提高肝臟和肌肉中的DHA含量。

3.3 裂殖壺藻粉對血清抗氧化能力的影響

DHA 是多不飽和脂肪酸，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能有效降低體內(nèi)系列氧化活性簇，提高蛋雞的抗氧化能力[16]。付杰等[17]分別用添加250、500、700 mg的含DHA 食用油代替大鼠飼糧中的大豆花生油，結(jié)果顯示，500 mg添加組顯著提高了大鼠肝臟中的超氧化物歧化酶活力。楊小軍等[18]在肉仔雞飼糧中添加玉米油、魚油等，結(jié)果肉仔雞肝臟、腸道等抗氧化酶活性均有不同程度的提高。劉顯軍等[19]用不同n-6/n-3多不飽和脂肪酸構(gòu)成比代替育肥豬飼糧中的脂肪酸含量，結(jié)果表明低比值組豬血清中總抗氧化能力和谷胱甘肽過氧化物酶的活性與其他各組并無顯著差異。在本試驗(yàn)中處理組蛋雞血清中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、總抗氧化能力和谷胱甘肽過氧化物酶等抗氧化指標(biāo)含量與對照組相比無顯著差異，其原因可能是隨著添加量的增加蛋雞自身抗氧化系統(tǒng)有一定的增強(qiáng)抵抗作用，本試驗(yàn)中DHA添加含量還不足以影響蛋雞的抗氧化能力，且抗氧化功能存在個體組織器官差異性。本試驗(yàn)說明飼糧中添加裂殖壺藻粉對蛋雞抗氧化能力無顯著影響，不會提高蛋雞的抗氧化能力。

4 結(jié)論

①飼糧中添加裂殖壺藻粉對蛋雞生產(chǎn)性能和抗氧化能力沒有顯著影響；

②添加1%～3%的裂殖壺藻粉可以改善蛋黃著色，添加水平為1%時效果最明顯；

③添加不同水平的裂殖壺藻粉可以顯著提高蛋雞肌肉、肝臟組織及蛋黃中DHA含量。