李迎澤，衛(wèi)星如，高 芳，賈彥彬，3

(1.包頭醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2.包頭醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)與麻醉學(xué)院；3.包頭醫(yī)學(xué)院護理學(xué)院)

大腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，近年來，其發(fā)病率和致死率呈上升的趨勢，已經(jīng)成為威脅人類生命健康的一種重要的惡性腫瘤。2020年，大腸癌新增約190萬確診病例，位居惡性腫瘤發(fā)病譜的第三位，而因大腸癌直接死亡的人數(shù)約有93.5萬人，已躍居全球癌癥死亡譜的第二位[1]。我國是大腸癌高發(fā)的國家之一，每年新增大腸癌的患者約有38萬，因大腸癌直接死亡的人數(shù)約有19萬，其發(fā)病率和死亡率均位于我國惡性腫瘤的前五位[2-3]。大腸癌的發(fā)病機制復(fù)雜，其發(fā)生發(fā)展與個體的遺傳因素有一定的關(guān)聯(lián)性[4-5]。

Hippo信號通路是一條腫瘤抑制通路，與大腸癌等消化道腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[6-8]。大腫瘤抑制激酶1(Large tumor suppressor kinase 1，LATS1)是Hippo信號通路的核心成員[9]。Wierzbicki等[10]研究發(fā)現(xiàn)，LATS1在大腸癌組織中的表達水平顯著低于正常組織，是大腸癌分子遺傳學(xué)研究的重要候選基因。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，LATS1基因單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism, SNP)rs9393175與非賁門胃癌的發(fā)病風險關(guān)聯(lián)[11]。然而目前為止，關(guān)于LATS1基因多態(tài)性與大腸癌的發(fā)病關(guān)系還鮮有報道。因此，本研究分析了LATS1 rs9393175與大腸癌發(fā)病風險的關(guān)系，旨在為大腸癌的防治積累研究基礎(chǔ)。

1 對象與方法

1.1研究樣本 收集2018年9月至2019年10月在包頭市腫瘤醫(yī)院確診為大腸癌的患者樣本390例作為病例組，其中直腸癌樣本216例，結(jié)腸癌樣本174例。在所有大腸癌的樣本中，男性234例，女性156例；年齡25 ～ 87歲，平均年齡為(60.8±10.9)歲。所有病例均為無既往癌癥史，沒有接受過化療或放療的新發(fā)病例。選擇同期在包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院正常體檢者413例作為對照組，男性261例，女性152例；年齡26 ～ 85歲，平均年齡為(57.2±10.8)歲。對照組均無癌癥病史，無明顯的消化系統(tǒng)疾病和遺傳病史。所有樣本為互無血緣關(guān)系并且在包頭市生活超過5年的漢族人群。本研究已獲得包頭醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有研究對象提供了知情同意書。病例組和對照組在年齡和性別分布方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(年齡：t=0.45，P=0.500；性別：χ2= 0.867,P=0.352)。

1.2基因分型 使用人血液基因組DNA提取試劑盒(北京天根公司)提取所有研究對象的外周血基因組DNA；采用Taqman探針法進行基因分型，引物和探針由ABI公司設(shè)計并合成?；蚍中陀杀本┵惸俸仙锟萍加邢薰就瓿?，Assay ID為C-63123567-10，反應(yīng)體系為5 μL, 包括TaqMan Genotyping Master Mix 2.5 μL，Taqman probe 0.1μL，dd H2O 1.4 μL，DNA 1μL (10 ng)。反應(yīng)條件為95 ℃ 10 min，然后95 ℃ l5 s，60 ℃ 1 min進行40個循環(huán)反應(yīng)，最后在ABI PRISM 7900HT上讀取數(shù)據(jù)。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)資料采用R 軟件( version3.5.0; http://www.r-project.org )進行統(tǒng)計分析。分別采用t檢驗和Person χ2檢驗比較年齡和性別在病例組和對照組間的分布差異；采用χ2檢驗檢測在對照組人群中基因型的分布是否遵循Hardy-Weinberg平衡(HWE)；用非條件性Logistic回歸計算比值比(odds ratio，OR)及其95 %可信區(qū)間(confidence interval，CI)。 在共顯性(Codominant)、顯性(Dominant)、隱性(Recessive)、超顯性(Overdominant)和附加(Log-additive)五種遺傳模型下評價LATS1 rs9393175與大腸癌發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1LATS1 rs9393175與大腸癌發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)性分析 LATS1 rs9393175 GG純合子、AG雜合子、AA純合子在正常對照中分別有244例、145例和20例；在大腸癌病例組中分別有239例、128例和22例。在正常對照中rs9393175的基因型分布符合HWE。在共顯性、顯性、隱性、超顯性和附加五種遺傳模型下SNP rs9393175與大腸癌的發(fā)病風險沒有關(guān)聯(lián)(P>0.05)，詳見表1。

