徐 男，王 平，王淑玲，時海燕

基于UPLC特征圖譜和Q-Marker量值傳遞評價經(jīng)典名方半夏白術(shù)天麻湯顆粒劑的關(guān)鍵生產(chǎn)工藝

徐 男1，王 平1，王淑玲2，時海燕3*

1. 山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟南 250014 2. 杭州師范大學醫(yī)學院，浙江 杭州 310012 3. 山東第一醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院（山東省千佛山醫(yī)院），山東 濟南 250014

基于特征圖譜相關(guān)性和質(zhì)量標志物（quality markers，Q-Marker）轉(zhuǎn)移率評價半夏白術(shù)天麻湯（Banxia Baizhu Tianma Decoction，BBTD）顆粒劑的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，明確關(guān)鍵控制點。采用AcclaimTMRSLC Lot Validation-120 C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）進行分離，流動相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，體積流量0.3 mL/min，檢測波長235 nm，柱溫30 ℃。以BBTD基準樣品為參比，建立3批中試樣品的UPLC指紋圖譜，并進行相似度評價，分析Q-Marker在各生產(chǎn)環(huán)節(jié)的損失，評價生產(chǎn)工藝的合理性。與BBTD基準樣品相比，提取液、濃縮液、干膏粉、顆粒劑中均存在對應特征峰，以10種指標性成分及其總量表征的3批BBTD中試樣品關(guān)鍵質(zhì)量屬性與其基準樣品基本保持一致?；谔卣鲌D譜和Q-Marker在各環(huán)節(jié)之間的量值傳遞，為經(jīng)典名方BBTD制備工藝評價和質(zhì)量控制提供了的理論依據(jù)。

半夏白術(shù)天麻湯；UPLC；特征圖譜；關(guān)鍵生產(chǎn)工藝；質(zhì)量標志物；量值傳遞；經(jīng)典名方；顆粒劑；天麻素；蕓香柚皮苷；柚皮苷；橙皮苷；新橙皮苷；甘草素；橙皮素；異甘草素；川陳皮素；橘紅素；關(guān)鍵質(zhì)量屬性；基準樣品

半夏白術(shù)天麻湯（Banxia Baizhu Tianma Decoction，BBTD）于1732年清·程國彭撰《醫(yī)學心悟》中首次出現(xiàn)，現(xiàn)收錄于國家中醫(yī)藥管理局2018年發(fā)布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》，由半夏、天麻、白術(shù)、橘紅、茯苓、甘草6味中藥組成，化學成分包括生物堿、有機酸類、黃酮類、甾醇類、氨基酸、芳香族成分、半夏淀粉、半夏蛋白以及多種微量元素等成分[1]，主治風痰上擾所致眩暈頭痛、胸悶嘔惡、舌苔白膩、脈弦滑等證，是息風化痰的代表方劑。臨床常用于治療高血壓病、美尼爾氏綜合征、椎-基底動脈供血不足性眩暈、偏頭痛、腦梗死等痰濕壅盛證[2]。

2020年9月28日，國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《中藥注冊分類和申報資料要求》（2020年第68號），明確中藥3.1類“應提供按照國家發(fā)布的古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息及古籍記載進行研究的工藝資料”，需要在國家發(fā)布的古代經(jīng)典名方目錄和關(guān)鍵信息基礎(chǔ)上開展研發(fā)工作。2021年4月26日，國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復方制劑藥學研究技術(shù)指導原則（征求意見稿）》（以下簡稱《指導原則》）。由于古代醫(yī)籍記載的傳統(tǒng)煎煮工藝多以水分蒸發(fā)量控制煎煮時間，而現(xiàn)代中藥制藥過程包括提取、濃縮、干燥、制粒等多個工藝步驟[3]，經(jīng)典名方復方制劑是否與傳統(tǒng)湯劑的質(zhì)量保持一致性是評價工藝合理性的關(guān)鍵所在[4]。

