昝立峰，楊香瑜，郭海燕，王亞冬，葉 嘉

（1.邯鄲學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院, 河北邯鄲 056005；2.晨光生物科技集團(tuán)邯鄲有限公司, 河北邯鄲 056000）

黃刺玫（Rosa xanthinaLindl.）隸屬于落葉灌木薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(Rosa)，廣泛分布于太行山區(qū)和丘陵地帶[1]。黃刺玫果可入藥，味酸甘性平，主要功能為健脾養(yǎng)血、理氣調(diào)經(jīng)，治療消化不良、腹痛腹脹、胃痛或婦女月經(jīng)不調(diào)[2]。民間有采摘鮮食黃刺玫果和用其釀酒的習(xí)慣，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，果實(shí)中含有豐富的金絲桃苷、蘆丁、槲皮素等黃酮類物質(zhì)以及相似性強(qiáng)且存在多個(gè)同分異構(gòu)體類的鞣質(zhì)類化合物[3]。

國內(nèi)對黃刺玫果化學(xué)成分及藥理研究的文獻(xiàn)報(bào)道較少，任婧等[4]研究發(fā)現(xiàn)黃刺玫果乙醇提取物具有良好的抗凝和抑制實(shí)驗(yàn)性血栓形成的作用。孫崇峰等[5]從黃刺玫果75%乙醇提取物中分離鑒定出6個(gè)化合物，其中化合物槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷具有延長凝血酶原時(shí)間作用，且存在良好的量效關(guān)系。黃刺果中含有豐富的鞣質(zhì)類化合物，此類物質(zhì)含酚羥基較多，易被氧化、水解，應(yīng)用常規(guī)柱色譜法和核磁共振技術(shù)分離、鑒定難度較大，在分離過程中易發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化[6]。超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）技術(shù)兼具液相色譜的高效分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度、高檢測能力，在代謝產(chǎn)物的分析研究、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究等方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。為了進(jìn)一步明確黃刺玫果的有效成分，本研究擬采用UPLC-Q-TOF-MS 技術(shù)對黃刺果乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分析，根據(jù)其保留時(shí)間、分子離子峰及其質(zhì)譜裂解碎片，結(jié)合Chemspider、PubMed和Lipidomics gateway數(shù)據(jù)庫在線檢索功能，建立黃刺玫果化學(xué)成分的快速分析方法，為黃刺玫果在功能食品領(lǐng)域的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃刺玫果 2019年8月采集于冀南太行山區(qū)，經(jīng)本課題組葉嘉教授鑒定為黃刺玫果，采集后50~60 ℃下真空負(fù)壓條件下干燥至含水量<10%，并用多功能粉碎機(jī)粉碎至20~40目，3~8℃冷藏放置備用；乙腈、甲酸 色譜純，美國Fisher公司；其余試劑均為分析純；Seplite LX-17大孔吸附樹脂 西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司。

Acquity UPLC液相色譜儀、XEUO-G2 QTOF質(zhì)譜儀 美國Waters 公司；N-1200B 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀東京理化器械株式會社；Mill-Q Advantage A10超純水儀 德國Merck Millipore公司；搖擺式高速萬能粉碎機(jī) 北京市永光明醫(yī)療儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備 準(zhǔn)確稱取黃刺玫果粉100 g，用75%的乙醇按照料液比1:8 g/mL在溫度45 ℃浸提3次，每次2 h，合并提取液并在4000 r/min離心過濾，離心液在溫度為40~45 ℃條件下減壓濃縮至無醇味狀態(tài)的水懸液，水懸液采用大孔吸附樹脂分離純化，70%乙醇解吸得到解吸液，解吸液減壓蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥得到3.6 g粉末，分析前用甲醇溶解并過0.22 μm濾膜，即得樣品溶液。

1.2.2 色譜條件 色譜柱為 Waters BEH Amide（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相 A 為水溶液（含0.5%甲酸），B相為乙腈，流動相梯度洗脫過程如下：5.0% A（0~1 min），5.0%~45.0% A（1~65 min），45.0%~100% A（65~85 min），100% A（85~90 min），100%~5.0% A（90~90.1 min），5.0% A（90.1~95 min）；流速為 0.3 mL/min；進(jìn)樣量為 10 μL；柱溫 40 ℃。