表1 不同遺傳模型下SNP rs9393175與大腸癌的關(guān)系

2.2LATS1 rs9393175與直腸癌的關(guān)聯(lián)性分析 LATS1 rs9393175 GG純合子、AG雜合子、AA純合子在正常對照中分別有244例、145例和20例；在直腸癌病例組中分別有118例、81例和15例。在共顯性、顯性、隱性、超顯性和附加五種遺傳模型下SNP rs9393175與直腸癌的發(fā)病風險沒有關(guān)聯(lián)(P>0.05)，詳見表2。

表2 不同遺傳模型下SNP rs9393175與直腸癌的關(guān)系

2.3LATS1 rs9393175與結(jié)腸癌的關(guān)聯(lián)性分析 LATS1 rs9393175 GG純合子、AG雜合子、AA純合子在正常對照中分別有244例、145例和20例；在結(jié)腸癌病例組中分別有121例、45例和7例。在顯性、超顯性和附加遺傳模型中，SNP rs9393175均與結(jié)腸癌的發(fā)病風險關(guān)聯(lián)(P<0.05)，其中顯性遺傳模型的AIC和BIC最低，分別為688.9和691.2，所以顯性遺傳模型對數(shù)據(jù)的擬合度最好，該模型為最適合模型，說明與GG基因型攜帶者相比，AG+AA基因型攜帶者結(jié)腸癌的發(fā)病風險降低(OR=0.640，95 %CI=0.435-0.942，P<0.05)，在共顯性和隱性遺傳模型下SNP rs9393175與結(jié)腸癌的發(fā)病風險沒有關(guān)聯(lián)(P>0.05)，詳見表3。

表3 不同遺傳模型下SNP rs9393175與結(jié)腸癌的關(guān)系

3 討論

大腸癌作為最嚴重的惡性腫瘤之一，每年的新發(fā)病例與致死率都在不斷增加。近年來，越來越多的研究證實其發(fā)病過程與個體的遺傳易感性有很大的相關(guān)性。尋找大腸癌篩查的生物學(xué)標記，將會對大腸癌的預(yù)防與治療起著很大的促進作用。

Hippo信號通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，已經(jīng)有大量的研究證實是一條腫瘤抑制通路[6,12-13]。作為Hippo信號通路的核心成員，LATS1在人體的生理過程中有承上啟下的作用，可以與上游的蛋白分子和下游的靶基因協(xié)同調(diào)節(jié)細胞周期，調(diào)控細胞凋亡[8,14-18]。研究發(fā)現(xiàn)，LATS1在大多數(shù)惡性腫瘤中都存在低表達的現(xiàn)象[10-11,19-20]，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

SNP rs9393175位于LATS1基因內(nèi)含子區(qū)域。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，該位點與非賁門胃癌的發(fā)病風險關(guān)聯(lián)，AG基因型攜帶者比GG + AA型攜帶者發(fā)生非賁門胃癌的風險低[11]。本研究在390例大腸癌患者和413例正常對照中探討了SNP rs9393175與大腸癌、直腸癌和結(jié)腸癌發(fā)病風險的關(guān)系，結(jié)果顯示，在構(gòu)建的共顯性、顯性、隱性、超顯性和附加五種遺傳模型中，該SNP與大腸癌和直腸癌的發(fā)病風險沒有關(guān)聯(lián)。然而，在顯性、超顯性和附加遺傳模型中，SNP rs9393175與結(jié)腸癌發(fā)病風險關(guān)聯(lián)，其中顯性遺傳模型為最適模型，與GG基因型攜帶者相比， AG+AA基因型攜帶者結(jié)腸癌的發(fā)病風險降低(AG + AA vs GG：OR=0.640，95 %CI=0.435-0.942)，因此AG + AA可能是包頭漢族人群中結(jié)腸癌的保護基因型。以上結(jié)果提示，相同的SNP在不同的癌癥中所起到的作用可能不盡相同；同時，由于大腸癌是一種異質(zhì)性腫瘤[21]，同一SNP在直腸癌和結(jié)腸癌中所起的作用也可能不盡相同。由于本研究實驗的樣本量偏低，關(guān)于LATS1 rs9393175與大腸癌、直腸癌以及結(jié)腸癌的確切關(guān)系還需要進一步擴大樣本量在不同的人群中證實。