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        結(jié)直腸腺瘤癌變序列組織中ciRS-7 和miR-7 的表達(dá)水平及關(guān)系探討

        2021-12-16 09:40:58李伊倩譚嘉圣張寶庭陳毅斌
        醫(yī)藥前沿 2021年32期
        關(guān)鍵詞:水平

        李伊倩,譚嘉圣,張寶庭,陳毅斌

        (東莞市松山湖中心醫(yī)院消化內(nèi)科 廣東 東莞 523000)

        結(jié)直腸癌是消化道常見(jiàn)的惡性腫瘤,具有較高的發(fā)病率和病死率,2012 年各惡性腫瘤發(fā)病率中,病死率位居第5 位[1]。近年來(lái),隨著人口老齡化趨勢(shì)加劇,以及人們生活、工作等方式改變,結(jié)直腸癌的發(fā)病率逐年上升,并呈現(xiàn)出一定的年輕化趨勢(shì),極大地威脅到了人們的健康乃至生命安全[2]。數(shù)據(jù)報(bào)道[3]顯示,進(jìn)展期結(jié)直腸癌的5 年生存率為7%,而早期結(jié)直腸癌則高達(dá)92%。由此不難看出,若能夠早期診斷及治療,結(jié)直腸癌的預(yù)后會(huì)得到顯著的改善,然而從以往的研究來(lái)看,超過(guò)半數(shù)的結(jié)直腸癌患者確診時(shí)癌細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移。至今,結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制仍不明確,早期診斷也無(wú)特效方法,結(jié)合當(dāng)前醫(yī)學(xué)界對(duì)惡性腫瘤分子學(xué)機(jī)制的研究,探索結(jié)直腸癌發(fā)病的分子學(xué)機(jī)制,尋找無(wú)創(chuàng)的早期檢測(cè)結(jié)直腸癌發(fā)病的分子生物學(xué)對(duì)結(jié)直腸癌的早期診斷十分重要。為此,本研究納入20 例同時(shí)具有結(jié)直腸腺瘤及結(jié)直腸腺癌患者,針對(duì)環(huán)狀RNA 分子-7(ciRS-7)和微小RNAs-7(miR-7)的表達(dá)及其相關(guān)性進(jìn)行分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1.資料與方法

        1.1 一般資料

        納入東莞市松山湖中心醫(yī)院2019 年7 月—2021 年6 月收集的20 例同時(shí)具有結(jié)直腸腺瘤及結(jié)直腸癌病例進(jìn)行研究,均行電子結(jié)腸鏡檢查及活檢。男12 例(60.00%),女8 例(40.00%);年齡35 ~75 歲,平均年齡(56.32±2.47)歲。所有患者的病例診斷均由2 名以上資深病理專(zhuān)家確診。以上標(biāo)本均通過(guò)患者家屬的知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn):①同時(shí)具有結(jié)直腸腺瘤及結(jié)直腸癌患者;②診斷明確,且未經(jīng)過(guò)放療、化療等抗腫瘤治療;③有完整的臨床病理資料。排除標(biāo)準(zhǔn):①來(lái)源于其他部分的腫瘤發(fā)生結(jié)直腸轉(zhuǎn)移者;②術(shù)前已接受放化療或者生物治療者。

        1.2 方法

        采集癌旁正常腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸癌新鮮組織標(biāo)本,取材過(guò)程中,每份組織標(biāo)本均分為3 部分,其中2 部分離體后30 min 內(nèi)保存于EP 管中,并迅速轉(zhuǎn)存于-80 ℃冰箱,用于提取總RNA;另1 部分送病理科進(jìn)行病理診斷。

        采用熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)組織標(biāo)本中ciRS-7 和miR-7 的表達(dá)水平。(1)活檢新鮮冰凍標(biāo)本總RNA 中提取:將標(biāo)本從-80 ℃冰箱中取出,立即取組織塊約100 mg,轉(zhuǎn)入研磨器中,加入液氮后繼續(xù)研磨至粉狀,再加入1 mL TRIzol 充分混勻粉末,參照常規(guī)TRIzol RNA 方法取,提取后置于-80 ℃冰箱中保存。(2)PCR 反應(yīng):核酸蛋白檢測(cè)儀檢測(cè)RNA 濃度和純度并反轉(zhuǎn)錄成cDNA,合成的cDNA 置于-20 ℃冰箱中保存,適當(dāng)稀釋后用于PCR 反應(yīng)。參照PubMed 中基因序列,利用ABI 公司的Primer Express 軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì),由上海生物工程技術(shù)公司合成。ciRS-7 和miR-7 引物序列,見(jiàn)表1。