1.2.3 質(zhì)譜條件 電噴霧（ESI）離子源，四級桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)量分析器，負(fù)離子掃描模式，質(zhì)量掃描范圍m/z 50~1600 Da，離子源溫度100 ℃，脫溶劑氣溫度300 ℃，毛細(xì)管電壓為3000 V，樣品錐孔電壓40 V，提取錐孔電壓4 V，錐孔氣流速50 L/h，脫溶劑氣流速度800 L/h。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Mass Lynx V4.1軟件對化合物的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并結(jié)合 Chemspider、PubMed和Lipidomics gateway數(shù)據(jù)庫推測化合物結(jié)構(gòu)。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物分析

圖1為黃刺玫果乙醇提取物的UPLC-Q-TOFMS總離子流色譜圖，從圖1中看出UPLC分離條件可以有效地將化合物分開，在UPLC-Q-TOF-MS條件下得到質(zhì)譜圖，化合物在ESI離子源負(fù)離子譜中主要出現(xiàn)[M-H]-準(zhǔn)離子峰。從黃刺玫果乙醇提取物中共鑒定出53個(gè)化合物，包括多酚化合物29個(gè)、黃酮化合物15個(gè)、有機(jī)酸2個(gè)和脂肪酸7個(gè)，具體信息見表1所示。

表1 UPLC-Q-TOF-MS鑒定黃刺玫果提取物中的化合物Table 1 The compounds identified from fruits of Rosa xanthina Lindl.by UPLC-Q-TOF-MS

圖1 黃刺玫果提取物負(fù)離子模式下的UPLC-Q-TOF-MS總離子流圖Fig.1 The total chromatograms of extracts from fruits of Rosa xanthina Lindl.by UPLC-Q-TOF-MS in negative ion mode

2.2 多酚

從黃刺玫果中鑒定出的多酚類物質(zhì)主要包括以沒食子酸m/z [M-H-169]-和鞣花鞣質(zhì)m/z [M-H-301]-為母核的化合物，鞣花鞣質(zhì)為母核的化合物結(jié)構(gòu)中通常含有分子量為302的六羥基聯(lián)苯二甲酰基（HHDP）。沒食子多酚和鞣花鞣質(zhì)多酚二級質(zhì)譜（MS2）裂解碎片主要是失去沒食子?；驔]食子酸、C2H2O、CH2O、CO2和OH，且此類化合物存在多種同分異構(gòu)現(xiàn)象。

化合物1：出峰時(shí)間1.55 min，分子離子峰m/z 481.0594 [M-H]-，推測其分子式可能為C20H18O14。二級質(zhì)譜產(chǎn)生明顯的特征碎片m/z 300.9974，推測化合物為鞣花鞣質(zhì)為母核，分子離子峰與特征碎片分子量相差180 u，即通過失去1分子葡萄糖（180 u）得到特征碎片，Chemspider數(shù)據(jù)庫在線檢索并參照文獻(xiàn)[7]，推測化合物為2,3-(s)-六羥基聯(lián)苯二甲?；?D-葡萄糖[2,3-(S)-hexahydroxydiphenoyl-D-glucose]。

續(xù)表 1

化合物2：出峰時(shí)間1.64 min，分子離子峰為m/z 331.0679 [M-H]-，推測化合物分子式為C13H16O10。在主要特征碎片中，m/z 169.0124為分子離子峰失去1分子葡萄糖苷（162 u）得到，沒食子酸母核進(jìn)一步裂解失去1分子羧基（45 u）產(chǎn)生碎片m/z 124.0080，Chemspider數(shù)據(jù)庫在線檢索并參考文獻(xiàn)[6]推測化合物為一-O-沒食子酰基葡萄糖（1-O-galloyl-β-D-glucose），即沒食子苷（Glucogallin）。

化合物3：出峰時(shí)間2.03 min，根據(jù)分子離子峰m/z 169.0118 [M-H]-，得到化合物分子式為C7H6O5。MS/MS譜圖中存在m/z 125.0225的特征碎片離子，即分子離子峰通過失去碎片CO2（44 u）形成，確定化合物為沒食子酸（Gallic acid）。

化合物4：出峰時(shí)間2.82 min，根據(jù)準(zhǔn)分子離子峰m/z 483.0756 [M-H]-，得到化合物分子式為C20H20O14。MS/MS譜中產(chǎn)生主要碎片為 m/z 331.0570、169.0103、125.0280，其中 m/z 331.0570是由基峰m/z 483.0756失去1分子沒食子?；?52 u）得到，進(jìn)一步失去1分子葡萄糖苷（162 u）得到特征碎片m/z 169.0103，沒食子酸母核裂解失去CO2（44 u）得到碎片m/z 125.0280，參照文獻(xiàn)[8]推測化合物為二-O-沒食子酰基葡萄糖（1,6-bis-O-galloyl-β-D-glucose）。

