潘忠強，尹 濤，邵 陽，焦功強

（青島市農業(yè)科學研究院，山東青島 266100）

0 引言

草莓肉含有蛋白質、糖、果膠等營養(yǎng)成分，其維生素C含量高于蘋果、葡萄等水果。除新鮮食品外，草莓還可以加工成罐頭、果醬、果酒、飲料等產品。接種培養(yǎng)材料后的組織培養(yǎng)過程中，由于機械損傷，酚類化合物從傷口流出。曬黑后逐漸擴散到培養(yǎng)基中，導致細胞中酶活性的增長，從而影響細胞的代謝工作。在組織培養(yǎng)中，它傷害了整個組織，導致組織死亡。草莓栽培過程中，要做好防止草莓莖尖組織培養(yǎng)褐變的工作。

1 相關試驗材料以及方式

1.1 選取的試驗材料

選擇生長較好的紅顏母株進行試驗，母株上新長的匍匐莖頂端長度為：3～4 cm為此試驗材料。

1.2 相關試驗處理

1.2.1 外植物體的處理工作。檢驗材料浸在自來水中30 min，用洗滌劑處理，用自來水沖洗30 min，用無菌水沖洗3次，然后送到清潔工作臺消毒。

1.2.2 培養(yǎng)莖尖工作。嫩葉在解剖顯微鏡下從外面一層一層地被剝掉，直到顯露出半圓球形頂端分生組織。選取大小為0.3～0.4 mm的莖尖被切割，接種成三角形瓶（50 mL），從誘導中心灌滿進行培養(yǎng)，每瓶接種四個莖尖。為解決草莓早期誘導培養(yǎng)中的褐變問題，介紹了幾種抗褐變措施。上一次測試完成并進行統計分析后，開始下一次測試。每次接種練習10瓶，重復三次。栽培條件陽光光照為1500～2000 Lx，每天12 h，溫度16～22℃。

1.2.3 繼代增殖培養(yǎng)。淺綠色愈傷組織出現后，在ms+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L laa+agar10 g/L+30 g/L培養(yǎng)基中接種誘導培養(yǎng)。15～20天后，分化形成的不定芽首次發(fā)芽，同時根據草莓繼代增殖培養(yǎng)工作中出現的玻璃化問題進行研究，從第一次培養(yǎng)開始進行分析。

此試驗，對不同濃度的6-BA培養(yǎng)基進行設置，從而將培養(yǎng)基基礎的成分分為以下幾種：MS+瓊脂10 g/L+蔗糖30 g/L，培養(yǎng)的時間平均分為25～30天。同時柱形組織培養(yǎng)瓶分為三個，選擇350 mL，均透氣的瓶子，進行接種工作，接種三個不定芽，每個接種十瓶，接種三次，培養(yǎng)的首要條件為1500～2000 Lx，12 h/天，培養(yǎng)的相關溫度為16～22℃。

1.2.4 培養(yǎng)誘導生根。對繼代培養(yǎng)工作中，整體的植物株體進行接種，選取株體高度為2 cm的試管苗進行誘導生根，培養(yǎng)基選取1/2MS。在15～20天之后，試管苗根生長到2 cm以上，生根數達到2根以上，苗株高達5 cm時，進行移栽。

1.3 相關測試方式以及指標

1.3.1 莖尖誘導培養(yǎng)試驗。此外，接種工作后，應對莖尖表面進行檢驗，如全部變?yōu)楹稚?，則認定該莖尖出現褐化現象。接種工作結束后，如莖尖出現膨大愈傷組織等現象，應認定莖尖誘導后發(fā)生萌發(fā)現象。

褐化率以及萌發(fā)率應按照相關公式進行計算，如褐化率=∑（每瓶褐化莖尖數/每瓶莖尖數）每重復瓶數×100%，萌發(fā)率=∑（每瓶萌發(fā)莖尖數/每瓶莖尖數）每重復瓶數×100%。

1.3.2 培養(yǎng)繼代增殖試驗工作。培養(yǎng)繼代增殖試驗工作中，根據不同濃度的6-BA續(xù)代，對培養(yǎng)基試驗進行三次培養(yǎng)，對不定芽進行接種，在30天后，對玻璃化以及增殖系數進行數據統計。此外，對試管苗的表現進行觀察，如試管苗出現透明或半透明現象，或試管苗發(fā)生易碎，組織結構畸形等現象，則認定為玻璃化現象。

1.4 相關試驗數據分析

Excel 2007用于相關測試數據的分析，SAS9.0軟件用于統計分析。成員函數數據用于計算每個測試。會員函數的相關計算公式為R（X）i=（Xi-Xmin）/Xmax-Xmin。反向成員函數計算公式為R（X）i=1-（Xi-Xmin）/（Xmax-Xmin），其中Xi表示每個測試索引的適應性，每個索引轉換以實現平均值，對防褐化以及玻璃化效果進行評價分析。

