鐘煌培，陳培陽，李曲文

1.泉州市鯉城區(qū)疾病預(yù)防控制中心，福建泉州 362000；

2.泉州市惠安縣疾病預(yù)防控制中心，福建惠安 362100；

3.福建省疾病預(yù)防控制中心，福建福州 350001

副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus， VP）是一種嗜鹽生長的革蘭氏陰性弧菌，是常見的食源性疾病和感染性腹瀉病原菌［1］。2018年9月6日下午15：30，泉州市鯉城區(qū)疾病預(yù)防控制中心接到泉州市中醫(yī)院報(bào)告，該院急診科收治6例嘔吐、腹瀉癥狀患者，結(jié)合臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析，確定為副溶血性弧菌引起的食物中毒事件。研究通過對(duì)6例由副溶血性弧菌引起的食物中毒進(jìn)調(diào)查分析，為今后更好地防控食物中毒事件提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

來自于泉州市中醫(yī)院收治6名嘔吐、腹瀉癥狀患者，其中男性4名，女性2名，年齡35～51歲，平均年齡3（9.6±6.7）歲。臨床表現(xiàn)6例患者以腹痛、嘔吐、腹瀉等急性胃腸炎癥狀為主，目前病情穩(wěn)定。大部分病例血常規(guī)檢查提示：白細(xì)胞計(jì)數(shù)增高、中性粒細(xì)胞百分比增高。臨床治療包括：西藥予蘭索拉唑、鋁鎂混懸液、磷酸異帕米星、酪酸梭菌腸球菌及補(bǔ)液、維持水電解質(zhì)平衡等治療。就診病例情況一覽表，見表1。

表1 就診病例情況一覽表

1.2 主要儀器試劑

熒光PCR儀器為ABI7300 plus，核酸檢測(cè)試劑來自深圳生科源。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、志賀氏菌顯色培養(yǎng)基、弧菌顯色培養(yǎng)基和MYP蠟樣芽孢桿菌培養(yǎng)基等檢測(cè)試劑來源于廣東環(huán)凱微生物試劑公司和科瑪嘉。MALDI-TOF MSMicroflex TM LT型（德國Bruker公司）、MSP 96孔靶板和α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì)（HCCA）購自德國Bruker公司，甲酸、乙腈和三氟乙酸購自美國Sigma公司。

1.3 方法

對(duì)6例患者進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，采集樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)依據(jù)GB-4789《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)》［2］進(jìn)行沙門氏菌、志賀氏菌、霍亂狐菌、蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌，并利用利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行常見致病菌的核酸檢測(cè)，PCR檢測(cè)參照試劑說明書進(jìn)行常見致病菌核酸的檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 流行病學(xué)分析結(jié)果

（1）時(shí)間分布：6例患者發(fā)病時(shí)間為9月6日凌晨1：00至6：00，宴會(huì)進(jìn)餐時(shí)間為9月5日中午12：00，發(fā)病時(shí)間集中在進(jìn)餐后13～18 h（2）地點(diǎn)分布：患者集中分布于9月5日中午在該宴會(huì)就餐人員。（3）人員分布：男性4個(gè)，女性2個(gè)。（4）飲食史：患者均參加宴會(huì)，有共同進(jìn)食相同食物。

2.2 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 分離培養(yǎng) 6份肛拭子標(biāo)本經(jīng)分離培養(yǎng)鑒定，在弧菌科瑪嘉顯色培養(yǎng)基均長有紫紅色菌落，提示為檢出副溶血性弧菌，而沙門氏菌、志賀氏菌、霍亂狐菌、蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌均未檢出。

2.2.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果 6株菌株經(jīng)質(zhì)譜鑒定分析，均為副溶血弧菌，具體鑒定情況，見表2。

表2 4質(zhì)譜鑒定結(jié)果

2.2.3 核酸檢測(cè)樣本經(jīng)試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA后，進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)顯示副溶血性弧菌核酸為陽性，而沙門氏菌、志賀氏菌、霍亂狐菌、蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌和致瀉性大腸埃希氏菌核酸檢測(cè)均為陰性。

2.2.4 毒力基因檢測(cè) 6份副溶血性弧菌核酸陽性的標(biāo)本中，均攜帶耐熱直接溶血素（tdh）和不耐熱溶血毒素基因（tlh）。

3 討論

副溶血性弧菌是一種存在于魚、蝦、貝類等海產(chǎn)品中的革蘭陰性菌，是最常見導(dǎo)致食源性疾病的病原菌，常由于攝入生的或未煮熟的海產(chǎn)品，引起發(fā)熱、腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐等急性胃腸炎癥狀，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致昏迷、休克和死亡［2-4］。此事件患者有共同就餐史，發(fā)病時(shí)間相對(duì)集中，臨床癥狀相似，肛門拭子中均檢出副溶血性弧菌，且潛伏期和臨床癥狀都與之相符，患者之間無相互傳染現(xiàn)象，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，判定此為一起副溶血性弧菌引起的食物中毒事件。

由于短期內(nèi)出現(xiàn)多例疑似病例，本文也通過聯(lián)合了常規(guī)分離培養(yǎng)、質(zhì)譜鑒定及熒光PCR快速篩查檢測(cè)，并及時(shí)得到了副溶血性弧菌核酸PCR陽性結(jié)果，對(duì)于疫情的處理和控制，取到了一定的輔助作用。同時(shí)后期對(duì)分離培養(yǎng)出來的6例菌株進(jìn)行耐熱直接溶血素基因（tdh）和不耐熱溶血毒素基因（tlh）檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)6株菌株均攜帶tdh和tlh基因，tdh和tlh基因編碼的耐熱溶血素和不耐熱溶血素是副溶血性弧菌的致病因子。tlh基因編碼的不耐熱溶血毒素能與卵磷脂結(jié)合能使綿羊紅細(xì)胞溶血，tlh基因具有廣泛種屬特異性，tlh基因?yàn)楦比苎曰【奶禺愋曰颉６玖騮dh編碼耐熱直接溶血素（TDH），它能溶解人或者兔血紅細(xì)胞，這一現(xiàn)象叫神奈川現(xiàn)象（Kanagawa phenomenon，KP），這也是常被用于區(qū)分致病性和非致病副溶血性弧菌菌的一個(gè)標(biāo)志［5-9］。tdh基因陽性不一定是副溶血性弧菌，如非O1群霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌、霍利斯弧菌中的tdh基因與副溶血性弧菌同源性達(dá)93%～96%［10-11］，這在今后的檢測(cè)工作中應(yīng)引起重視，應(yīng)用多重PCR檢測(cè)試劑并結(jié)合相應(yīng)的生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定等，以防止誤診。

從食物中毒事件來看，對(duì)于今后防范食物中毒應(yīng)要加強(qiáng)食品從業(yè)人員的管理和培訓(xùn)，增強(qiáng)食品安全意識(shí)。食物要煮熟煮透，生熟要分開避免交叉污染，廚具、餐飲具應(yīng)當(dāng)消毒使用。熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)在食物中毒的處理中具有快速、準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)［12-14］，可輔助用于處理各種突發(fā)公共衛(wèi)生事件為提供快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果發(fā)揮重要作用。