化合物 5和 7：出峰時(shí)間分別為 3.06 min和5.15 min，分子離子峰分別為m/z 783.0696 [M-H]-和 m/z 783.0688 [M-H]-，分子式 C34H24O22，二級質(zhì)譜產(chǎn)生碎片一致，推測兩化合物可能為同分異構(gòu)體。MS2產(chǎn)生主要碎片m/z 481.0575、300.9973，即分子離子峰分別失去1分子六羥基聯(lián)苯二甲?；?02 u）和1分子葡萄糖（180 u）得到，根據(jù)出峰時(shí)間并參考文獻(xiàn)[9]，推測化合物分別為長庚馬兜鈴素（Pedunculagin）和木麻黃素（Casuariin）。

化合物6和10：出峰時(shí)間分別為4.30 min和7.75 min，準(zhǔn)分子離子峰均為m/z 633.0733 [M-H]-，分子式為C27H22O18。二級質(zhì)譜主要碎片裂解規(guī)律基本一致，推測化合物為同分異構(gòu)體，即母離子失去1分子沒食子酸（170 u）得到碎片m/z 463.0594，進(jìn)一步裂解失去1分子葡萄糖苷（162 u）得到300.9973，推測化合物為沒食子?；?六羥基聯(lián)苯葡萄糖，參考文獻(xiàn)[10]，推斷化合物可能為小木麻黃素（Strictinin）及其異構(gòu)體異小木麻黃素（Isostrictinin）。

化合物8：出峰時(shí)間為5.47 min，根據(jù)準(zhǔn)分子離子基峰m/z 345.0806 [M-H]-，得出化合物分子式為C14H18O10。MS2裂解失去1分子葡萄糖苷（162 u）得到主要碎片m/z 183.0271，同時(shí)出現(xiàn)沒食子酸特征碎片 m/z 124.0123，查閱數(shù)據(jù)庫（Chemical spider），推測化合物可能為6-O-沒食子酰甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷（Methl-6-O-galloyl-β-D-glucopyranoside）。

化合物 9和12：出峰時(shí)間分別為6.53 min和9.59 min，準(zhǔn)離子基峰均為 m/z 785.0816 [M-H]-，得到化合物分子量為786，分子式C34H26O22。一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜碎片完全一致，推測兩化合物可能為同分異構(gòu)體，二級質(zhì)譜產(chǎn)生主要碎片m/z 633.0744、483.0799、300.9969，即離子基峰通過失去2分子沒食子?；?02 u）和1分子葡萄糖醛酸（182 u）得到，推測化合物為HHDP-di-galloyl-glucose，參考文獻(xiàn)[11]推測化合物為新嗩吶草素I（Tellimagradin I）及其異構(gòu)體（Tellimagradin I/Isomer）。

化合物11：出峰時(shí)間為8.47 min，準(zhǔn)分子離子基峰為 m/z 935.0858 [M-H]-，得到化合物分子式為C41H28O26。MS2通過準(zhǔn)離子峰裂解失去1分子沒食子酰基（150 u）、1分子六羥基聯(lián)苯二甲?；?02 u）及 1分子葡萄糖醛酸（182 u）分別得到碎片m/z 785.0792、 483.0708、 300.9980， 參 照 文 獻(xiàn)[12]并Chemspider數(shù)據(jù)庫在線檢索，推測化合物為木麻黃鞣寧（Casuarinin）。

化合物14：出峰時(shí)間為10.52 min，準(zhǔn)分子離子峰 m/z 951.0809 [M-H]-，推測化合物分子式為C41H28O27。MS2質(zhì)譜裂解失去1分子H2O產(chǎn)生碎片m/z 933.0599，繼而失去1分子沒食子?；?50 u）得碎片m/z 783.0584，進(jìn)一步裂解失去1分子葡萄糖苷（162 u）得碎片 m/z 621.0748，繼續(xù)裂解失去1分子間雙沒食子酸（321 u）得到特征碎片 m/z 300.9966，查閱 Chemspider數(shù)據(jù)庫，對比文獻(xiàn)[14]，推測化合物為老鸛草素（Geraniin）。