劉昌孝院士[5]提出中藥質(zhì)量標志物（quality marker，Q-Marker）新概念，以及從質(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、有效性、可測性、復方配伍環(huán)境出發(fā)的復方中藥Q-Marker研究和發(fā)現(xiàn)“五原則”，為評價經(jīng)典名方復方制劑制備工藝合理性和建立全程質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系提供了高效可靠的解決方案[6]。本項目組在Q-Marker初步辨識研究的基礎(chǔ)上[7]，研究發(fā)現(xiàn)多酚類物質(zhì)組是BBTD主要藥效成分[8]，其中天麻素、柚皮苷、橙皮苷、橙皮素、異甘草素、甘草素、川陳皮素、橘紅素、新橙皮苷、蕓香柚皮苷分別是天麻、橘紅、甘草中的指標成分，峰面積歸一化法計算各峰面積之和占總峰面積的70%以上。本研究采用UPLC，建立BBTD顆粒劑的特征圖譜，以UPLC特征圖譜相關(guān)性及天麻素、柚皮苷、橙皮苷、橙皮素、異甘草素、甘草素、川陳皮素、橘紅素、新橙皮苷、蕓香柚皮苷轉(zhuǎn)移率對BBTD顆粒劑生產(chǎn)過程中各個環(huán)節(jié)進行評價，既保證成品顆粒劑與傳統(tǒng)湯劑的一致性，又能快速、準確地評估各生產(chǎn)環(huán)節(jié)對成品顆粒劑質(zhì)量的影響，明確關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對生產(chǎn)過程實施更為精準有效的控制，使BBTD顆粒劑的質(zhì)量更加穩(wěn)定可控。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UtiMate300超高效液相色譜儀，美國Thermo Fisher公司；AE224C型分析天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司；KQ-250DA型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；DZF-6050型真空干燥箱，上海精宏實驗設備有限公司；GLZ2-25型干法制粒機，江蘇國朗機械制造有限公司。

1.2 材料

對照品柚皮苷（批號wkq21020606）、橙皮苷（批號wkq20030407）、新橙皮苷（批號wkq16041804）、甘草素（批號wkq18030505）、異甘草素（批號wkq18033006）、川陳皮素（批號wkq18020111）、橘紅素（批號wkq18022705）、天麻素（批號wkq18020505）、蕓香柚皮苷（批號wkq20060103）、橙皮素（批號wkq21030807），購于四川省維克奇生物科技有限公司，所有對照品經(jīng)HPLC峰面積歸一化法檢測，質(zhì)量分數(shù)均在98%以上；麥芽糊精，批號20190119，河南萬邦實業(yè)有限公司；乙腈（色譜純）、甲醇（分析純），國藥集團化學試劑有限公司；純凈水，廣州屈臣氏食品飲料有限公司。

半夏為天南星科半夏屬植物半夏(Thunb.) Breit.的干燥塊莖，產(chǎn)地山西絳縣、甘肅西和、山東濟南；天麻為蘭科天麻屬植物天麻Bl.的干燥塊莖，產(chǎn)地四川、貴州；橘紅為蕓香科柑橘屬植物橘Blanco及其栽培變種的干燥外層果皮，產(chǎn)地廣東化州、浙江、四川；白術(shù)為菊科蒼術(shù)屬植物白術(shù)Koidz.的干燥根莖，產(chǎn)地安徽亳州、河北、浙江；茯苓為多孔菌科茯苓屬真菌茯苓(Schw.) Wolf的干燥菌核，產(chǎn)地安徽金寨、安徽安慶、湖南邵陽；甘草為豆科甘草屬多年生草本植物甘草Fisch.的干燥根及根莖，產(chǎn)地分別為內(nèi)蒙古鄂爾多斯、內(nèi)蒙古赤峰、內(nèi)蒙古包頭。以上藥材經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院靳光乾研究員鑒定，符合《中國藥典》2020年版標準。半夏（清）飲片、天麻飲片、白術(shù)（麩炒）飲片、橘紅飲片、茯苓飲片、甘草（炒）飲片均為實驗室自制，批號及產(chǎn)地信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 BBTD顆粒劑的制備

2.1.1 基準樣品制備工藝 通過對古今文獻的分析，對BBTD的經(jīng)方來源、處方劑量及制法進行考證[9]，確定全方的煎煮方法為半夏飲片9 g、天麻飲片6 g、茯苓飲片6 g、橘紅飲片6 g、白術(shù)飲片15 g、甘草飲片4 g，加500 mL水，煎煮（武火煮沸、文火慢煎）2次，每次0.5 h，合并濾液。取10 mL水煎液于25 mL西林瓶中，放入?18 ℃冰箱中預冷凍24 h后，置于?80 ℃預冷2 h的冷凍干燥機，凍干溫度為?80 ℃，真空度為（5±1）Pa，干燥72 h。

