李素娟，袁英姿，郭梓珊，李聰穎，郭曉苑，謝小保

廣東省科學(xué)院微生物研究所，廣東省微生物分析檢測(cè)中心，華南應(yīng)用微生物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510070

涂料是廣泛用于建筑業(yè)的必要裝飾材料，使用量大。建筑物墻體的涂層是保護(hù)建筑物的重要屏障，也是裝飾建筑物的重要手段。由于涂料的成膜物質(zhì)是由多種天然或合成的高分子化合物組成的，這些物質(zhì)大多數(shù)含有微生物生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)物，若建筑物缺乏對(duì)生物的抵抗防護(hù)，將導(dǎo)致霉菌大量生長(zhǎng)而影響其使用性能，同時(shí)危害人類(lèi)的身體健康。因此，涂料防霉是非常有必要的。

比較常用的涂膜防霉測(cè)試培養(yǎng)基主要有無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂培養(yǎng)基，察氏培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基不同，測(cè)試結(jié)果可能會(huì)不相同。本文通過(guò)選取10款不同廠家生產(chǎn)的涂料，分別制備成涂膜樣本，一半樣本經(jīng)過(guò)GB/T1741—2020《漆膜耐霉菌性測(cè)定法》中規(guī)定老化方法進(jìn)行老化，另外一半樣品不經(jīng)過(guò)老化實(shí)驗(yàn)。所有樣本分別用四種不同的培養(yǎng)基進(jìn)行防霉測(cè)試，研究不同培養(yǎng)基對(duì)防霉測(cè)試結(jié)果的影響，為涂膜防霉測(cè)試提供參考。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品

隨機(jī)選取市面上不同廠家生產(chǎn)的10種涂料作為實(shí)驗(yàn)樣本，編號(hào)為1～10。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基

硝酸銨(NH4NO3)1.5 g、磷酸氫二鉀(K2HPO4)1.0 g、氯化鉀(KCl)0.25 g、硫酸鎂(MgSO4)0.5 g、硫酸亞鐵(FeSO4)0.002 g、瓊脂15 g～20 g、無(wú)離子水(蒸餾水)1 000 mL，調(diào)節(jié)pH為6.0～6.5，將上述組成的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基加熱分裝在三角瓶中，放入高壓滅菌鍋于121 ℃滅菌30 min，備用。

1.2.2營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂培養(yǎng)基

硝酸鈉(NaNO3)2.0 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.7 g、磷酸氫二鉀(K2HPO4)0.3 g、氯化鉀(KCl)0.25 g、硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5 g、硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)0.002 g、蔗糖5 g、瓊脂15 g、無(wú)離子水(蒸餾水)1 000 mL，調(diào)節(jié)pH為6.0～6.5。將上述組成的培養(yǎng)基加熱分裝在三角瓶中，于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)121 ℃滅菌20 min，備用。

1.2.3察氏培養(yǎng)基

硝酸鈉(NaNO3)3.0 g、磷酸氫二鉀(K2HPO4)1.0 g、氯化鉀(KCl)0.5 g、硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5 g、硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)0.01 g、蔗糖30 g、瓊脂15 g、無(wú)離子水(蒸餾水)1 000 mL，調(diào)節(jié)pH為7.3±0.2。將上述組成的培養(yǎng)基加熱分裝在三角瓶中，于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)121 ℃滅菌20 min，備用。

1.2.4馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)

馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、無(wú)離子水(蒸餾水)1 000 mL。將上述組成的培養(yǎng)基加熱分裝在三角瓶中，于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)121 ℃滅菌20 min。

2 實(shí)驗(yàn)菌株

黑曲霉(Aspergillusniger)CGMCC 3.5487、黃曲霉(Aspergillusflavus)CGMCC 3.3950、臘葉芽枝霉(多主枝孢霉)(Cladosporiumherbarum)CGMCC 3.2757、宛氏擬青霉(Paecilomycesvarioti)CGMCC 3.4253、桔青霉(Penicilliumcitrinum)CGMCC 3.2913、綠色木霉(Trichodermaviride)CGMCC 3.2941、出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)CGMCC 3.837、鏈格孢(Alternariaalternata)CGMCC 3.4255。