化合物15：出峰時(shí)間為10.83 min，根據(jù)一級質(zhì)譜準(zhǔn)離子峰m/z 633.0753 [M-H]-，得到化合物分子式為 C27H22O18。MS2質(zhì)譜產(chǎn)生主要碎片 m/z 463.0628、300.9958，即分別失去1分子沒食子酸（170 u）和1分子葡萄糖苷（162 u）得到，參照文獻(xiàn)[15]并結(jié)合化合物出峰時(shí)間，推測化合物可能為柯里拉京（Corilagin）。

化合物16：出峰時(shí)間11.18 min，準(zhǔn)分子離子峰m/z 635.0905 [M-H]-，推測化合物分子式為C27H24O18，MS2質(zhì)譜裂解失去1分子沒食子酸（170 u）產(chǎn)生碎片m/z 465.0723，進(jìn)一步失去1分子沒食子?；?52 u）得到碎片m/z 313.0496，繼而失去1分子中性碎片（144 u）得到特征碎片m/z 169.0121，沒食子酸母核脫去CO2產(chǎn)生碎片m/z 125.0230，參照文獻(xiàn)[10]推測化合物為三-O-沒食子?；咸烟牵?,2,6-trigalloyl-β-D-glucose）。

化合物17：出峰時(shí)間13.09 min，準(zhǔn)分子離子基峰為m/z 935.0858 [M-H]-，分子式為C41H28O26。化合物 MS2質(zhì)譜產(chǎn)生主要碎片為 m/z 783.0584（152 u）、633.0714（150 u）、481.0592（152 u）、300.9969（180 u），即失去3分子沒食子?；?分子葡糖所得，參照文獻(xiàn)[7]推測化合物為旌節(jié)花素（Stachyurin）。

化合物18：出峰時(shí)間14.20 min，準(zhǔn)分子離子基峰為m/z 1103.0896 [M-H]-，根據(jù)元素組成分析推測化合物分子式為C48H32O31。MS2質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)該化合物比旌節(jié)花素多一個(gè)沒食子酸結(jié)構(gòu)（168 u），出現(xiàn)與旌節(jié)花素二級質(zhì)譜類似的裂解方式，即化合物裂解產(chǎn)生m/z 934.0676、784.0571、633.0645等碎片離子，結(jié)合文獻(xiàn)[16]推測化合物為地榆素H-2（Sanguiin H2）。

化合物19：出峰時(shí)間14.90 min，準(zhǔn)分子離子基峰為m/z 783.0681 [M-H]-，推測化合物分子式為C34H24O22。MS2質(zhì)譜主要碎片為 m/z 633.0553（失去1分子沒食子酰基150 u）、450.9767（失去1分子葡萄糖醛酸182 u）、300.9961（失去1分子沒食子?；?50 u），查閱數(shù)據(jù)庫并參考文獻(xiàn)[17]推測化合物為木鞣質(zhì) C（Cornusiin C）。

化合物20：出峰時(shí)間15.19 min，準(zhǔn)分子離子基峰為 m/z 433.0420 [M-H]-，化合物分子式為C19H14O12。二級質(zhì)譜母離子失去1分子木吡喃糖苷（132 u）得到碎片300.9961，推測化合物為六羥基聯(lián)苯二甲?；?木吡喃糖苷（Hexahydroxydiphenoyl- 4-O-xylopyranoside）。

化合物21：出峰時(shí)間15.72 min，根據(jù)化合物準(zhǔn)分子離子峰m/z 937.0974 [M-H]-，并結(jié)合元素組成分析分子式為C41H30O26。在MS2譜圖中，分別失去3分子沒食子酰基和1分子吡喃葡萄糖得到主要 碎 片 767.0706（170 u） 、 599.5671（168 u） 、465.0416（134 u）、300.9956（164 u），參考文獻(xiàn)[11]推測化合物為新嗩吶草素（Tellimagrandin II）。

降解培養(yǎng)結(jié)束后，加入表面活性劑的搖瓶內(nèi)溶液較未加入表面活性劑的溶液更加渾濁。試驗(yàn)結(jié)果見圖2，可見加入表面活性劑明顯促進(jìn)菌株的生長和對柴油的降解效果。加入表面活性劑的搖瓶內(nèi)柴油的生物降解率比未加入表面活性劑的高22.3%。

