付雪麗 任銘誠 董美琪 劉耀武

(1.亳州市滬譙藥業(yè)有限公司,安徽 亳州 236800;2. 亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800)

中藥材的質(zhì)量與中藥材的產(chǎn)地、采收時間、采收季節(jié)以及炮制工藝等密切相關(guān)。中藥材切成飲片后，為了便于貯存和防止藥材發(fā)生蟲蛀、霉變的現(xiàn)象，需要及時干燥，以保障藥材的藥效和品質(zhì)。

目前，有文獻(xiàn)報道真空冷凍、熱風(fēng)、微波、微波真空、紅外等眾多干燥方法對白芍質(zhì)量的影響。為保證白芍飲片干燥后的質(zhì)量，本實(shí)驗建立了以沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷四種成分和水溶性浸出物含量為綜合評價指標(biāo)，考察了電熱鼓風(fēng)干燥箱干燥溫度、干燥時間及干燥時飲片的平攤厚度對白芍飲片質(zhì)量的影響，并進(jìn)行正交試驗優(yōu)化，最終確定白芍最佳干燥工藝，為白芍飲片生產(chǎn)提供科學(xué)的實(shí)驗依據(jù)。

1.儀器與試藥

1.1 儀器。 HC-200型華晨高速多功能粉碎機(jī)（浙江省永康市金穗機(jī)械制造廠）；HH-S2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國宇儀器制造有限公司）；ME403E型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；200型直線往復(fù)式多功能切藥機(jī)（亳州市金赫達(dá)機(jī)械制造有限責(zé)任公司）；DHG-9101 OA型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司）；MB27型水分測定儀（奧豪斯儀器有限公司）；KH-500DE型數(shù)控超聲波清洗機(jī)（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；SHZ-D型循環(huán)水式多用真空泵（鞏義市美裕高科儀器廠）；ACQUITY UPLC H-Class PLUS型超高液相色譜儀（美國Waters公司）。

1.2 試藥。 白芍藥材由亳州市滬譙藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院劉耀武教授鑒定為毛茛科植物白芍Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；乙腈為色譜純（Fisher Chemical公司），超純水儀（四川優(yōu)普超純科技有限公司），其余試劑均為分析純；對照品芍藥苷（批號：110736-202044，含量96.8%）和沒食子酸（批號：110831-200803，含量98%）購自中國食品藥品鑒定研究院。芍藥苷內(nèi)酯苷（批號：39011-90-0，含量95%）和苯甲酸芍藥苷（批號：YJ-100419，含量98%）購自成都普斯生物科技股份有限公司。

2.方法與結(jié)果

2.1 藥材前處理。取凈白芍根，將藥材進(jìn)行大小粗細(xì)分檔，本實(shí)驗所用白芍藥材直徑為1.5cm～2.0 cm。用清水先浸泡白芍到六七成，然后取出，悶潤24小時，中途淋少量水2～4次，保持藥材的表面濕潤，讓水分能分緩慢地滲透入藥材內(nèi)部。至白芍藥材易彎曲但不易折斷，再用直線往復(fù)式多功能切藥機(jī)切藥按照《中國藥典》規(guī)定切成1mm-2 mm的薄片，作為實(shí)驗材料備用。

2.2 白芍飲片中各指標(biāo)成分的測定

2.2.1 色譜條件。色譜柱為 ACQUITY UPLC?BEH C18( 2.1 mm×100 mm,1.7 μm)，流動相為乙腈(A)-0.05 %的磷酸溶液(B)，進(jìn)行梯度洗脫：0～0.5min，7 %～14 %A；0.5～3min，14 %A；3～5.5min，14 %～18 %A；5.5～6min，18 %～20 %A；6～9min，20 %～22 %A；9～9.5min，22 %～40 %A；9.5～11min，40 %～50 %A；11～11.5min，50 %～100 %A；11.5～12min，100 %A；12～12.5min，100 %～7 %A；12.5～14min，7%A。流速為 0.400 mL/min，柱溫為 30℃，檢測波長為230 nm；采集時間為14 min;進(jìn)樣量為2 μL?；旌蠈φ掌芳肮┰嚻返纳V圖見圖1。

圖1 混合對照品（A）與白芍樣品（B）的色譜圖

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 供試品溶液的制備。粉碎樣品，過4號篩，取白芍粉末，分別精密稱取0.1 g，置于5 mL量瓶中。加稀乙醇4 mL，超聲處理（240 W，45 kHZ）30分鐘，取出放冷至室溫，加稀乙醇至刻度，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。每個樣品平行制備2份。

