王纓，歷娜，李桂榮

（山東藥品食品職業(yè)學院·山東威?！?64200）

益腎降脂膠囊具有溫腎去濕、減脂排毒功效,其處方中含有淫羊藿苷、山楂等,探索高效液相色譜法測定淫羊藿苷含量的測定條件,以更全面地控制藥品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

儀器：島津SPD-20AT高效液相色譜儀；色譜柱Ajilent C18250×4.6mm 5μm。

對照品：淫羊藿苷,購自中國食品藥品檢定研究院,批號為110737-201516,含量為94.2%。

試劑：色譜純甲醇；分析純甲醇；分析純乙醇；娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品適量,用甲醇溶解并稀釋制成含淫羊藿苷約40μg/ml的溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

取膠囊內(nèi)容物約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入稀乙醇25ml,密塞,稱定重量,超聲處理（功率300W,頻率40kHz）30分鐘,放冷,再稱定重量,用稀乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.1.3 陰性對照溶液的制備

取處方中除去炙淫羊藿藥材的其他藥味,按處方比例制成缺炙淫羊藿的陰性對照樣品,照供試品溶液的制備方法制得陰性對照溶液。

2.2 方法建立

2.2.1 檢測波長的選擇

以甲醇為空白,用1cm吸收池,在200～400nm波長范圍內(nèi)測定對照品溶液的吸收度。其吸收光譜如圖1所示。最大吸收波長為270nm。

圖1 淫羊藿苷紫外吸收光譜

由光譜圖確定270nm作為檢測波長。

2.2.2 流動相的選擇

分別選用甲醇-水以不同比例作為流動相,取供試品溶液10μl,注入高效液相色譜儀,測定。色譜圖見圖2、圖3、圖4,結(jié)果見表1。

圖2 流動相為甲醇-水（58∶42）的供試品溶液色譜圖

圖3 流動相為甲醇-水（53∶47）的供試品溶液色譜圖

圖4 流動相為甲醇-水（50∶50）的供試品溶液色譜圖

表1 甲醇與水不同比例做流動相的測定結(jié)果

比較分離度、理論塔板數(shù)、拖尾因子測定結(jié)果,選擇甲醇-水（53：47）作為流動相。

2.2.3 專屬性

分別取對照品溶液、陰性對照溶液10μl,注入高效液相色譜儀,測定,色譜圖見圖5、圖6。

圖5 對照品溶液色譜圖

圖6 陰性對照溶液色譜圖

由色譜圖得出結(jié)論：在與對照品保留時間相同的位置上,陰性對照色譜圖中無相應色譜峰。說明處方中其他藥味以及溶劑對測定結(jié)果無干擾。

2.2.4 提取溶劑的選擇

通過查閱《中國藥典》2020年版一部[1],多用甲醇、稀乙醇為溶劑,因此照2.1.2 項下供試品溶液制備方法,分別用稀乙醇、甲醇作為溶劑配制供試品溶液。

分別取上述兩種溶劑配制的供試品溶液10μl,注入高效液相色譜儀,測定,用外標法計算含量。結(jié)果見表2。

表2 不同提取溶劑測定結(jié)果

由測定結(jié)果得出結(jié)論：甲醇作溶劑比稀乙醇作溶劑時含量測定結(jié)果低,并且從環(huán)保、揮發(fā)性、價格等因素考慮,確定以稀乙醇作為提取溶劑。

2.2.5 提取時間

照2.1.2 項下供試品溶液制備方法,分別超聲處理20、30、60分鐘配制供試品溶液。

分別取上述不同超聲時間的供試品溶液10μl,注入高效液相色譜儀,測定,用外標法計算含量。結(jié)果見表3。

表3 不同超聲時間測定結(jié)果

由測定結(jié)果得出結(jié)論：三種超聲時間測定結(jié)果差異不大,因此確定超聲提取30分鐘。

2.2.6 取樣量的考察

照2.1.2 項下供試品溶液制備方法,稱樣量分別為0.2、0.5、1.0g,配制供試品溶液。分別取上述三種稱樣量的供試品溶液10μl,注入高效液相色譜儀,測定,用外標法計算含量。結(jié)果見表4。

表4 不同取樣量考察結(jié)果

由上述結(jié)果得出結(jié)論：三種取樣量測定結(jié)果差異不大,因此確定取樣量為0.5g。

3 結(jié)果與討論

3.1通過查閱《中國藥典》2020年版一部[1]和資料[2,3],淫羊藿苷提取方式多采用超聲處理,因此本文也采用此法提取淫羊藿苷。

3.2溫度的波動對測定數(shù)據(jù)影響較大,本文確定測定溫度為40℃,可以避免溫度對測試結(jié)果的影響。

3.3通過試驗探索,確立了HPLC測定益腎降脂膠囊中淫羊藿苷含量的測定條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,選用甲醇-水（53：47）為流動相、稀乙醇為溶劑,供試品取樣量為0.5g,超聲提取時間為30分鐘,柱溫為40℃,處方中其他藥味以及溶劑對測定結(jié)果無干擾。通過方法學考察,方法的專屬性、準確度、精密度、線性、穩(wěn)定性等指標均符合要求。