化合物22：出峰時(shí)間15.97 min，準(zhǔn)分子離子峰m/z 300.9977 [M-H]-，分子式為 C14H6O8。MS2質(zhì)譜出現(xiàn)鞣花酸特征性碎片 m/z 271.0214（30 u）、244.0014，推測化合物為鞣花酸（Ellagic acid）。

化合物23：出峰時(shí)間16.57 min，準(zhǔn)分子離子峰m/z 1105.1101 [M-H]-， 分 子 式 為 C48H34O31。MS2質(zhì)譜通過母離子分別失去4分子沒食子酸或沒食子酰基和1分子吡喃葡萄糖產(chǎn)生主要碎片為 m/z 937.0958、768.0834、599.0612、450.9944、300.9966，其中碎片m/z 450.9944、300.9966出峰豐度較高，顯示最后脫去的是1分子沒食子?；?，通過Chemspider數(shù)據(jù)庫在線查閱，并結(jié)合文獻(xiàn)[18]推測化合物為玫瑰素A（Rugosin A）。

化合物24：出峰時(shí)間16.99 min，分子離子基峰m/z 787.0994 [M-H]-，分子式 C34H28O22。主要碎片m/z 617.0707（失去1分子沒食子酸170 u）、465.0617（失去 1分子沒食子?；?152 u）、300.9996（失去1分子葡萄糖苷164 u），最終得到特征碎片m/z 169.0072，參照文獻(xiàn)[19]，推測化合物為 1,2,3,6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷（1,2,3,6-tetrakis-O-galloyl-β-D-glucose）。

化合物25：出峰時(shí)間17.43 min，分子離子基峰m/z 463.0864 [M-H]-，分子式為 C21H20O12。MS2質(zhì)譜產(chǎn)生主要特征碎片300.9969，即失去1分子葡萄糖苷得到，母核進(jìn)一步裂解產(chǎn)生鞣花酸碎片m/z 271.0237、169.0095、125.0219，參照文獻(xiàn)[19]，推測化合物為鞣花酸4'-O-β-D-葡萄糖苷（Ellagic acid 4'-O-β-D-glucoside）。

化合物26和27：出峰時(shí)間分別 18.36 min和19.07 min，準(zhǔn)分子離子峰均為m/z 935.0774 [M-H]-，分子式為C41H28O26。二級質(zhì)譜裂解規(guī)律基本一致，推測兩化合物為同分異構(gòu)體。根據(jù)二級質(zhì)譜產(chǎn)生主要碎片為783.0367（失去1分子沒食子酰基 152 u）、633.0759（失去 1分子吡喃葡萄糖苷）、300.9957（失去 1分子鞣酸），參考文獻(xiàn)[20]推測化合物為 1(α)-O-沒食子?；üｗ匪?[1(α)-O-Galloylpedunculagin]和 1(β)-O-沒食子?；üｗ匪豙1(β)-O-Galloylpedunculagin]。

化合物28：出峰時(shí)間20.62 min，分子離子峰m/z 1087.0948 [M-H]-，元素組成分析推測化合物分子式為C48H32O30。二級質(zhì)譜裂解分別失去4分子沒食子?；?分子吡喃葡萄糖苷得到碎片m/z 917.0833、785.0861、635.1022、450.9946、300.9944、169.0310，查閱數(shù)據(jù)庫（Chemspider），推測化合物為烏菱鞣質(zhì)（Bicornin）。

化合物29：出峰時(shí)間20.76 min，分子離子峰為m/z 939.1095 [M-H]-，推測分子式為 C41H32O26。主要碎片 769.0916、593.1570、450.9918、300.9926、169.0123，即分子離子峰分別失去4分子沒食子酰基或沒食子酸和1分子葡萄糖苷中性碎片得到，參照文獻(xiàn)[19]推測化合物為1,2,3,4,6-五-O沒食子酰 -β-D-葡 萄 糖 苷 （ 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose）。

2.3 黃酮

黃刺玫果中分離得到黃酮類成分主要苷元為山柰酚、槲皮素，糖鏈由1-3個(gè)糖組成，包括葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖，連接位置多為苷元的3位。黃酮類化合物母核多發(fā)生RDA裂解規(guī)律產(chǎn)生m/z 150.99特征碎片。

