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        面向環(huán)境專(zhuān)業(yè)研究生的生物分析實(shí)驗(yàn)課程建設(shè)與實(shí)踐

        2021-12-14 07:16:40付小花樂(lè)毅全孫雅潔
        實(shí)驗(yàn)室研究與探索 2021年10期
        關(guān)鍵詞:研究生生物環(huán)境

        付小花,樂(lè)毅全,陳 皓,張 華,孫雅潔,王 磊

        (同濟(jì)大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院污染控制與資源化研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 200092)

        0 引言

        隨著人們對(duì)可持續(xù)發(fā)展問(wèn)題認(rèn)識(shí)逐漸深入,保護(hù)人類(lèi)賴(lài)以生存的環(huán)境、實(shí)施可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略已成為21世紀(jì)國(guó)際社會(huì)“環(huán)境與發(fā)展”與“和平與發(fā)展”兩個(gè)同等重要的主題內(nèi)容之一[1]。國(guó)家層面和民眾生活層面都對(duì)污染治理及環(huán)境保護(hù)投入了越來(lái)越多的關(guān)注,為了順應(yīng)國(guó)家對(duì)高層次環(huán)保人才的需求,各高校紛紛增設(shè)環(huán)境專(zhuān)業(yè)碩士、博士點(diǎn),培養(yǎng)環(huán)境人才[2]。環(huán)境專(zhuān)業(yè)研究生培養(yǎng)的目標(biāo)是為國(guó)家培養(yǎng)具有科學(xué)精神和創(chuàng)新能力的環(huán)境研究和管理的高層次人才,為國(guó)家環(huán)保政策的制定和執(zhí)行助力[3]。研究生階段是培養(yǎng)學(xué)生運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決實(shí)際問(wèn)題的過(guò)程,配套實(shí)驗(yàn)課程的開(kāi)設(shè)有助于促進(jìn)研究生對(duì)課堂理論內(nèi)容的深入理解與吸收,促使學(xué)生們主動(dòng)參與學(xué)習(xí)理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能,化被動(dòng)為主動(dòng),提升研究生的動(dòng)手能力、分析及解決實(shí)際環(huán)境問(wèn)題的能力,培養(yǎng)研究生的創(chuàng)新思維及科研能力[4]。

        1 開(kāi)設(shè)生物分析實(shí)驗(yàn)課程的必要性

        環(huán)境污染治理及環(huán)境保護(hù)都離不開(kāi)生物的作用,環(huán)境領(lǐng)域的科學(xué)研究中常需要探究環(huán)境生物的種類(lèi)及功能、特定基因的分布及相互作用、病原微生物檢測(cè)、有害微生物控制等內(nèi)容,而這些研究離不開(kāi)相關(guān)生物分析方法和實(shí)驗(yàn)儀器的應(yīng)用[5-7]。同時(shí),現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展日新月異,特別是基因擴(kuò)增技術(shù)與基因工程的發(fā)展對(duì)環(huán)境生物研究的深入開(kāi)展起到了極大的推動(dòng)作用[8]。

        環(huán)境相關(guān)專(zhuān)業(yè)研究生在課題研究中,為了闡明實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的機(jī)理多有涉及環(huán)境生物功能或特定生物基因的研究,能熟練運(yùn)用生物分析技術(shù)對(duì)課題研究的順利完成及拓展研究深度尤為重要。而環(huán)境相關(guān)專(zhuān)業(yè)學(xué)生本科階段的實(shí)驗(yàn)課程幾乎沒(méi)有涉及分子生物實(shí)驗(yàn),甚至于很多學(xué)生對(duì)分子生物學(xué)基礎(chǔ)理論知識(shí)也不了解,因此分子生物實(shí)驗(yàn)技能就成了研究生課題研究的“攔路虎”,很多學(xué)生在這部分研究上花費(fèi)了大量時(shí)間、精力和實(shí)驗(yàn)材料成本,但收效甚微。面向環(huán)境相關(guān)專(zhuān)業(yè)研究生開(kāi)設(shè)生物分析實(shí)驗(yàn)課程,系統(tǒng)學(xué)習(xí)環(huán)境生物分析的相關(guān)理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)操作技能,特別是分子生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)在環(huán)境科學(xué)研究中的應(yīng)用,使研究生在開(kāi)始課題研究之前熟悉并掌握基本的生物分析方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù),達(dá)到能立即進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展研究工作的水平和狀態(tài),從而縮短學(xué)生進(jìn)入課題研究的適應(yīng)期,提升研究生的科研思維和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。

        2 教學(xué)目標(biāo)及特色

        生物分析實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)目的是使學(xué)生熟悉和了解現(xiàn)代生物分析技術(shù)在環(huán)境領(lǐng)域的應(yīng)用及目前國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備所能開(kāi)展的各種環(huán)境生物研究的技術(shù)原理、特點(diǎn)及操作要領(lǐng),學(xué)會(huì)相關(guān)儀器設(shè)備的使用方法及其注意事項(xiàng)。希望能通過(guò)本課程的學(xué)習(xí)使學(xué)生們了解并掌握常用于環(huán)境研究的生物分析技術(shù)的原理及實(shí)驗(yàn)操作技能,為研究生的課題研究敲開(kāi)技術(shù)瓶頸,提升研究生運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決實(shí)際環(huán)境問(wèn)題的能力,為國(guó)家推進(jìn)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略培養(yǎng)具有創(chuàng)新能力和競(jìng)爭(zhēng)性的中高級(jí)人才。