采用L18(37)隨機數(shù)表法對6味飲片（表1）進行隨機組合及排序，重復上述操作，即得18批BBTD基準樣品（S1～S18）[10]。

2.1.2 中試提取工藝[11]選取半夏飲片450 g、天麻飲片300 g、茯苓飲片300 g、橘紅飲片300 g、白術(shù)飲片750 g、甘草飲片200 g，加12倍水，加熱回流提取2次，第1次加入8倍量水，第2次加入4倍量水，每次提取1 h，趁熱濾過，合并2次提取液，即得（批號分別為210326、210328、210330）。

表1 BBTD基準樣品的藥材飲片產(chǎn)地及批號

2.1.3 濃縮工藝 取提取液進行減壓濃縮，溫度60～65 ℃，真空度?0.08 MPa，濃縮至密度為1.18～1.20（25 ℃），以浸膏不黏壁，流動性好為宜，得濃縮液。

2.1.4 干燥工藝 取濃縮液進行真空干燥，溫度為70 ℃，真空度?0.08 MPa，得干膏粉。

2.1.5 制粒工藝 取干膏粉適量，加入甜菊素17 g及適量麥芽糊精調(diào)整粉末總量為158 g/kg，混合均勻后將干膏粉裝入干法制粒機，固定垂直給料速度25 r/min，水平送料速度40～45 r/min，調(diào)整壓輥轉(zhuǎn)速5～7 r/min，壓輥壓力10～13 MPa，制得顆粒，過篩，收集10～40目顆粒[12]，即得BBTD顆粒劑。

2.2 BBTD基準樣品特征圖譜的建立及比較分析

2.2.1 色譜條件 AcclaimTMRSLC Lot Validation-120 C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）；柱溫30 ℃；流動相為乙腈-水，梯度洗脫：0～5 min，5%～12%乙腈；5～20 min，12%～26%乙腈；20～30 min，26%～80%乙腈；30～35 min，80%～100%乙腈；體積流量0.30 mL/min；檢測波長235 nm；進樣量5.0 μL。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取BBTD顆粒劑0.80 g，置于錐形瓶中，加入甲醇25 mL，密閉，稱定重量后超聲處理（250 W、40 kHz）30 min，靜置，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足損失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.22 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 混合對照品溶液的制備 精密稱取對照品天麻素2.64 mg、柚皮苷2.20 mg、橙皮苷1.67 mg、橙皮素1.65 mg、異甘草素2.34 mg、甘草素1.92 mg、川陳皮素1.31 mg、橘紅素1.37 mg、新橙皮苷1.49 mg、蕓香柚皮苷1.43 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。

2.2.4 精密度考察 精密吸取同一供試品溶液（S1），依照上述色譜條件連續(xù)進樣6次，按《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》，以保留時間和峰面積均適中的柚皮苷為參照峰，BBTD顆粒劑特征峰相對保留時間RSD均小于0.80%，相對峰面積RSD均小于2.90%，表明本方法精密度良好。

2.2.5 重復性考察 取同一批樣品（S1）6份，按照“2.2.2”項方法制備供試品溶液，并按照“2.2.1”項色譜條件進行檢測，以柚皮苷為參照峰，BBTD顆粒劑特征峰相對保留時間RSD均小于0.88%，相對峰面積RSD均小于2.80%，表明方法重復性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液（S1），分別于制備后0、4、8、12、16、24 h進行檢測，記錄指紋圖譜，以柚皮苷為參照峰，各特征峰相對保留時間RSD均小于0.98%，相對峰面積RSD均小于2.60%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 特征圖譜的建立及相似度計算 將18批不同批次BBTD的基準樣品圖譜數(shù)據(jù)導入國家藥典委員會的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》。參照圖譜設為S1，對照圖譜生成方法為平均數(shù)，時間窗寬度設為0.10 s，多點校正，自動匹配，生成對照指紋圖譜，計算相似度。得到18批BBTD基準樣品的指紋圖譜，見圖1。

S1～S18批BBTD基準樣品的相似度分別為0.989、0.900、0.988、0.982、0.987、0.920、0.964、0.992、0.991、0.974、0.984、0.990、0.992、0.967、0.986、0.989、0.983、0.984，表明各批次間的一致性良好，能作為衡量BBTD相關(guān)制劑的標準參照物，可為BBTD顆粒劑制備過程質(zhì)量控制提供參考。

圖1 18批BBTD基準樣品指紋圖譜和對照指紋圖譜(R)

