萬智敏，羅水秀

1.湖南省人民醫(yī)院檢驗科，湖南長沙 410005；2.湖南師范大學醫(yī)學院，湖南長沙 410006

陰道作為女性生殖系統(tǒng)的開放通道，連接著女性生殖系統(tǒng)的內(nèi)外器官。陰道分泌物俗稱“白帶”，是一種從陰道中排出的稀糊狀、帶黏性、無氣味的白色液體。它是由子宮內(nèi)膜和輸卵管及宮頸腺體的分泌物、陰道黏膜的滲出液、不具有致病性的乳酸桿菌和陰道脫落的表皮細胞等成分組成［1］，臨床上常見的許多婦科疾病都存在明顯的陰道微生態(tài)系統(tǒng)失衡，從而引起陰道分泌物的異常，目前檢測陰道分泌物常用的檢測方法包括鏡檢法和化學檢測法，鏡檢法價格低廉、操作簡便、耗時短，但受較多主觀因素的影響，重復性差?；瘜W檢測法受主觀因素影響較少，但對于分泌物中細胞形態(tài)的辨認、真菌和滴蟲的鑒別等存在不足［2］。將鏡檢法與化學檢測法以及兩種方法結(jié)合起來的聯(lián)合檢測法綜合進行比較分析能為臨床診斷陰道疾病提供較高的參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年9—11月間湖南省人民醫(yī)院同時行鏡檢法與化學檢測法的200例患者作為研究對象。年齡23～58歲，平均年齡（34.7±5.3）歲。研究對象應在取樣前24 h禁止盆浴、性交、陰道灌洗及局部用藥等，在48 h內(nèi)沒有使用過陰道潤滑劑等化學物質(zhì)。月經(jīng)期間不宜進行陰道分泌物檢查，一般資料具有可比性。

1.2 標本采集

標本采集由婦產(chǎn)科醫(yī)生操作。首先將一次性陰道窺器放入患者陰道內(nèi)，然后用醫(yī)用消毒棉簽在陰道內(nèi)約4 cm處的陰道壁上旋轉(zhuǎn)1周，重復以上操作一次，即采集兩份陰道分泌物標本，隨后分別放入兩個干燥潔凈的塑料試管中并送檢，同時進行陰道分泌物常規(guī)檢測和化學檢測。

1.3 實驗儀器與試劑

光學顯微鏡（奧林巴斯Olympus CX31），LTS-V400陰道炎檢測儀（珠海市麗拓生物科技有限公司），陰道炎五聯(lián)檢測試劑盒（珠海市麗拓生物科技有限公司）。

1.4 方法檢測原理

1.4.1 鏡檢法采用形態(tài)學方法，在高倍鏡下找白細胞、真菌、滴蟲、線索細胞。

1.4.2 化學檢測法（1）白細胞酯酶（LE）檢測。白細胞內(nèi)含有LE，它可以水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出一種無色的物質(zhì)，即溴吲哚基，遇特殊物質(zhì)后發(fā)生反應呈現(xiàn)出藍綠色，呈色的深淺反映出LE的活性。（2）β-氨基半乳糖苷酶（NAG）檢測。真菌和滴蟲內(nèi)有較強的NAG活性。NAG可以水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷酶，釋放出的對硝基苯，可以在堿性條件下，呈現(xiàn)黃色，顏色深淺與酶活性成正比。（3）唾液酸苷酶（SNA）檢測。SNA是加德納菌、厭氧菌等細菌性陰道?。˙V）致病菌的一種特異性酶。其原理為SNA通過水解5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基，與特殊物質(zhì)發(fā)生反映呈現(xiàn)藍綠色，顏色深淺與酶活性成正比。陰道分泌物檢測指標，鏡檢法與化學檢測法相對應的各項指標，見表1。

表1 兩種方法相對應的各項檢測指標

1.5 實驗步驟

1.5.1 鏡檢法采用日本Olympus光學顯微鏡，在潔凈的玻片上滴1～2滴0.9%生理鹽水，然后用蘸有陰道分泌物樣本的醫(yī)用消毒棉簽均勻地涂于潔凈的玻片上，于顯微鏡下進行檢查，先用低倍鏡瀏覽全片，再用高倍鏡觀察。在鏡下觀察白細胞、真菌、滴蟲和線索細胞。

1.5.2 化學檢測法化學檢測法，又稱五聯(lián)檢法，采用LTS-V400陰道炎檢測儀和相應的陰道炎五聯(lián)檢試劑盒（采用化學反應法），嚴格按照說明書進行操作，注意試劑盒應在保質(zhì)期內(nèi)使用。

1.6 結(jié)果評估標準

1.6.1 鏡檢法評估標準（1）白細胞或者膿細胞超過15個/HP，即“陽性”；（2）在高倍鏡下看到真菌及菌絲，即“陽性”；（3）在高倍鏡下看到滴蟲，即“陽性”；（4）在高倍鏡下看到線索細胞，并且每個視野超過20%，即“陽性”。

