李明言

食品在生產(chǎn)、加工和運(yùn)輸?shù)倪^程中都可能會(huì)受到微生物污染，如果將存在污染問題的食品售賣給消費(fèi)者，就可能會(huì)造成十分嚴(yán)重的后果。因此，通過更加高效的方式對(duì)食品當(dāng)中微生物進(jìn)行檢驗(yàn)和測(cè)定，是監(jiān)督檢驗(yàn)部門必須盡到的職責(zé)和義務(wù)。當(dāng)前，大部分食品微生物的檢驗(yàn)與測(cè)定方法都存在操作復(fù)雜、檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)、操作要求高等問題，盡管檢測(cè)精度較高，但仍然急需一種更加快速的檢驗(yàn)和測(cè)定方法?？焖贉y(cè)試片是近年來產(chǎn)生的一種全新的檢測(cè)工具，主要以Petrifilm作為載體，并且已經(jīng)得到了十分廣泛的應(yīng)用。為了進(jìn)一步提高快速測(cè)試片在食品微生物檢測(cè)當(dāng)中的適應(yīng)性，本文開展了相關(guān)研究。

一、以濾紙為載體的測(cè)試片

1.檢測(cè)試劑。為了對(duì)食品當(dāng)中含有的微生物進(jìn)行檢測(cè)，首先需要在選定的食品檢測(cè)對(duì)象當(dāng)中對(duì)其培養(yǎng)基以及檢測(cè)過程中所需的各類試劑進(jìn)行配制。篩選白色、無毒、中速、密度均勻、吸附力合格的濾紙，將其裁剪成合適的尺寸，通常為40mm×50mm。將滅菌的TTC加入到無菌的培養(yǎng)基后，再將無菌濾紙浸入其中，根據(jù)需要控制濾紙的培養(yǎng)基吸附量，以適宜的溫度干燥后，分裝于已滅菌的聚丙烯塑料口袋內(nèi)，密封備用。

在檢測(cè)過程中，還需要使用的檢測(cè)試劑是磷酸鹽緩沖溶液。在對(duì)這一溶液進(jìn)行配置時(shí)，需要將500mL的蒸餾水加入到磷酸二氫鉀當(dāng)中，并使其充分溶解。通常情況下，磷酸二氫鉀溶液的含量應(yīng)當(dāng)在25-28g以內(nèi)。利用1mol/L的氫氧化鈉溶液對(duì)磷酸二氫鉀進(jìn)行溶解，并在溶解的過程中控制其pH值在7.2-7.4范圍內(nèi)。利用蒸餾水對(duì)上述制備的溶液進(jìn)行稀釋，并將其存儲(chǔ)在冰箱當(dāng)中，方便后續(xù)檢測(cè)時(shí)使用。

最后，還需要對(duì)營(yíng)養(yǎng)瓊脂和無菌生理鹽水進(jìn)行配制。營(yíng)養(yǎng)瓊脂中的主要成分包括蛋白胨、瓊脂、氯化鈉、蒸餾水等，將上述除瓊脂以外的材料添加到蒸餾水當(dāng)中，并對(duì)其進(jìn)行攪拌，充分混合后加入濃度為15%的氫氧化鈉溶液，最后加入瓊脂，并對(duì)其進(jìn)行加熱處理。當(dāng)溶液沸騰后，確保瓊脂全部溶解，再將其分裝在量瓶當(dāng)中，并分別對(duì)其進(jìn)行15min的121℃高溫、高壓滅菌處理。

按照上述方法完成對(duì)檢測(cè)試劑的制備后，能夠保證檢測(cè)藥品當(dāng)中不含有微生物干擾，確保后續(xù)對(duì)食品進(jìn)行微生物檢測(cè)時(shí)不會(huì)由于檢測(cè)設(shè)備或檢測(cè)試劑當(dāng)中存在微生物而對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，確保檢測(cè)結(jié)果的精度符合要求。

2.快速測(cè)試片的微生物底物濃度顯色。按照上述方法完成對(duì)食品樣品培養(yǎng)基及檢測(cè)試劑的配制后，針對(duì)食品當(dāng)中的微生物進(jìn)行測(cè)定。以食品當(dāng)中常見的大腸桿菌微生物為例，針對(duì)其在食品當(dāng)中的含量進(jìn)行測(cè)定。在引入快速測(cè)試片后，測(cè)定的具體流程如圖1所示。

