劉蘭芳，徐曉陽，齊園圃

前言

隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人口老齡化問題已發(fā)展為中國(guó)乃至全世界的重大問題。老年人生活質(zhì)量的高低直接影響著人們的幸福感和滿足感。而骨骼肌功能的下降是伴隨衰老發(fā)生的同時(shí)出現(xiàn)的一種不可避免的現(xiàn)象，會(huì)增加老年人摔倒、骨折的風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響著老年人的生活質(zhì)量。

研究發(fā)現(xiàn)，衰老引發(fā)的骨骼肌內(nèi)脂質(zhì)沉積的增加是影響骨骼肌功能的一個(gè)重要因素，但衰老影響骨骼肌脂代謝的機(jī)制是什么？這些問題有待進(jìn)一步的探究。

1 研究?jī)?nèi)容

本實(shí)驗(yàn)選取SPF級(jí)的雄性SD大鼠12只，分兩批從中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室購入，第一批10月齡共計(jì)6只，飼養(yǎng)至15月齡后分為老年對(duì)照組（0C）每組6只，第二批為3月齡青年大鼠共計(jì)6只，設(shè)為青年對(duì)照組（YC），兩批大鼠為同一種系，同一產(chǎn)地。直至12周時(shí)，空腹12h，用10%水合氯醛（300 mg／kg.wt）進(jìn)行腹腔麻醉，取兩側(cè)腓腸肌，用生理鹽水清洗干凈、吸干、稱重、拍照后，用刀片將腓腸肌分成數(shù)段至于EP管中，即刻放入液氮中保存，全部完成后至于－80℃的冰箱內(nèi)保存。檢測(cè)腓腸肌組織內(nèi)的ATGL、CPT－1、FFA、TG的活性或含量，并采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較均值間的差異性，探究衰老對(duì)大鼠骨骼肌脂代謝調(diào)控因子的影響。

2 研究方法

2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組

健康雄性SD大鼠12只，分兩批從中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購入，第一批為10月齡大鼠6只，飼養(yǎng)至15月齡后設(shè)置為老年對(duì)照組（OC）第二批為3月齡青年對(duì)照組（YC），采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物的常規(guī)飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，自由飲食和飲水，晝夜節(jié)律光照，24 h通風(fēng)，室溫和濕度分別控制在（23士2）℃和40%－60%，每周定時(shí)清理鼠籠、更換墊料。

2.2 測(cè)試指標(biāo)與方法

2.2.1 樣品采集和測(cè)試

12周后，禁食12h后稱體重，用10%水合氯醛（300 mg／kg.wt）腹腔注射麻醉，取大鼠兩側(cè)后肢腓腸肌，用4℃的生理鹽水清洗組織上的血漬，吸干，稱重，拍照，分成數(shù)段后轉(zhuǎn)至EP管于暫于液氮中保存，隨后于－80℃冰箱保存，等待測(cè)試，用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)骨骼肌內(nèi)和生化檢測(cè)法測(cè)試骨骼肌內(nèi)ATGL、CPT－1、FFA、TG的含量，

2.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）來表示，采用單因素方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異性的檢驗(yàn)，以P＜0.05為顯著性水平，P＜0.01為非常顯著性水平。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 12周后大鼠體重、腓腸肌重量及腓腸肌／體重比值的變化

如表1所示，與青年對(duì)照組相比，老年對(duì)照組大鼠的體重非常顯著的上升（P＜0.01），腓腸肌的重量、腓腸肌比重都有明顯的下降（P＜0.01）；

表1 12周后大鼠體重、腓腸肌重量及腓腸?。w重比值的變化

3.2 12周后大鼠腓腸肌內(nèi)ATGL、CPT－1蛋白表達(dá)量及TG、FFA含量變化

如表2所示，老年對(duì)照組與青年對(duì)照組相比，腓腸肌內(nèi)ATGL的蛋白表達(dá)量極顯著性降低（P＜0.01），腓腸肌中FFA的含量增加（P＜0.01），腓腸肌內(nèi)TG的含量也增加（P＜0.05），CPT－1的蛋白表達(dá)量也下降（P＞0.05）。