1.6.2 化學檢測法評估標準 （1）LE：不顯色為“陰性”，提示正常，顯藍綠色為“陽性”，提示有炎癥。（2）β-NAG：不顯色為“陰性”，顯黃色，為“陽性”，提示真菌或者滴蟲感染。（3）SNA苷酶：不顯色為“陰性”，提示正常，顯藍綠色為“陽性”，提示細菌感染。注意由于陰道炎化學檢測法的試劑盒的說明書上并沒有寫明可以根據(jù)β-氨基半乳糖苷酶將真菌和滴蟲感染區(qū)分開來，因此真菌和滴蟲將作為一項指標分析，在鏡檢法中若見到真菌及菌絲、滴蟲，任意一個為陽性即陽性。

1.7 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三種檢測方法對白細胞檢出率的比較

對于陰道分泌物中白細胞鏡檢法的陽性檢出率為49%，化學檢測法的陽性檢出率為60%，聯(lián)合檢測法的陽性檢出率為64%，鏡檢法分別與化學檢測法和聯(lián)合檢測法比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=4.88、8.54，P＜0.05），聯(lián)合檢測法與化學檢測法比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 三種檢測方法對白細胞檢出率的比較例（%）

2.2 三種檢測方法對直菌或滴蟲檢出率的比較

對于陰道分泌物中真菌或滴蟲檢測鏡檢法的陽性檢出率為10.0%，化學檢測法的陽性檢出率為17%，聯(lián)合檢測法的陽性檢出率為18%，鏡檢法分別與化學檢測法和聯(lián)合檢測法比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），化學檢測法與聯(lián)合檢測法比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=4.20、5.32，P＞0.05），見表3。

表3 三種檢測方法對真菌或滴蟲檢出率的比較 例（%）

2.3 三種檢測方法對BV檢出率的比較

對于BV檢測，鏡檢法的陽性檢出率為11.0%，化學檢測法的陽性檢出率為18%，聯(lián)合檢測法的陽性檢出率為19%，鏡檢法分別與化學檢測法和聯(lián)合檢測法比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=4.07、16.10，P＜0.05），聯(lián)合檢測法與化學法比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.25，P＜0.05），見表4。

表4 三種檢測方法對細菌性陰道?。˙V）檢出率的比較例（%）

3 討論

對于白細胞檢測，化學檢測法陽性率顯著高于鏡檢法。聯(lián)合檢測法與化學檢測法有高度的一致性。化學檢測法陽性率高于鏡檢法的原因主要是陰道分泌物內(nèi)很多白細胞發(fā)生破碎，導致鏡下白細胞減少，造成鏡檢法結(jié)果為假陰性。白細胞破碎會釋放LE，因此，化學檢測法的結(jié)果不受影響，準確性較高。鏡檢法也有其優(yōu)勢所在，多核白細胞會產(chǎn)生LE，單核白細胞不產(chǎn)生此酶，當陰道分泌物中單核白細胞比多核白細胞多時，導致化學檢測法假陰性。

對于真菌或滴蟲的感染，化學檢測法的陽性檢出率高于常規(guī)鏡檢法。而聯(lián)合檢測法與化學檢測法有高度的一致性。分析原因可能有鏡檢法對操作人員的技術、對標本檢測的時間和溫度要求高，易漏診。而相比于鏡檢法，化學檢測法通過檢測真菌和滴蟲相關特異性酶的活性來判斷是否感染真菌和滴蟲，存在很大的優(yōu)勢，提高了檢出率［3］。當然常規(guī)鏡檢法也存在一定的優(yōu)勢，鏡檢法能鑒別真菌或滴蟲。化學檢測法檢測真菌或者滴蟲的酶為NAG，并不是所有的真菌都存在該酶，部分光滑念珠菌就不存在［4］，因此化學檢測法同樣會漏檢，但概率較小。據(jù)統(tǒng)計85%～90%的真菌性陰道炎是由白假絲念珠菌引起。真菌和滴蟲均有較強的NAG活性［5］。在臨床工作中，對于真菌性陰道炎和滴蟲性陰道炎的檢查，化學檢測法聯(lián)合鏡檢法具有較高的優(yōu)勢，能提高真菌或滴蟲的陽性檢出率，也能較好地將真菌或滴蟲區(qū)分開來。

SNA是加德納菌、厭氧菌等細菌性陰道致病菌的一種特異性酶。對于細菌性陰道病的檢測，三種方法中聯(lián)合檢測法陽性率最高。鏡檢法容易受較多因素的影響，比如操作人員的技術與經(jīng)驗，涂片的厚薄等，導致陽性檢出率較低。化學檢測法的結(jié)果直觀、準確、快速和穩(wěn)定性好，它的檢測原理為SNA水解5—溴—4—氯—3—吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基，與特殊物質(zhì)發(fā)生反映呈現(xiàn)藍綠色，結(jié)果判定較為直觀，但部分陰道內(nèi)的雜菌SNA檢測為陰性，但仍能引起陰道內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)導致BV的產(chǎn)生。將兩種方法相結(jié)合能提高有助于臨床醫(yī)生提高BV的診斷率。

綜上所述，化學檢測法可以提高陰道分泌物中白細胞、真菌或滴蟲的陽性檢出率，鏡檢法可以鑒別真菌或滴蟲感染。對于細菌性陰道病的診斷效率，聯(lián)合檢測法陽性率最高。鏡檢法和化學檢測法兩種方法相結(jié)合能為臨床診斷陰道疾病提供較高的參考價值。