2.2.8 特征峰的確定及藥材歸屬研究 BBTD顆粒劑（S1）的特征圖譜見圖2，圖中標記的10個特征峰均為BBTD顆粒劑中多酚類成分，分離度較好，保留時間分布均勻。精密吸取“2.2.3”項下的混合對照品溶液，按照“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖2。經(jīng)對照品比較鑒定出共有峰中10個特征峰，每個特征峰的保留時間分別為1.887 min（天麻素）、15.003 min（蕓香柚皮苷）、15.890 min（柚皮苷）、16.570 min（橙皮苷）、17.410 min（新橙皮苷）、20.007 min（甘草素）、24.500 min（橙皮素）、25.287 min（異甘草素）、26.653 min（川陳皮素）、27.590 min（橘紅素）。

對各特征峰進行歸屬研究，結(jié)果見圖3。其中天麻素（1號峰）歸屬于天麻飲片，蕓香柚皮苷（2號峰）、柚皮苷（3號峰）、橙皮苷（4號峰）、新橙皮苷（5號峰）、橙皮素（7號峰）、川陳皮素（9號峰）、橘紅素（10號峰）峰歸屬于橘紅飲片，其余甘草素（6號峰）、異甘草素（8號峰）峰歸屬于甘草（炒）飲片。

2.2.9 BBTD顆粒劑各生產(chǎn)環(huán)節(jié)樣品特征圖譜相關(guān)性分析 通過對BBTD的提取液、濃縮液、干膏粉、顆粒劑和基準樣品之間的一致性進行評價，得到BBTD顆粒劑各環(huán)節(jié)樣品的特征圖譜，結(jié)果見圖3。以基準樣品為參照的相似度計算結(jié)果分別為提取液（0.865）、濃縮液（0.845）、干膏粉（0.833）、顆粒劑（0.809）、基準樣品（1.000）。從各環(huán)節(jié)特征圖譜的相似度結(jié)果來看，雖然工業(yè)化生產(chǎn)過程中制備工藝包括提取、濃縮、干燥、制粒，與傳統(tǒng)湯劑不同，但在嚴格控制生產(chǎn)工藝的前提下，提取液、濃縮液、干膏粉和顆粒劑的質(zhì)量與基準樣品可以保持一致性。

1-天麻素 2-蕓香柚皮苷 3-柚皮苷 4-橙皮苷 5-新橙皮苷 6-甘草素 7-橙皮素 8-異甘草素 9-川陳皮素 10-橘紅素，同3同

圖3 BBTD顆粒劑各生產(chǎn)環(huán)節(jié)樣品特征圖譜相關(guān)性色譜圖

2.3 基于Q-Marker的BBTD顆粒劑各生產(chǎn)環(huán)節(jié)樣品的量值傳遞分析[13]

