萬智敏，羅水秀

1.湖南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南長沙 410005；2.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南長沙 410006

陰道作為女性生殖系統(tǒng)的開放通道，連接著女性生殖系統(tǒng)的內(nèi)外器官。陰道分泌物俗稱“白帶”，是一種從陰道中排出的稀糊狀、帶黏性、無氣味的白色液體。它是由子宮內(nèi)膜和輸卵管及宮頸腺體的分泌物、陰道黏膜的滲出液、不具有致病性的乳酸桿菌和陰道脫落的表皮細(xì)胞等成分組成［1］，臨床上常見的許多婦科疾病都存在明顯的陰道微生態(tài)系統(tǒng)失衡，從而引起陰道分泌物的異常，目前檢測陰道分泌物常用的檢測方法包括鏡檢法和化學(xué)檢測法，鏡檢法價格低廉、操作簡便、耗時短，但受較多主觀因素的影響，重復(fù)性差?；瘜W(xué)檢測法受主觀因素影響較少，但對于分泌物中細(xì)胞形態(tài)的辨認(rèn)、真菌和滴蟲的鑒別等存在不足［2］。將鏡檢法與化學(xué)檢測法以及兩種方法結(jié)合起來的聯(lián)合檢測法綜合進(jìn)行比較分析能為臨床診斷陰道疾病提供較高的參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年9—11月間湖南省人民醫(yī)院同時行鏡檢法與化學(xué)檢測法的200例患者作為研究對象。年齡23～58歲，平均年齡（34.7±5.3）歲。研究對象應(yīng)在取樣前24 h禁止盆浴、性交、陰道灌洗及局部用藥等，在48 h內(nèi)沒有使用過陰道潤滑劑等化學(xué)物質(zhì)。月經(jīng)期間不宜進(jìn)行陰道分泌物檢查，一般資料具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集

標(biāo)本采集由婦產(chǎn)科醫(yī)生操作。首先將一次性陰道窺器放入患者陰道內(nèi)，然后用醫(yī)用消毒棉簽在陰道內(nèi)約4 cm處的陰道壁上旋轉(zhuǎn)1周，重復(fù)以上操作一次，即采集兩份陰道分泌物標(biāo)本，隨后分別放入兩個干燥潔凈的塑料試管中并送檢，同時進(jìn)行陰道分泌物常規(guī)檢測和化學(xué)檢測。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯Olympus CX31），LTS-V400陰道炎檢測儀（珠海市麗拓生物科技有限公司），陰道炎五聯(lián)檢測試劑盒（珠海市麗拓生物科技有限公司）。

1.4 方法檢測原理

1.4.1 鏡檢法采用形態(tài)學(xué)方法，在高倍鏡下找白細(xì)胞、真菌、滴蟲、線索細(xì)胞。

1.4.2 化學(xué)檢測法（1）白細(xì)胞酯酶（LE）檢測。白細(xì)胞內(nèi)含有LE，它可以水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出一種無色的物質(zhì)，即溴吲哚基，遇特殊物質(zhì)后發(fā)生反應(yīng)呈現(xiàn)出藍(lán)綠色，呈色的深淺反映出LE的活性。（2）β-氨基半乳糖苷酶（NAG）檢測。真菌和滴蟲內(nèi)有較強(qiáng)的NAG活性。NAG可以水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷酶，釋放出的對硝基苯，可以在堿性條件下，呈現(xiàn)黃色，顏色深淺與酶活性成正比。（3）唾液酸苷酶（SNA）檢測。SNA是加德納菌、厭氧菌等細(xì)菌性陰道?。˙V）致病菌的一種特異性酶。其原理為SNA通過水解5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基，與特殊物質(zhì)發(fā)生反映呈現(xiàn)藍(lán)綠色，顏色深淺與酶活性成正比。陰道分泌物檢測指標(biāo)，鏡檢法與化學(xué)檢測法相對應(yīng)的各項(xiàng)指標(biāo)，見表1。

表1 兩種方法相對應(yīng)的各項(xiàng)檢測指標(biāo)

1.5 實(shí)驗(yàn)步驟

1.5.1 鏡檢法采用日本Olympus光學(xué)顯微鏡，在潔凈的玻片上滴1～2滴0.9%生理鹽水，然后用蘸有陰道分泌物樣本的醫(yī)用消毒棉簽均勻地涂于潔凈的玻片上，于顯微鏡下進(jìn)行檢查，先用低倍鏡瀏覽全片，再用高倍鏡觀察。在鏡下觀察白細(xì)胞、真菌、滴蟲和線索細(xì)胞。

1.5.2 化學(xué)檢測法化學(xué)檢測法，又稱五聯(lián)檢法，采用LTS-V400陰道炎檢測儀和相應(yīng)的陰道炎五聯(lián)檢試劑盒（采用化學(xué)反應(yīng)法），嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，注意試劑盒應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)使用。

1.6 結(jié)果評估標(biāo)準(zhǔn)

1.6.1 鏡檢法評估標(biāo)準(zhǔn)（1）白細(xì)胞或者膿細(xì)胞超過15個/HP，即“陽性”；（2）在高倍鏡下看到真菌及菌絲，即“陽性”；（3）在高倍鏡下看到滴蟲，即“陽性”；（4）在高倍鏡下看到線索細(xì)胞，并且每個視野超過20%，即“陽性”。