3 實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 漆膜的制備

試驗(yàn)以鋁片作為載體面板。將鋁片切割成50 mm×50 mm大小的正方形，在其中一面標(biāo)上樣品編號(hào)后，把相應(yīng)的樣品涂在鋁片的另一面，每種涂料樣品制備24片試驗(yàn)樣片，要求涂布均勻、平整并且涂料能覆蓋整個(gè)鋁片表面。實(shí)驗(yàn)所需樣片共240片，其中經(jīng)老化處理的樣本120片，不經(jīng)老化處理的樣本120片，將涂好的樣片在室溫下自然晾干備用。

3.2 老化實(shí)驗(yàn)

老化處理過(guò)程中，老化箱保證黑板溫度在輻照(干)過(guò)程中保持在(60±3)℃保持4 h，保證黑板溫度在凝露過(guò)程中保持在(50±3)℃保持4 h。老化試驗(yàn),整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中輻照度為0.83 W·m-2·nm-1,試驗(yàn)時(shí)間為100 h。處理完畢后在(23±2)℃，濕度(50±5)%環(huán)境中調(diào)節(jié)4 h，再進(jìn)行防霉實(shí)驗(yàn)。

3.3 防霉實(shí)驗(yàn)方法

將適量的已滅菌的不同培養(yǎng)基倒入滅菌的90 mm無(wú)色玻璃培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)基厚度為3 mm～6 mm，待培養(yǎng)基凝固后，備用。

將實(shí)驗(yàn)菌株分別轉(zhuǎn)接至PDA斜面培養(yǎng)基上(28±1)℃培養(yǎng)7 d～14 d。實(shí)驗(yàn)前用無(wú)菌水將培養(yǎng)好的各霉菌孢子洗出，收集至滅菌的三角瓶中，振蕩分散孢子，并用玻璃纖維濾紙過(guò)濾菌絲和培養(yǎng)基，制成混合孢子液。將所有的樣片放在凝固的培養(yǎng)基表面，將混合孢子懸浮液均勻地接種到整個(gè)樣品和周邊的培養(yǎng)基上。對(duì)每一種培養(yǎng)基，每個(gè)樣品做3個(gè)平行。將已接種的實(shí)驗(yàn)樣品放入培養(yǎng)箱，于溫度為(28±1)℃、相對(duì)濕度不低于85%的條件下培養(yǎng)28 d，觀察結(jié)果。

4 結(jié)果與討論

經(jīng)過(guò)28 d培養(yǎng)后，按照GB/T1741—2020《漆膜耐霉菌性測(cè)定法》[2]中規(guī)定的評(píng)價(jià)方式對(duì)樣品長(zhǎng)霉情況進(jìn)行判斷，結(jié)果按表1評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。

表1 長(zhǎng)霉情況評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

4.1 不經(jīng)耐久性處理的樣品結(jié)果

由表2可知，不同培養(yǎng)基對(duì)樣品的測(cè)試結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定，不同培養(yǎng)基間的結(jié)果測(cè)試差別不大。測(cè)試結(jié)果也取決于涂料防霉劑的能力[3]。當(dāng)樣品的防霉效果較強(qiáng)時(shí)，如樣品1和4，結(jié)果判定都是0級(jí)，其培養(yǎng)基的種類(lèi)和含糖量對(duì)樣品的結(jié)果沒(méi)有影響；而當(dāng)樣品防霉效果較弱時(shí)，如樣品3和9，結(jié)果判定都是4級(jí)，無(wú)論是不含糖的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基還是含糖量很高的察氏或PDA培養(yǎng)基，其樣品的測(cè)試結(jié)果都是很差。而防霉效果中等強(qiáng)度的情況下，如樣品5和7，結(jié)果判定有差異，含糖量高的培養(yǎng)基(察氏和或PDA培養(yǎng)基)長(zhǎng)霉等級(jí)比不含糖或含糖量少的培養(yǎng)基(無(wú)機(jī)鹽和營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)基)等級(jí)稍高，說(shuō)明糖多的情況下，霉菌生長(zhǎng)較好，越難抑制其生長(zhǎng)，防霉等級(jí)越高。含糖量只有5%的營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)基，其培養(yǎng)結(jié)果和無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基一致。