按照?qǐng)D1所示的流程完成對(duì)食品當(dāng)中大腸桿菌微生物的測(cè)定后，為了實(shí)現(xiàn)微生物底物濃度顯色，還需要在上述配制的基礎(chǔ)培養(yǎng)配方基礎(chǔ)上增加酶顯色底物。浸液配方為（100mL）：乳糖2.5g、蛋白胨1.5g、膽鹽0.15g、TTC（40g/L）2mL、瓊脂0.1g、氯化鈉0.3g、磷酸氫二鉀0.4g、溴甲酚紫2mg、乳化劑S（10g/L）2mL，pH為6.8-7.0，滅菌條件為115℃、15min，浸泡條件為60℃、1.0min，烘干溫度為55℃。將待測(cè)液滴加到紙片上后，在37℃條件下培養(yǎng)16-18h，即可出結(jié)果。

通過單因素篩選出培養(yǎng)基當(dāng)中的大腸桿菌，并將其pH值控制在最適宜的7.4濃度水平。同時(shí)，為了清晰地分辨不同菌落，在培養(yǎng)基當(dāng)中引入兩種顯色的酶底物。酶底物的含量應(yīng)當(dāng)盡可能小，只需要在被檢測(cè)的食品樣品當(dāng)中滴入幾滴，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)大腸桿菌與大腸菌群的區(qū)分和測(cè)定。在發(fā)育完全的菌落當(dāng)中，大腸桿菌通常會(huì)以藍(lán)色顯示其菌落，而大腸菌群則會(huì)以藍(lán)色和紅色兩種顏色顯示其全部菌落。

除此之外，食品當(dāng)中常見的微生物對(duì)應(yīng)的酶底物顯色與分布通常為：酵母菌以藍(lán)色的棉花狀菌落呈現(xiàn)，金黃色葡萄球菌以直徑為1-2mm的藍(lán)色或藍(lán)綠色菌落呈現(xiàn)，其他葡萄球菌的顯色通常為白色?？焖贉y(cè)試片可以根據(jù)上述不同微生物的表現(xiàn)情況，實(shí)現(xiàn)其在食品當(dāng)中更加直觀的測(cè)定，從而進(jìn)一步提高檢測(cè)的效率。

二、討論

為了驗(yàn)證上述提出的檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中是否能夠解決傳統(tǒng)檢測(cè)方法檢測(cè)時(shí)間過長(zhǎng)的問題，將快速測(cè)試片的檢測(cè)方法作為實(shí)驗(yàn)組，將傳統(tǒng)基于ELISA法的檢測(cè)方法作為對(duì)照組。利用兩種檢測(cè)方法對(duì)相同食品中的微生物進(jìn)行檢測(cè)，并將兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)時(shí)間作為對(duì)比指標(biāo)，以此驗(yàn)證兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)效率。選擇以某食品加工廠生產(chǎn)的產(chǎn)品作為研究對(duì)象，在確保該產(chǎn)品中不存在任何其他微生物干擾的條件下，人為引入細(xì)菌、大腸桿菌、大腸菌群、金黃色葡萄球菌等微生物，并在產(chǎn)品正常保存的環(huán)境當(dāng)中進(jìn)行培養(yǎng)。記錄實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組完成食品微生物檢測(cè)的時(shí)間，結(jié)果如表1所示。

從表1可以看出，各類微生物在正常培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組檢出的時(shí)間明顯低于對(duì)照組檢測(cè)的時(shí)間。因此，通過上述實(shí)驗(yàn)證明，本文提出的快速測(cè)試片的檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中能夠有效縮短檢測(cè)時(shí)間，在確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的條件下，實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中微生物的高效檢出。

將上述提出的檢測(cè)方法設(shè)計(jì)思路作為基礎(chǔ)，可以為多種微生物特異顯色物質(zhì)的開發(fā)提供更可靠的參考依據(jù)，并進(jìn)一步擴(kuò)大快速測(cè)試片的應(yīng)用范圍。未來，快速測(cè)試片還將結(jié)合更多新型的高分子聚合物，以彌補(bǔ)檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中存在的不足，使其作用得到充分發(fā)揮，提高食品微生物的檢測(cè)效率，以達(dá)到為食品安全提供保障的目的。同時(shí)，在今后的研究當(dāng)中，還將針對(duì)如何降低食品微生物檢測(cè)的復(fù)雜程度，減少不必要的成本支出等方面進(jìn)行深入探究，從而為食品生產(chǎn)企業(yè)帶來更加直接的效益，為食品安全監(jiān)督提供更加準(zhǔn)確、高效、便捷的技術(shù)支持。