化合物30：出峰時(shí)間17.95 min，根據(jù)一級質(zhì)譜分子離子峰m/z 477.0645 [M-H]-，結(jié)合元素組成分析推測化合物分子式為C21H18O13。主要特征碎片中，分子離子失去1分子葡萄糖醛酸（176 u）得到碎片 m/z 301.0331，進(jìn)一步裂解產(chǎn)生 m/z 275.0156、178.9930、150.9993等槲皮素典型碎片離子，參照文獻(xiàn)[21]，推測化合物為槲皮素-3-O-葡糖醛酸苷（Quercetin-3-O-glucuronide）。

化合物31：出峰時(shí)間19.79 min，根據(jù)一級質(zhì)譜分子離子峰m/z 433.0754 [M-H]-，結(jié)合元素組成分析推測化合物分子式為C20H18O11。二級質(zhì)譜圖主要特征碎片中，分子離子失去1分子阿拉伯糖苷（132 u）得到碎片m/z 301.0253，繼而脫去一個(gè)氫產(chǎn)生豐度較高的特征碎片m/z 300.0256，特征碎片進(jìn)一步裂解失去1分子中心碎片H2CO產(chǎn)生碎片m/z 271.0223；母核發(fā)生RDA裂解產(chǎn)生150.9980等槲皮素典型碎片離子，參照文獻(xiàn)[22]，推測化合物為槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷（Quercetin-3-O-arabinoside）。

化合物32：出峰時(shí)間20.02 min，分子離子峰m/z 447.0905 [M-H]-，推測化合物分子式為C21H20O11。二級質(zhì)譜通過失去1分子鼠李糖苷（146 u）得到碎片301.0001，參照文獻(xiàn)[23]推測化合物為槲皮素-3-O-鼠李糖苷（Quercetin-3-O-rhamnoside）。

化合物 33：出峰時(shí)間20.30 min，根據(jù)離子峰m/z 599.1077 [M-H]-，推測分子式為 C28H24O15。二級質(zhì)譜分別失去1分子吡喃葡萄糖苷（148 u）和1分子沒食子?；?50 u）得到碎片 m/z 450.9896、301.0332，參照文獻(xiàn)[24]推測化合物為槲皮素 3-O-(6''-沒 食 子 酰 )-β-D-葡 萄 糖 苷 [Quercetin 3-O-(6''-galloyl)-β-D-glucopyranoside]。

化合物34：出峰時(shí)間21.32 min，一級質(zhì)譜下產(chǎn)生基峰m/z 447.0897 [M-H]-，得出化合物分子式為C21H20O11。二級質(zhì)譜中產(chǎn)生碎片 m/z 285.0388、255.0286、227.0312，即通過母離子失去1分子半乳糖苷（162 u）得到特征碎片m/z 285.0388，母核進(jìn)一步裂解脫掉CO后得到碎片m/z 255.0286，失去C環(huán)中的羰基形成碎片m/z 227.0312，參考文獻(xiàn)[25]，推測化合物為山奈酚-3-O-半乳糖苷（Kaempferol 3-O-β-D-galactoside）。

化合物35：出峰時(shí)間21.40 min，產(chǎn)生準(zhǔn)離子基峰m/z 461.0705 [M-H]-，得出該化合物分子量462，根據(jù)元素組成分析分子式C21H18O12。二級質(zhì)譜產(chǎn)生典型的山奈酚為母核的碎片離子，即通過母離子失去1分子葡萄糖酸（176 u）得到特征碎片m/z 285.0377，參考文獻(xiàn)[25]，推測為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（Kaempferol 3-O-β-D-glucuronide）。

化合物36：出峰時(shí)間22.25 min，一級質(zhì)譜產(chǎn)生強(qiáng)基峰 m/z 463.0879 [M-H]-，2倍分子量 m/z 927.1848[2M-H]-，確定化合物分子量為464，元素組成分析分子式為C21H20O12。二級質(zhì)譜產(chǎn)生特征碎片離子 m/z 301.0334由分子離子峰m/z 463.0879失去1分子葡萄糖（162 u）產(chǎn)生，母核進(jìn)一步裂解產(chǎn)生碎片 m/z 284.0313、271.0223、255.0298、227.0310、178.9961、151.0015，結(jié)合出峰時(shí)間并參考文獻(xiàn)[23]推測其為金絲桃苷（Hyperoside）。