表2 12周后大鼠腓腸肌ATGL、CPT－1蛋白表達(dá)量及TG、FFA含量的變化

4 實(shí)驗(yàn)討論

4.1 12周后衰老對(duì)大鼠腓腸?。w重比值的影響

衰老是自然發(fā)展的規(guī)律，是一種不可避免的必然趨勢(shì)。隨著衰老的發(fā)生，機(jī)體的各方面都產(chǎn)生了巨大變化，尤其是骨骼肌。近幾年來對(duì)骨骼肌的研究發(fā)現(xiàn)，衰老個(gè)體的骨骼肌與青年個(gè)體相比，在骨骼肌的質(zhì)量、體積、橫截面積、脂質(zhì)含量等方面有了顯著的增齡性變化。Takahashi等人［4］的研究發(fā)現(xiàn)，從30歲起，骨骼肌的橫截面積及密度逐漸減少，而肌間的脂肪含量增加。在本研究中，3月齡的青年對(duì)照大鼠與15月齡的老年對(duì)照大鼠相比，老年對(duì)照組的體重均值極顯著的大于青年對(duì)照組（p＜0.01）。而腓腸肌的重量卻極顯著的低于青年對(duì)照組（p＜0.01），由此形成老年對(duì)照組腓腸?。w重比值的極顯著的低于青年對(duì)照組結(jié)果（p＜0.01）。

在飼養(yǎng)條件、種族均相同僅年齡不同的情況下，可以看出，衰老是引發(fā)骨骼肌比重顯著降低的直接因素。這一點(diǎn)和李德深等人［5］對(duì)同一品種的老年鼠和青年鼠的對(duì)比研究結(jié)果完全一致，即隨著衰老的出現(xiàn)，大鼠的體重發(fā)生了顯著的增加。

4.2 12周后衰老對(duì)大鼠腓腸肌CPT－1和ATGL蛋白表達(dá)量及FFA和TG含量的影響

近年來的研究表明，衰老對(duì)骨骼肌的影響不僅表現(xiàn)在蛋白質(zhì)代謝的負(fù)平衡，更是在引發(fā)了骨骼肌內(nèi)脂代謝的紊亂。骨骼肌內(nèi)的脂代謝包括脂質(zhì)的合成與分解，大量的研究表明，衰老對(duì)骨骼肌脂代謝的影響主要表現(xiàn)為抑制骨骼肌脂解酶的活性。ATGL和CPT－1均是骨骼肌內(nèi)重要的脂解酶，其中ATGL被認(rèn)為是甘油三酯水解的第一限速酶，其主要的作用是將甘油三酯水解為甘油二酯，甘油二酯在HSL和甘油一酯水解酶的作用下分解為甘油和脂肪酸，而長(zhǎng)鏈脂肪酸必須在CPT－1的作用下才能進(jìn)入線粒體進(jìn)行氧化分解。所以ATGL和CPT－1均是脂代謝過程中的限速酶，直接反映著脂解過程的強(qiáng)弱。研究發(fā)現(xiàn)，ATGL基因敲除的小鼠，會(huì)發(fā)生顯著性肥胖，且心臟脂肪大量堆積嚴(yán)重影響心臟的功能，甚至導(dǎo)致小鼠早亡［6］。同時(shí)，骨骼肌內(nèi)甘油三酯的含量可以直接反映骨骼肌脂質(zhì)沉積的多少，而骨骼肌內(nèi)的游離脂肪酸是骨骼肌內(nèi)甘油三酯直接水解的終產(chǎn)物，游離脂肪酸含量的高低，同樣可以反映甘油三酯含量及水解的強(qiáng)弱，是骨骼肌內(nèi)脂質(zhì)含量多少的重要反映。本研究發(fā)現(xiàn)，15月齡的衰老大鼠與3月齡的青年大鼠相比，骨骼肌內(nèi)ATGL的蛋白表達(dá)量顯著下降（p＜0.05），CPT－1蛋白表達(dá)量也具有明顯的下降趨勢(shì)（p＞0.05），同時(shí)甘油三酯和游離脂肪酸的含量也是顯著上升（p＜0.05），表明，衰老確實(shí)誘導(dǎo)了骨骼肌內(nèi)脂質(zhì)水解解能力的降低，導(dǎo)致脂質(zhì)在骨骼肌內(nèi)的大量沉積，從而影響骨骼肌的功能。

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

1.衰老可能導(dǎo)致了了骨骼肌脂質(zhì)的異位沉積。

2.衰老引發(fā)的骨骼肌脂代謝的變化可能是通過升高ATGL表達(dá)量而不是CPT－1來實(shí)現(xiàn)的。