2 結果與分析

2.1 不同濃度

6-BA處理對褐變的影響相比，添加6-BA（p＜0.05）可以顯著提高發(fā)芽率，抑制莖尖的發(fā)芽率（p＜0.05），但隨著6-BA處理濃度的增加，莖尖的發(fā)芽率和發(fā)芽率不會上升或下降。在所有處理中，A2的發(fā)芽率最高，其次是A3，但二者之間沒有顯著差異。成員功能分析表明A2的發(fā)芽率最高。

CK的曬黑率最高，為91.05%，A3為最低。并非所有效果都能通過評估發(fā)芽率或曬黑速度得到很好的反映。只有評估這兩個指數，我們才能準確反映不同治療方法的差異。

2.2 對于黑暗的預處理工作以及Vc對莖尖防褐化分析

黑暗預處理中，褐化率呈現出下降趨勢，此外與CK進行比較分析，兩組差異不明顯，不具備可比性意義。

黑暗預處理工作中，處理工作達到2天時，萌發(fā)率呈現出升高趨勢，但是兩組之間的差異性還是不顯著。

此外，添加V c 后，發(fā)芽率也逐漸提高，兩組（p＜0.05）相當，褐色率顯著下降（P＜0.05）。B5的發(fā)芽率最高，褐色率最低。B5和B6治療沒有顯著差異。經過計算和充分分析，B5的總體評價值最高，其次是B6。

2.3 不同濃度

比較了6-BA對草莓芽玻璃的影響。第一次培養(yǎng)后，CK的增殖因子明顯高于其他方法（p＜0.05）。隨著6-BA濃度的降低，隨機芽增殖系數下降，一些隨機芽在CK中結冰。

第二種培養(yǎng)后，隨機芽C1的乘法系數最高，為6.75，但與CK無顯著差異。培養(yǎng)后，每次治療的隨機芽顯示出不同程度的玻璃，但玻璃率明顯低于CK（p＜0.05）。

按照第三次培養(yǎng)模式，芽增殖不定系數和單個處理的玻璃化率明顯低于CK（p＜0.05），芽增殖不定系數隨濃度下降6-BA呈下降趨勢，根據成員功能，C1在第一次、第二次和第三次培養(yǎng)中的總值最高。

合成了第一、第二、第三培養(yǎng)中不定芽的增殖系數和玻璃化率，并對平均值進行了比較分析。發(fā)現CK中不定芽的倍增系數最高，為6.30，其次是C1，但C1和CK之間沒有顯著差異。6-BA濃度降低，不定芽的玻璃化率顯著降低，C3的最低值僅為14.14%。此外，還發(fā)現具有成員資格函數的C1總值最高。

2.4 培養(yǎng)生長以及褐化、玻璃化

當前，通過莖尖組織培養(yǎng)進行無病毒苗培育，是市面上快速繁殖草莓以及無毒苗的主要方式。本研究結果顯示，草莓剝去莖尖接種培養(yǎng)方式，大致咋3～7天內就會出現愈傷組織，然而咋在20～25天后，愈傷組織一般會變?yōu)闇\綠色，在培養(yǎng)35～40天后會形成不定芽，然后在30天內進行繼代組織培養(yǎng)，從而形成完整的植株，植株高達兩厘米，進行誘導生根，20天內進行移栽。

3 結語

相關研究表明，褐變主要由苯酚氧化形成，在多酚氧化酶作用下形成喹諾酮。在組織培養(yǎng)中添加抗氧化劑或吸附劑可以防止喹諾酮的形成。Vc作為抗褐變劑也廣泛應用于植物組織培養(yǎng)中。通過過濾過濾將Vc添加到培養(yǎng)基中可以大大降低銑削莖尖的褐變率，但操作需要大量時間和勞力。但是，采用VC解決方案浸泡草莓跑步者的端蓋比較容易。Vc溶液濃度為300 mg/L時，發(fā)現能顯著降低莖尖的褐變率，從而促進外來愈傷組織，并能顯著提高發(fā)芽率。

Vc浸漬時間達到9 min后，褐變與控制相比明顯下降，表明褐變只有在一定時間內浸入Vc溶液后才能停止。此外，在培養(yǎng)基中間添加PVP抗氧化劑可以大大降低草莓莖尖的褐變率，也可以促進愈傷組織，發(fā)芽率最高可達100%。但加入活性炭吸附對褐變沒有明顯影響。

綜上所述，將草莓芽浸泡在Vc溶液中，在培養(yǎng)基中間加入抗氧化PVP，可以大大抑制草莓莖尖的褐變，促進草莓莖尖的愈傷組織萌發(fā)。