2.2.2.2 對照品溶液的制備。精密稱取沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷四種待測成分對照品適量于容量瓶中，以適量甲醇溶解并定容，分別得到各成分的單一對照品母液。再分別取各單一對照品母液適量于容量瓶中，以50%甲醇水溶解并稀釋到刻度，搖勻，得到混合對照品溶液，以備方法學(xué)考察使用。

2.2.3 方法學(xué)考察

2.2.3.1 線性關(guān)系考察。分別吸取“2.2.2.2”項下混合對照品溶液，用50%甲醇水采用倍數(shù)稀釋法， 分別稀釋0、1.25、1.67、2.5、5、10、20、32和40倍，制得9個不同濃度梯度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2.1”項色譜條件進(jìn)樣測定，得各成分的峰面積。以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，各成分峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中沒食子酸(Y=97714X+369.33，線性范圍0.25～10.03 μg/mL，相關(guān)系數(shù)0.9999)，芍藥內(nèi)酯苷(Y=6525.8X-5882.6，線性 范 圍7.71～308.4 μg/mL，相關(guān) 系 數(shù)0.9999)，芍 藥苷(Y=6516.8X-10011，線性 范 圍26.58～1063.3 μg/mL，相關(guān)系數(shù)1)，苯甲酰芍藥苷(Y=48312X+2689，線性范圍0.36～14.32 μg/mL，相關(guān)系數(shù)0.9999)。

2.2.3.2 精密度試驗。取一個線性濃度點(diǎn)的四種成分混合對照品溶液，按照“2.2.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，對待測成分的峰面積計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，得出沒食子酸RSD為0.11 %；芍藥內(nèi)酯苷 RSD為0.12 %；芍藥苷 RSD為0.08 %；苯甲酰芍藥苷 RSD為0.84 %，結(jié)果表明，該儀器精密度良好。

2.2.3.3 重復(fù)性試驗。精密稱取同一白芍粉末，按照“2.2.2.1”項下方法重復(fù)制備供試品溶液6次，并按照“2.2.1”項下色譜條件測定，根據(jù)各成分的峰面積及標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各成分的平均含量，并計算含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，得出沒食子酸RSD為0.66 %；芍藥內(nèi)酯苷RSD為0.93 %；芍藥苷RSD為0.65 %；苯甲酰芍藥苷RSD為1.59 %，表明所建立方法測定白芍供試品溶液重現(xiàn)性良好。

2.2.3.4 穩(wěn)定性試驗。取同一供試品溶液，按照“2.2.1”項下色譜條件，分別在 0、2、4、6、8、10、12、24 h 進(jìn)行 UPLC 色譜分析，記錄各時間點(diǎn)待測成分的峰面積，并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。得出沒食子酸峰面積的RSD為3.60 %；芍藥內(nèi)酯苷峰面積的RSD為0.67 %；芍藥苷峰面積的RSD為0.52 %；苯甲酰芍藥苷峰面積的 RSD為5.15 %，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.3.5 加樣回收率試驗。按照供試品制備一半的量制備供試品6份，并按照重復(fù)性中各成分的平均含量，加入相同量的各成分對照品溶液，按照“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定。計算，得出沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷的平均回收率分別為104.12 %、98.99 %、99.97 %和99.94 %，RSD分別為2.20 %、1.05 %、0.35 %和1.12 %，表明所建立液相方法加樣回收率良好。

2.3 水分測定。取粉碎后的白芍樣品，采用基于烘干法的水分測定儀測定水分，結(jié)果水分含量在2.62～6.47%之間，均符合2020年版《中國藥典》要求。

2.4 水溶性浸出物的測定。將白芍樣品粉碎，過2號篩，精密稱取白芍細(xì)粉 2.0 g，參照2020年版《中國藥典》熱浸法測量其水溶性浸出物含量。

浸出物（%）計算公式如下：

注：X為浸出物的含量（%）；W皿+殘為干燥后裝有容器的重量（g）； W皿為容器恒重（g）；V為提取溶劑的體積（mL）；W樣為樣品稱樣量（g）；V樣為量取續(xù)濾液的體積（mL）；Q為水分（%）。