表2 不經(jīng)老化處理的樣品實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.2 經(jīng)老化處理后的樣品結(jié)果

由表3可知，經(jīng)老化處理100 h后的樣品防霉測(cè)試結(jié)果與未經(jīng)老化處理的樣品的測(cè)試結(jié)果比較，用無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基測(cè)試結(jié)果，除了樣品5、7、8和10的耐霉菌性能等級(jí)均比未經(jīng)老化處理的樣品防霉等級(jí)增加1級(jí)，其余樣品的測(cè)試結(jié)果都是一致的。而察氏培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果，除了防霉效果較好的樣品1、4以及防霉效果較差的樣品3、9耐霉菌性能等級(jí)未發(fā)生變化，其余經(jīng)老化處理后的涂料樣品耐霉菌性能等級(jí)均變?yōu)?級(jí)。用營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)基測(cè)試結(jié)果，除了防霉效果較好的樣品1、4以及防霉效果較差的樣品3、9耐霉菌性能等級(jí)未發(fā)生變化，其余樣品的耐霉菌等級(jí)發(fā)生了不同程度的改變，樣品5和8耐霉菌性能等級(jí)由老化處理前的0級(jí)變?yōu)?級(jí)，樣品2由1級(jí)變?yōu)?級(jí)，樣品6和7由原來(lái)的3級(jí)和2級(jí)，都變成老化后的4級(jí)，而樣品10則由原來(lái)的0級(jí)變成老化處理后的3級(jí)。可以看出含糖量只有5%的營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)基對(duì)經(jīng)老化處理的樣品的耐霉菌性能等級(jí)區(qū)分度較高。

表3 經(jīng)老化處理后的樣品實(shí)驗(yàn)結(jié)果

室外用涂膜產(chǎn)品雖然能夠通過(guò)防霉測(cè)試，但在實(shí)際使用中，涂膜受日光照射，雨水沖刷后，有些產(chǎn)品防霉能力大幅下降，因此，考慮到更符合實(shí)際應(yīng)用，有必要對(duì)涂膜樣品進(jìn)行老化耐久處理。老化的處理方式現(xiàn)在主要有GB/T1741—2007《漆膜耐霉菌性測(cè)定法》[2]標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的流水沖刷的方法和HG/T3950—2007《抗菌涂料》[1]中規(guī)定的紫外照射的方法，中國(guó)建筑科學(xué)研究院石玉梅等[4]做過(guò)少量耐久研究，彭紅等[5]也對(duì)防霉效力的測(cè)試進(jìn)行了研究。而本實(shí)驗(yàn)所用到的老化方式，是參照了新版的漆膜耐霉菌性能?chē)?guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T1741—2020《漆膜耐霉菌性測(cè)定法》[6]，這種老化方式是由紫外照射和凝露交替進(jìn)行，一直在涂料樣品的色牢度等性能測(cè)試中廣泛應(yīng)用，更加貼近實(shí)際使用情況。

5 結(jié)論

培養(yǎng)基配方中的含糖量多少，決定了測(cè)試過(guò)程中培養(yǎng)基本身的長(zhǎng)霉情況。而涂膜樣品的防霉能力不同，對(duì)培養(yǎng)基的敏感程度也不相同。用不同培養(yǎng)基對(duì)涂膜樣品進(jìn)行防霉等級(jí)測(cè)試，當(dāng)涂膜樣品的防霉能力特別高或特別低時(shí)，測(cè)試結(jié)果差異不大；而當(dāng)樣品的防霉能力中等時(shí)，測(cè)試結(jié)果經(jīng)常存在差異。尤其經(jīng)過(guò)老化處理后的涂膜樣品，防霉等級(jí)一般會(huì)有不同程度的降低，選擇合適的培養(yǎng)基可以對(duì)涂膜產(chǎn)品老化后的防霉效果更好的區(qū)分，以增加產(chǎn)品的區(qū)分度。

不同的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)里所用的培養(yǎng)基多數(shù)會(huì)存在差異，在進(jìn)行涂料防霉測(cè)試時(shí)，采用的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)不同，可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的差異。因此，比較不同涂料產(chǎn)品的防霉等級(jí)，要在同一標(biāo)準(zhǔn)同一培養(yǎng)基的測(cè)試條件下比較才有意義。