1.6.2 化學(xué)檢測法評估標(biāo)準(zhǔn) （1）LE：不顯色為“陰性”，提示正常，顯藍(lán)綠色為“陽性”，提示有炎癥。（2）β-NAG：不顯色為“陰性”，顯黃色，為“陽性”，提示真菌或者滴蟲感染。（3）SNA苷酶：不顯色為“陰性”，提示正常，顯藍(lán)綠色為“陽性”，提示細(xì)菌感染。注意由于陰道炎化學(xué)檢測法的試劑盒的說明書上并沒有寫明可以根據(jù)β-氨基半乳糖苷酶將真菌和滴蟲感染區(qū)分開來，因此真菌和滴蟲將作為一項(xiàng)指標(biāo)分析，在鏡檢法中若見到真菌及菌絲、滴蟲，任意一個為陽性即陽性。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種檢測方法對白細(xì)胞檢出率的比較

對于陰道分泌物中白細(xì)胞鏡檢法的陽性檢出率為49%，化學(xué)檢測法的陽性檢出率為60%，聯(lián)合檢測法的陽性檢出率為64%，鏡檢法分別與化學(xué)檢測法和聯(lián)合檢測法比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.88、8.54，P＜0.05），聯(lián)合檢測法與化學(xué)檢測法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 三種檢測方法對白細(xì)胞檢出率的比較例（%）

2.2 三種檢測方法對直菌或滴蟲檢出率的比較

對于陰道分泌物中真菌或滴蟲檢測鏡檢法的陽性檢出率為10.0%，化學(xué)檢測法的陽性檢出率為17%，聯(lián)合檢測法的陽性檢出率為18%，鏡檢法分別與化學(xué)檢測法和聯(lián)合檢測法比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），化學(xué)檢測法與聯(lián)合檢測法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.20、5.32，P＞0.05），見表3。

表3 三種檢測方法對真菌或滴蟲檢出率的比較 例（%）

2.3 三種檢測方法對BV檢出率的比較

對于BV檢測，鏡檢法的陽性檢出率為11.0%，化學(xué)檢測法的陽性檢出率為18%，聯(lián)合檢測法的陽性檢出率為19%，鏡檢法分別與化學(xué)檢測法和聯(lián)合檢測法比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.07、16.10，P＜0.05），聯(lián)合檢測法與化學(xué)法比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.25，P＜0.05），見表4。

表4 三種檢測方法對細(xì)菌性陰道?。˙V）檢出率的比較例（%）

3 討論

對于白細(xì)胞檢測，化學(xué)檢測法陽性率顯著高于鏡檢法。聯(lián)合檢測法與化學(xué)檢測法有高度的一致性。化學(xué)檢測法陽性率高于鏡檢法的原因主要是陰道分泌物內(nèi)很多白細(xì)胞發(fā)生破碎，導(dǎo)致鏡下白細(xì)胞減少，造成鏡檢法結(jié)果為假陰性。白細(xì)胞破碎會釋放LE，因此，化學(xué)檢測法的結(jié)果不受影響，準(zhǔn)確性較高。鏡檢法也有其優(yōu)勢所在，多核白細(xì)胞會產(chǎn)生LE，單核白細(xì)胞不產(chǎn)生此酶，當(dāng)陰道分泌物中單核白細(xì)胞比多核白細(xì)胞多時，導(dǎo)致化學(xué)檢測法假陰性。

對于真菌或滴蟲的感染，化學(xué)檢測法的陽性檢出率高于常規(guī)鏡檢法。而聯(lián)合檢測法與化學(xué)檢測法有高度的一致性。分析原因可能有鏡檢法對操作人員的技術(shù)、對標(biāo)本檢測的時間和溫度要求高，易漏診。而相比于鏡檢法，化學(xué)檢測法通過檢測真菌和滴蟲相關(guān)特異性酶的活性來判斷是否感染真菌和滴蟲，存在很大的優(yōu)勢，提高了檢出率［3］。當(dāng)然常規(guī)鏡檢法也存在一定的優(yōu)勢，鏡檢法能鑒別真菌或滴蟲?；瘜W(xué)檢測法檢測真菌或者滴蟲的酶為NAG，并不是所有的真菌都存在該酶，部分光滑念珠菌就不存在［4］，因此化學(xué)檢測法同樣會漏檢，但概率較小。據(jù)統(tǒng)計85%～90%的真菌性陰道炎是由白假絲念珠菌引起。真菌和滴蟲均有較強(qiáng)的NAG活性［5］。在臨床工作中，對于真菌性陰道炎和滴蟲性陰道炎的檢查，化學(xué)檢測法聯(lián)合鏡檢法具有較高的優(yōu)勢，能提高真菌或滴蟲的陽性檢出率，也能較好地將真菌或滴蟲區(qū)分開來。

SNA是加德納菌、厭氧菌等細(xì)菌性陰道致病菌的一種特異性酶。對于細(xì)菌性陰道病的檢測，三種方法中聯(lián)合檢測法陽性率最高。鏡檢法容易受較多因素的影響，比如操作人員的技術(shù)與經(jīng)驗(yàn)，涂片的厚薄等，導(dǎo)致陽性檢出率較低?；瘜W(xué)檢測法的結(jié)果直觀、準(zhǔn)確、快速和穩(wěn)定性好，它的檢測原理為SNA水解5—溴—4—氯—3—吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基，與特殊物質(zhì)發(fā)生反映呈現(xiàn)藍(lán)綠色，結(jié)果判定較為直觀，但部分陰道內(nèi)的雜菌SNA檢測為陰性，但仍能引起陰道內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)導(dǎo)致BV的產(chǎn)生。將兩種方法相結(jié)合能提高有助于臨床醫(yī)生提高BV的診斷率。

綜上所述，化學(xué)檢測法可以提高陰道分泌物中白細(xì)胞、真菌或滴蟲的陽性檢出率，鏡檢法可以鑒別真菌或滴蟲感染。對于細(xì)菌性陰道病的診斷效率，聯(lián)合檢測法陽性率最高。鏡檢法和化學(xué)檢測法兩種方法相結(jié)合能為臨床診斷陰道疾病提供較高的參考價值。