化合物37：出峰時(shí)間23.06 min，一級質(zhì)譜產(chǎn)生m/z 447.0914 [M-H]-強(qiáng)離子基峰，2倍分子量 m/z 895.1929 [2M-H]-，確定分子量為448，根據(jù)元素組成分析分子式為C21H20O11。二級質(zhì)譜產(chǎn)生碎片離子m/z 285.0363由分子離子峰m/z 447.0914失去1分子葡萄糖苷（162 u）產(chǎn)生，母核進(jìn)一步裂解失去CO產(chǎn)生碎片 m/z 255.0273、227.0328，參考文獻(xiàn)[25]推測其為紫云英苷（Kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物38，出峰時(shí)間24.58 min，一級質(zhì)譜產(chǎn)生離子基峰 m/z 755.1845 [M-H]-，得出分子式為C33H40O20。二級質(zhì)譜通過失去1分子葡萄糖苷（162 u）產(chǎn)生碎片m/z 593.1194，失去1分子鼠李糖苷（146 u）得碎片m/z 447.0912，進(jìn)一步裂解失去1分子葡萄糖苷（162 u）得到特征碎片m/z 285.0334，查閱數(shù)據(jù)庫并參考文獻(xiàn)[26]，推測化合物為山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷 (1->4)-[α-L-鼠李糖苷-(1->6)]-β-D-葡萄糖苷 [Kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosyl(1->4)- [α-L-rhamnopyranosyl-(1->6)]-β-D-glucopyranoside]。

化合物39，出峰時(shí)間26.51 min，一級質(zhì)譜產(chǎn)生分子離子基峰m/z 615.0991 [M-H]-，推測分子式為C28H24O16。二級質(zhì)譜失去1分子沒食子酰基（152 u）得到碎片m/z 463.0917，進(jìn)一步裂解失去1分子葡萄糖苷（162 u）得到特征碎片m/z 301.0335，母核裂解產(chǎn)生碎片m/z 178.9981、151.0019，同時(shí)出現(xiàn)沒食子酸碎片m/z 169.0119、125.0224。查閱文獻(xiàn)[26]推測化合物為槲皮素 3-O-(6’’-沒食子?；?-β-D-葡萄糖苷 [Quercetin 3-O-(6''-galloyl)-β-D-glucopyranoside]。

化合物40：出峰時(shí)間28.36 min，根據(jù)一級質(zhì)譜產(chǎn)生離子基峰m/z 599.1033 [M-H]-，得出化合物分子式為C28H24O15。二級質(zhì)譜通過失去1分子沒食子酰基（152 u）和1分子葡萄糖苷（162 u）得到典型特征碎片m/z 285.0378，同時(shí)二級質(zhì)譜中出現(xiàn)以典型山奈酚為母核裂解的碎片m/z 257.0391、151.0038，以及沒食子酰基特征碎片m/z 169.0112、125.0212，結(jié)合文獻(xiàn)[27]，推測化合物為山奈酚-3-O-(2''-O-沒食子?；?-β-D-葡萄糖苷 [Kaempferol-3-O-(2''-O-galloyl)-β-D-glucopyranoside]。

化合物41：出峰時(shí)間28.53 min，一級質(zhì)譜產(chǎn)生離子基峰m/z 609.1240 [M-H]-，得到化合物分子量610，分子式C27H30O16。二級質(zhì)譜產(chǎn)生主要碎片m/z 463.0827為母離子脫去1分子鼠李糖苷（146 u）得到，進(jìn)一步裂解脫去1分子葡萄糖苷（162 u）得到特征苷元碎片m/z 301.0314和m/z 300.0291，其中m/z 300.0291的豐度明顯大于m/z 301.0314，說明糖苷鍵主要以均裂方式斷裂，參考文獻(xiàn)[25]推測化合物為蘆?。≦uercetin 3-O-rutinoside）。

化合物 42：出峰時(shí)間28.98 min，分子離子峰m/z 301.0327 [M-H]-，分子式為 C15H10O7，二級質(zhì)譜分子離子峰脫去 1分子氧原子（16 u）產(chǎn)生 m/z 284.0297碎片，m/z 178.9939為槲皮素脫掉B環(huán)后繼續(xù)失去1分子CH的碎片，m/z 150.9979為槲皮素RDA裂解產(chǎn)生碎片，根據(jù)以上信息推測化合物為槲皮素（Quercetin）。