2.3.1 Q-Marker的確定[14]基于Q-Marker的五原則，結(jié)合Q-Marker初步辨識研究結(jié)果[7]，重點關(guān)注特有性和可測性，選定“2.2.8”項下歸屬的10個特征峰所對應的成分天麻素、蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草素、橙皮素、異甘草素、川陳皮素、橘紅素為BBTD顆粒劑Q-Marker。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密稱取“2.2.3”項下的混合對照品溶液，加甲醇稀釋不同質(zhì)量濃度的指標性成分對照品溶液，采用“2.2.1”項下色譜條件進樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標（），峰面積為縱坐標（）繪制標準曲線并進行線性回歸，計算回歸方程，結(jié)果分別為天麻素＝21.386 0－24.992 0，＝0.999 0，線性范圍1.9～132.5 μg/mL；蕓香柚皮苷＝6.317 4－1.315 0，＝0.999 3，線性范圍2.0～138.6 μg/mL；柚皮苷＝8.053 9＋0.674 9，＝0.999 7，線性范圍2.0～139.8 μg/mL；橙皮苷＝7.154 6－0.362 6，＝0.999 1，線性范圍1.9～132.5 μg/mL；新橙皮苷＝5.123 3＋0.720 1，＝0.999 5，線性范圍1.4～94.5 μg/mL；甘草素＝2.348 5＋0.148 5，＝0.999 8，線性范圍0.5～36.6 μg/mL；橙皮素＝17.871 0－1.322，＝0.999 6，線性范圍1.8～125.8 μg/mL；異甘草素＝4.749 6－0.319 3，＝0.999 7，線性范圍1.1～74.2 μg/mL；川陳皮素＝2.890 1－0.068 9，＝0.999 9，線性范圍0.6～41.5 μg/mL；橘紅素＝3.063 3－0.700 7，＝0.999 9，線性范圍0.6～43.4 μg/mL；結(jié)果表明天麻素、柚皮苷、橙皮苷、橙皮素、異甘草素、甘草素、川陳皮素、橘紅素、新橙皮苷和蕓香柚皮苷在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取BBTD顆粒劑（批號210326）供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算其RSD，結(jié)果供試品溶液中天麻素的RSD為0.70%，蕓香柚皮苷的RSD為1.20%，柚皮苷的RSD為2.87%，橙皮苷的RSD為2.28%，新橙皮苷的RSD為2.11%，甘草素的RSD為3.05%，橙皮素的RSD為0.83%，異甘草素的RSD為2.95%，川陳皮素的RSD為0.44%，橘紅素的RSD為2.47%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液（批號210326），室溫放置，按照“2.1”項下色譜條件分別于0、4、8、12、16、24 h進行測定，計算峰面積的RSD。結(jié)果天麻素的RSD為0.75%，蕓香柚皮苷的RSD為2.23%，柚皮苷的RSD為3.02%，橙皮苷的RSD為3.76%，新橙皮苷的RSD為0.98%，甘草素的RSD為1.11%，橙皮素的RSD為0.20%，異甘草素的RSD為4.25%，川陳皮素的RSD為2.45%，橘紅素的RSD為1.20%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復性試驗 取同一BBTD顆粒劑（批號210326），平行制備6份供試品溶液，采用“2.2.1”項下色譜條件分別進樣，記錄峰面積，計算各成分質(zhì)量分數(shù)的RSD，結(jié)果樣品中天麻素的RSD為4.42%，蕓香柚皮苷的RSD為2.24%，柚皮苷的RSD為0.70%，橙皮苷的RSD為4.70%，新橙皮苷的RSD為0.38%，甘草素的RSD為4.68%，橙皮素的RSD為3.66%，異甘草素的RSD為1.65%，川陳皮素的RSD為3.11%，橘紅素的RSD為5.15%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取已測定各成分量的BBTD顆粒劑6份（批號210326），每份0.50 g，精密稱定，分別加入混合對照品溶液（含天麻素0.039 mg/mL、蕓香柚皮苷0.026 mg/mL、柚皮苷對照品0.022 mg/mL、橙皮苷對照品0.017 mg/mL、橙皮素0.017 mg/mL、異甘草素0.023 mg/mL、甘草素0.019 mg/mL、川陳皮素0.013 mg/mL、橘紅素0.014 mg/mL、新橙皮苷0.015 mg/mL）5 mL，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下進行測定，計算各成分的平均加樣回收率和RSD值，天麻素、蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草素、橙皮素、異甘草素、川陳皮素、橘紅素平均加樣回收率依次為99.03%、100.87%、96.68%、96.13%、97.38%、98.18%、98.17%、95.91%、98.75%、97.63%，RSD值分別為1.53%、2.10%、0.09%、4.86%、0.10%、0.19%、0.08%、2.25%、1.67%、0.23%，表明該方法的回收率良好。

2.3.7 BBTD顆粒劑各生產(chǎn)環(huán)節(jié)樣品的量值傳遞分析 經(jīng)典名方復方制劑制備工藝研究應以基準樣品為參照，含量、轉(zhuǎn)移率均需滿足基準樣品范圍[15]。本研究根據(jù)規(guī)范要求制備了18批BBTD基準樣品，指標成分含量及轉(zhuǎn)移率結(jié)果見表2。其中天麻素質(zhì)量分數(shù)為2.887～10.112 mg/g，轉(zhuǎn)移率為19.86%～50.23%；蕓香柚皮苷質(zhì)量分數(shù)為5.43 0～8.027 mg/g，轉(zhuǎn)移率為51.67%～54.11%；柚皮苷質(zhì)量分數(shù)為0.075～1.808 mg/g，轉(zhuǎn)移率為48.39%～55.79%；橙皮苷質(zhì)量分數(shù)為5.389～10.571 mg/g，轉(zhuǎn)移率為58.16%～65.26%；新橙皮苷質(zhì)量分數(shù)為0.13 6%～0.311 mg/g，轉(zhuǎn)移率為38.97%～55.94%；甘草素質(zhì)量分數(shù)為0.181～0.566 mg/g，轉(zhuǎn)移率為18.52%～25.59%；橙皮素質(zhì)量分數(shù)為0.131～0.697 mg/g，轉(zhuǎn)移率為23.52%～48.61%；異甘草素質(zhì)量分數(shù)為0.045～0.328 mg/g，轉(zhuǎn)移率為8.38%～18.99%；川陳皮素質(zhì)量分數(shù)為0.210～0.421 mg/g，轉(zhuǎn)移率為42.32%～45.16%；橘紅素質(zhì)量分數(shù)為0.154～0.574 mg/g，轉(zhuǎn)移率為37.65%～40.26%。