2.5 正交試驗優(yōu)選白芍干燥工藝

2.5.1 干燥方法。將“2.1”項下前處理后的白芍薄片置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中，設(shè)定加熱溫度分別為60 、70 、80 ℃，干燥時間分別為5 、7 、9 h，干燥時攤厚度為1 、2、3 cm進(jìn)行干燥，待干燥結(jié)束取出，放冷待用。

2.5.2 正交試驗設(shè)計。以預(yù)實(shí)驗中單因素考察的結(jié)果為依據(jù)和在吳皓的文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，選用干燥時間、干燥溫度、攤厚度為考察因素，每個因素設(shè)置3個水平，以沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷四種成分的含有量和水溶性浸出物含量為綜合評價指標(biāo)，安排實(shí)驗。

2.5.3 各指標(biāo)綜合評分。采用多指標(biāo)評分法，對正交試驗結(jié)果進(jìn)行分析。首先，對各個指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并設(shè)定芍藥苷的權(quán)重系數(shù)為30%，沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷含量的權(quán)重系數(shù)分別擬定為10%，水溶性浸出物含量的擬定權(quán)重系數(shù)為40%。即綜合指標(biāo)Y(Comprehensive index Y)=芍藥苷含有量×30%+沒食子酸含有量×10%+芍藥內(nèi)酯苷×10 %+苯甲酰芍藥苷含有量×10%+水溶性浸出物含有量×40 %。結(jié)果如表1所示，方差分析如表2所示。

表1 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

表2 正交試驗方差分析

2.5.4 正交試驗結(jié)果。采用上述方法，分別測定各條件下樣品中沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷四種成分和水溶性浸出物的含量，并進(jìn)行各指標(biāo)綜合評分，然后對正交試驗結(jié)果進(jìn)行方差分析。各因素對白芍干燥工藝的影響順序為干燥時間＞攤厚度＞干燥溫度。干燥時間對白芍飲片質(zhì)量的影響較大，在攤厚度3cm，以70℃下干燥7h的條件下，各指標(biāo)所得的綜合指標(biāo)最高。由方差分析結(jié)果可知，干燥時間、溫度及攤厚度對綜合指標(biāo)均沒有顯著性影響，但干燥時間對白芍飲片干燥工藝的影響要大些。

2.6 驗證試驗

取凈白芍三批各1 kg，按照“2.1”項下前處理方法制成白芍薄片，并以優(yōu)選的干燥工藝制備樣品3份。結(jié)果沒食子酸的含量分別為0.1372、0.1409、0.1413 mg/g;芍藥內(nèi)酯苷的含量分別為4.735、4.503、4.780 mg/g; 芍藥苷的含量分別為32.57、33.09、33.83 mg/g; 苯甲酰芍藥苷的含量分別為0.2032、0.2333、0.2130 mg/g; 水溶性浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為30.06% ，31.11% ，31.83% 。結(jié)果顯示以最佳干燥工藝進(jìn)行干燥的白芍片，各指標(biāo)成分含量較高，試驗所得干燥工藝穩(wěn)定、重復(fù)性好，可靠性強(qiáng)。

3.討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇

沒食子酸具有收斂的作用，其次在抗癌和抗炎等方面也發(fā)揮了療效；芍藥內(nèi)酯苷有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用；芍藥苷有擴(kuò)張血管降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜等多方面的作用；苯甲酰芍藥苷主要有抗炎和鎮(zhèn)痛的作用。本實(shí)驗選用了水溶性浸出物、沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷含量作為主要指標(biāo)，可以全面地反映白芍的內(nèi)在質(zhì)量。

3.2 試驗因素的確定

在前期的預(yù)實(shí)驗中當(dāng)溫度設(shè)為60 ℃，攤厚度為1cm～3 cm時，白芍飲片在小于5 h內(nèi)很難干透，確定干燥時間因素為5、7和9小時；干燥溫度小于80℃，可防止有效成分的破壞與流失；攤厚度依據(jù)飲片生產(chǎn)企業(yè)網(wǎng)帶式烘干機(jī)的攤厚度進(jìn)行設(shè)定。

綜上所述，在70 ℃下干燥7 h，攤厚度為3 cm的干燥條件下，白芍的各指標(biāo)綜合評分較高，可作為干燥白芍的最佳干燥工藝，為白芍飲片實(shí)際生產(chǎn)提供科學(xué)的實(shí)驗依據(jù)。