        表1 ciRS-7 和miR-7 引物序列

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        2.結(jié)果

        2.1 各組織標(biāo)本中ciRS-7、miR-7 表達(dá)水平比較

        ciRS-7 表達(dá):結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤表達(dá)水平高于癌旁正常腸黏膜,結(jié)直腸癌表達(dá)水平高于結(jié)直腸腺瘤,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);miR-7 表達(dá):結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤表達(dá)水平低于癌旁正常腸黏膜,結(jié)直腸癌表達(dá)水平低于結(jié)直腸腺瘤,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

        表2 各組織標(biāo)本中ciRS-7、miR-7 表達(dá)水平比較(± s)

        表2 各組織標(biāo)本中ciRS-7、miR-7 表達(dá)水平比較(± s)

        注:*與癌旁正常腸黏膜P <0.05,△與結(jié)直腸腺瘤P <0.05。

        組織例數(shù)ciRS-7miR-7癌旁正常腸黏膜200.95±0.120.39±0.07結(jié)直腸腺瘤201.48±0.20*0.61±0.10*結(jié)直腸癌202.07±0.31*△1.02±0.18*△

        2.2 各組織標(biāo)本中ciRS-7、miR-7 表達(dá)的相關(guān)性

        在各組織標(biāo)本中,ciRS-7 和miR-7 的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05),見(jiàn)表3。

        表3 各組織標(biāo)本中ciRS-7、miR-7 表達(dá)相關(guān)性

        3.討論

        結(jié)直腸癌的發(fā)病過(guò)程是漸進(jìn)性的過(guò)程,其惡變途徑主要表現(xiàn)為“腺瘤→腺癌”,報(bào)道指出,超過(guò)2/3 的腺癌是由腺瘤進(jìn)展而來(lái)[4]。但是,盡管臨床對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了深入探究,然而其癌變途徑和分子機(jī)制尚不明確。

        CircRNA 廣泛存在與真核細(xì)胞中,是一種內(nèi)源性非編碼新型RNA 分子,其不存在5’和3’末端,被RNA 外切酶破壞的可能性較低,與傳統(tǒng)線性RNA 相比,其穩(wěn)定性更加突出,而上述特征的存在,也使其相較于miRNAs和非編碼長(zhǎng)鏈RNA 作為生物學(xué)標(biāo)志物應(yīng)用在惡性腫瘤的早期診治中更為適合[5]。CiRS-7 是RAN 分子之一,形狀為環(huán)狀,其功能主要為miRNA 海綿、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)和與RNA 結(jié)合蛋白相互作用。但是國(guó)內(nèi)有關(guān)CiRS-7 與結(jié)直腸癌相關(guān)內(nèi)容的研究并不多見(jiàn)[6]。miRNAs 是非編碼RNA,有長(zhǎng)19 ~23 個(gè)的核苷酸,參與了細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和凋亡[7]。RNA-7 是一種新型的腫瘤標(biāo)志物,其在多種腫瘤中的表達(dá)均表現(xiàn)出下調(diào),有研究指出其是惡性腫瘤預(yù)后不良的重要危險(xiǎn)因素[8]。然而國(guó)內(nèi)尚無(wú)miR-7在正常腸黏膜-結(jié)直腸腺瘤-腸癌序列癌變組織中表達(dá)方面的研究。本文結(jié)果顯示,結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺瘤、正常腸黏膜各組織標(biāo)本中,CiRS-7 的表達(dá)水平逐漸下降,而miR-7 的表達(dá)水平則逐漸上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明了在結(jié)直腸腺瘤癌變序列組織中,的確存在CiRS-7、miR-7 異常表達(dá)的現(xiàn)象,其中CiRS-7表達(dá)上調(diào),miR-7 下調(diào)。因此可以說(shuō)明,CiRS-7、miR-7在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了一定的作用。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),CiRS-7、miR-7 的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示二者相互負(fù)性調(diào)控關(guān)系。由此可以推測(cè),在結(jié)直腸癌細(xì)胞中,CiRS-7 可抑制miR-7 的表達(dá),其可能發(fā)揮出了miR-7 抑制劑的作用。由于國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道并不多見(jiàn),本研究盡管獲得上述研究結(jié)果,但仍有待深入探究并證實(shí)。

        綜上所述,結(jié)直腸腺瘤癌變序列組織中,ciRS-7 表達(dá)上升,miR-7 表達(dá)下降,且二者之間呈顯著的負(fù)相關(guān),提示ciRS-7 和miR-7 有望成為結(jié)直腸腺瘤及腺癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療的分子生物學(xué)指標(biāo)。

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