選取大生產(chǎn)飲片進行中試生產(chǎn)制得3批BBTD顆粒劑，計算3批顆粒劑的含量及轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表3、4。從表中可以看出，橙皮苷從飲片（質(zhì)量分數(shù)9.326 mg/g）轉(zhuǎn)移到提取液（質(zhì)量分數(shù)8.975 mg/g）的轉(zhuǎn)移率最高，達到96.24%，橘紅素從飲片（質(zhì)量分數(shù)0.154 mg/g）轉(zhuǎn)移到提取液（質(zhì)量分數(shù)0.127 mg/g）的轉(zhuǎn)移率最低，僅為66.88%。但經(jīng)過濃縮、干燥最后到制得的顆粒劑后普遍損失較大，3批顆粒劑中橙皮苷質(zhì)量分數(shù)分別為5.821、5.424、6.086 mg/g，由飲片到顆粒的平均轉(zhuǎn)移率為61.95%，轉(zhuǎn)移率最高。異甘草素質(zhì)量分數(shù)分別為0.046、0.049、0.051 mg/g，由飲片到顆粒的平均轉(zhuǎn)移率為32.03%，轉(zhuǎn)移率最低。

表2 BBTD基準樣品中指標成分含量及轉(zhuǎn)移率

表3 3批BBTD顆粒樣品各環(huán)節(jié)指標成分含量

表4 3批BBTD顆粒劑樣品從飲片到各環(huán)節(jié)指標成分的轉(zhuǎn)移率

3 討論

3.1 基于傳遞與溯源的Q-Marker參數(shù)范圍制定

《指導原則》指出，應按照國家發(fā)布的古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息及古籍記載，研究、制備基準樣品。應固定炮制、前處理、煎煮、濾過、濃縮、干燥等制備方法和工藝參數(shù)，制備不少于15批基準樣品。應開展基準樣品的質(zhì)量研究，采用專屬性鑒別和多成分、整體質(zhì)量評價指標表征其質(zhì)量。

基于上述要求，本研究綜合考察了18批BBTD基準樣品的飲片-基準樣品相關(guān)性，以Q-Marker均值的±30%為波動范圍，建立全程可追溯的質(zhì)量控制體系[16]。18批基準樣品中天麻素、蕓香柚皮苷、橙皮苷和甘草素含量在其均值±30%范圍內(nèi)，柚皮苷、橙皮素、異甘草素、川陳皮素、橘紅素和新橙皮苷在飲片中含量較低，再疊加實驗誤差，導致個別批次在此范圍外。18批基準樣品中10種成分總量的平均值為5.16 mg/g，均在±30%范圍內(nèi)（2.32～6.16 mg/g）。提示10種指標成分及其總量可以作為評價工藝和質(zhì)量一致性的考核標準。

3.2 關(guān)鍵生產(chǎn)工藝評價

《指導原則》要求，應對中試規(guī)模以上生產(chǎn)的中間體、制劑及所用的藥材飲片進行相關(guān)性研究，并與基準樣品的質(zhì)量標準進行對比，說明生產(chǎn)全過程的量質(zhì)傳遞情況。因此，需要對顆粒生產(chǎn)環(huán)節(jié)的整體性進行評價[17]，建立“飲片-各關(guān)鍵工藝中間體-顆粒”整個流程的質(zhì)量控制策略[17]。

本研究通過天麻素、柚皮苷、橙皮苷、橙皮素、異甘草素、甘草素、川陳皮素、橘紅素、新橙皮苷、蕓香柚皮苷的含量確定各環(huán)節(jié)量值傳遞關(guān)系，利用UPLC特征圖譜整體性對飲片、提取液、濃縮液、干膏粉、顆粒劑與基準樣品間的一致性進行評價，確定經(jīng)典名方BBTD顆粒劑的關(guān)鍵生產(chǎn)工藝，對生產(chǎn)上遇到的問題既能實現(xiàn)從整體上分析，又能實現(xiàn)分步驟還原，實現(xiàn)全面系統(tǒng)的工藝與質(zhì)量控制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，濃縮與干燥是BBTD顆粒劑能否與傳統(tǒng)湯劑保持質(zhì)量一致性的關(guān)鍵。