化合物43：出峰時(shí)間31.95 min，一級質(zhì)譜產(chǎn)生分子離子基峰m/z 593.1289 [M-H]-，推測化合物分子式為C30H26O13。二級質(zhì)譜裂解失去1分子對香豆酰基得到碎片m/z 447.0952，繼續(xù)裂解脫去1分子葡萄糖苷得到典型山奈酚苷元碎片m/z 285.0279和m/z 284.0292，其中m/z 284.0292的豐度明顯高于m/z 285.0279，說明C環(huán)3位的糖苷鍵主要以均裂方式斷裂。同時(shí)山奈酚苷元進(jìn)一步脫掉CO形成碎片離子m/z 255.0272，再失去CO生成m/z 227.0350。結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn)[28]，推斷化合物為山奈酚 3-O-（3′-OE-p-香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷 [Kaempferol 3-O-(3′-O-E-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside]。

化合物44：出峰時(shí)間35.21 min，產(chǎn)生分子離子基峰 m/z 285.0379 [M-H]-，分子式為 C15H10O6。二級質(zhì)譜通過基峰C環(huán)脫掉CO產(chǎn)生m/z 255.1507碎片，進(jìn)一步脫O后形成m/z 238.8564碎片；山奈酚母核發(fā)生RDA裂解產(chǎn)生豐度較低碎片m/z 133.0676，推測化合物為山柰酚（Kaempferol）。

2.4 有機(jī)酸及脂肪酸

參照有機(jī)酸和脂肪酸的裂解規(guī)律和質(zhì)譜特征，并結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫（Lipidomics gateway）檢索，從黃刺玫果中鑒定出2個(gè)有機(jī)酸和7個(gè)脂肪酸。

化合物45：出峰時(shí)間1.20 min，分子離子基峰為m/z 191.0518[M-H]-，分子式為C7H12O6。二級質(zhì)譜碎片中出現(xiàn)m/z 173.0385 [M-H2O-H]-、160.8408等奎尼酸典型的特征離子碎片，參考文獻(xiàn)[29]確定化合物為奎尼酸（Quinic acid）。

化合物46：出峰時(shí)間12.71 min，分子離子峰為m/z 197.0426[M-H]-，分子式為C9H10O5。主要碎片m/z 169.0120（失去 2分子甲基）、124.0135（失去1分子羧基），參照文獻(xiàn)[30]推測化合物為丁香酸（Syringic acid）。

脂肪酸類物質(zhì)因羥基或雙鍵位置不同形成多種異構(gòu)體，裂解規(guī)律如化合物50，負(fù)離子模式下基峰為 m/z 315.2513[M-H]-，分子式為 C18H36O4，分子離子峰失去1分子H2O產(chǎn)生碎片 m/z 297.2386，經(jīng)Lipidomics gateway在線數(shù)據(jù)庫檢索，推斷化合物為二羥基硬脂酸（Dihydroxy-octadecanoic acid）；其他脂肪酸化合物 47、48、49、51、52、53經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索分別鑒定為三羥基十八碳二烯酸（Trihydroxyoctadecadienoic acid）、三羥基十八碳烯酸（Trihydroxy-octadecenoic acid）、二羥基棕櫚酸（Dihydroxy-hexadecanoic acid）、鄰苯二甲酸二異戊酯（Diisopentyl phthalate）、三羥基十二碳二烯酸-二羥基十二碳二烯酸[Trihydroxy-dodecadienoic aciddihydroxy-dodecadienoic acid (1:1)]、二十八烯酸（Octacosaheptaenoic acid）。

3 結(jié)論

采用超高效液相色譜-四級桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF-MS)對黃刺玫果乙醇提取物中的主要化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分析，采用負(fù)離子模式并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)對其成分進(jìn)行推斷，結(jié)果從黃刺玫果提取物中鑒定出29個(gè)多酚類化合物、15個(gè)黃酮化合物、以及2個(gè)有機(jī)酸和7個(gè)脂肪酸物質(zhì)，其中沒食子多酚、鞣花鞣質(zhì)多酚和黃酮化合物是其主要活性成分，沒食子類化合物具有燥濕收斂、清熱消炎、涼血止血等功效[6]，而鞣質(zhì)類物質(zhì)一般具有不同程度的保肝、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等藥理活性[11?13]。黃酮化合物具有抗氧化、抗腫瘤等多種活性[5]。本實(shí)驗(yàn)建立的方法為快速分析和鑒定黃刺玫果鞣質(zhì)和黃酮類成分提供依據(jù)，同時(shí)鞣質(zhì)和黃酮化合物的發(fā)現(xiàn)可以為黃刺玫果功能的深入研究奠定理論基礎(chǔ)。