在BBTD顆粒劑制備過程中，濃縮、干燥由于較長時間的熱處理過程，加熱時間過長或加熱溫度過高，會造成藥效成分量或各成分的組成發(fā)生變化，引起B(yǎng)BTD顆粒劑配伍環(huán)境發(fā)生變化，可能會影響藥效。目前冷凍干燥被認為是干燥的最佳選擇方法，能最大程度保留物品的屬性，但是冷凍干燥的成本是傳統(tǒng)干燥方法的5倍左右，在要求降低群眾藥費負擔、保障廉價藥生產(chǎn)供應的背景下，并不是最理想的選擇。而在選擇其他干燥方式時，就要特別注意要針對BBTD提取液中已知多酚類藥效物質(zhì)的理化性質(zhì)，嚴格控制工藝參數(shù)[18]，才能有效保證經(jīng)方制劑的有效性。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Evaluation of key production process of Banxia Baizhu Tianma Decoction Granules based on UPLC characteristic chromatogram and Q-Marker quantitative transfer relationship

XU Nan1, WANG Ping1, WANG Shu-ling2, SHI Hai-yan3

1. Shandong Research Academy of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014, China 2. Medicine College of Hangzhou Normal University, Hangzhou 310012, China 3. The First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University & Shandong Provincial Qianfoshan Hospital, Jinan 250014, China

Based on the correlation of characteristic chromatogram and the transfer rate of quality markers (Q-Marker), the production process of Banxia Baizhu Tianma Decoction (半夏白術(shù)天麻湯, BBTD) Granules was evaluated, and the critical control points were identified.The separation was carried out on an AcclaimTMRSLC Lot Validation-120 C18column (100 mm × 2.1 mm, 2.2 μm). The mobile phase was acetonitrile-aqueous solution for gradient elution, with flow rate of 0.3 mL/min, detection wavelength of 235 nm, column temperature of 30 ℃. Taking the reference sample of BBTD as a reference, the UPLC fingerprints of three batches of pilot samples were established, and the similarity was evaluated. The loss of Q-Marker in each production process was analyzed and the rationality of the production process was evaluated.Compared with the reference sample, there were corresponding characteristic peaks in extract, concentrated solution, dry paste powder and granules. The key quality attributes of three batches of pilot samples characterized by gastrodin, rutin, hesperidin, glycyrrhizin and 10 index components were basically consistent with the reference samples.This study is based on the characteristic chromatogram and the value transfer of Q-Marker between each link, which provides a theoretical basis for the preparation process evaluation and quality control of classical prescriptions BBTD.

Banxia Baizhu Tianma Decoction; UPLC; characteristic chromatogram; key production processes; Q-Marker; quantity value transmission; classic famous prescriptions; granule; gastrodin; narirutin; naringin; hesperidin; neohesperidin; glycyrrhizin; hesperidin; isoliquiritigenin; nobiletin; tangeratin; key quality attributes; reference sample

R283.6

A

0253 - 2670(2021)24 - 7455 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.24.007

2021-06-04

國家自然科學基金項目（82074052）；山東省自然科學基金重點項目（ZR2020KH017）；山東省高校中藥質(zhì)量控制與全產(chǎn)業(yè)鏈建設協(xié)同創(chuàng)新中心項目（CYLXTCX2020-03）；山東省高校中藥質(zhì)量控制與全產(chǎn)業(yè)鏈建設協(xié)同創(chuàng)新中心項目（CYLXTCX2021-02）；濟南市科技計劃項目（202001006）；杭州市農(nóng)業(yè)與社會發(fā)展科研自主申報項目（20191203B17）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃項目（2019-0368）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃項目（2017-136）；山東省重大科技創(chuàng)新工程（2018CXGC1310）

徐 男，博士，副研究員，從事中藥新藥開發(fā)與藥效物質(zhì)研究。E-mail: 93679706@qq.com

時海燕，博士，副主任藥師，從事中藥藥效物質(zhì)與藥代動力學研究。E-mail: shihaiyan123@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]