        課程的主要特色是瞄準(zhǔn)國(guó)內(nèi)外環(huán)境研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問(wèn)題,強(qiáng)調(diào)分子生物技術(shù)在環(huán)境研究中的應(yīng)用,使學(xué)生了解并掌握分子生物學(xué)基本概念、基本原理;突出實(shí)驗(yàn)操作及實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析的指導(dǎo)與訓(xùn)練,促進(jìn)學(xué)生理解、掌握并熟練運(yùn)用生物分析實(shí)驗(yàn)技術(shù)。基礎(chǔ)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)原理與實(shí)驗(yàn)操作學(xué)習(xí)相結(jié)合,使學(xué)生在理解的基礎(chǔ)上學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)操作,從而更好地理解實(shí)驗(yàn)原理,提升學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力。對(duì)各種生物分析技術(shù)的原理、方法的系統(tǒng)學(xué)習(xí),有助于學(xué)生選擇適合自己論文研究的分析手段,便于后期深入開(kāi)展科學(xué)研究。

        3 教學(xué)內(nèi)容設(shè)置

        3.1 根據(jù)課程特點(diǎn)及學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu)設(shè)置教學(xué)內(nèi)容

        我校環(huán)境學(xué)科的定位是國(guó)內(nèi)一流、國(guó)際知名;研究生課程中的生物分析實(shí)驗(yàn)課程教學(xué)在培養(yǎng)符合21 世紀(jì)環(huán)境專(zhuān)業(yè)新型創(chuàng)新性拔尖人才方面具有舉足輕重的作用。研究生不僅課題研究需要進(jìn)行科研工作,其中一部分可能會(huì)終身與科研為伍,所以培養(yǎng)研究生的科學(xué)素養(yǎng)、科研思維及解決實(shí)際問(wèn)題能力是研究生教學(xué)工作的重要目標(biāo)[9-10]。生物分析,特別是分子生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)是技術(shù)性很強(qiáng)的學(xué)科,教學(xué)內(nèi)容深、涉及范圍廣,且較難理解,教學(xué)必須理論結(jié)合實(shí)踐,否則學(xué)生很難透徹理解和掌握這些實(shí)驗(yàn)技術(shù)[11-12]。

        對(duì)選課的40 名研究生進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查,結(jié)果顯示80%的研究生選課的原因是論文研究需要,95%的研究生本科專(zhuān)業(yè)為環(huán)境工程、環(huán)境科學(xué)或市政工程,本科階段學(xué)習(xí)過(guò)的生物學(xué)相關(guān)課程主要有:環(huán)境微生物學(xué)(77.5%)、環(huán)境生物學(xué)(15%)、微生物學(xué)(12.5%),沒(méi)有學(xué)習(xí)過(guò)分子生物學(xué)相關(guān)課程的學(xué)生占比達(dá)75%。學(xué)生分子生物學(xué)知識(shí)儲(chǔ)備欠缺,對(duì)一些基本概念理解不清或完全不了解,如對(duì)寡核苷酸片段、16S rDNA、dNTP、基因文庫(kù)和定量PCR 等概念有50%以上的學(xué)生表示僅聽(tīng)說(shuō)過(guò)或完全沒(méi)聽(tīng)說(shuō)過(guò)(見(jiàn)圖1)。在這種條件下,直接進(jìn)入生物分析實(shí)驗(yàn)操作的學(xué)習(xí)會(huì)導(dǎo)致學(xué)生難以理解掌握,所以學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)操作前先安排相關(guān)理論知識(shí)的講授,主要包括微生物的培養(yǎng)和鑒定、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術(shù)、凝膠電泳、定量PCR、基因克隆、宏基因組及高通量測(cè)序研究等相關(guān)知識(shí)的講授。通過(guò)這些理論知識(shí)的學(xué)習(xí),增加研究生的生物學(xué)知識(shí)儲(chǔ)備,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作技能學(xué)習(xí)奠定理論基礎(chǔ)。

        圖1 選課研究生對(duì)一些概念的理解情況(%)

        3.2 根據(jù)科研需求設(shè)置教學(xué)內(nèi)容

        從學(xué)院承擔(dān)的國(guó)家各級(jí)研究項(xiàng)目及往年研究生課題研究中對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的需求入手,歸納梳理學(xué)院科研、學(xué)科發(fā)展及研究生培養(yǎng)需要的生物分析實(shí)驗(yàn)技術(shù),逐步完善實(shí)驗(yàn)教學(xué)項(xiàng)目和內(nèi)容。課程圍繞環(huán)境樣品中特定菌群(基因)的定性、定量檢測(cè)設(shè)置實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,目前課程主要開(kāi)設(shè)微生物鑒定、DNA提取、PCR擴(kuò)增、瓊脂糖電泳、定量PCR、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化與鑒定等實(shí)驗(yàn),同時(shí)設(shè)置蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)、大腸桿菌感受態(tài)制備兩個(gè)演示實(shí)驗(yàn)。宏基因組分析、宏轉(zhuǎn)錄組分析及高通量測(cè)序是目前應(yīng)用較多的實(shí)驗(yàn)技術(shù),一般由生物公司完成,課程理論講授部分會(huì)概要講解這些技術(shù)的原理及與生物公司簽訂合同、送樣時(shí)需要注意的問(wèn)題。這些實(shí)驗(yàn)內(nèi)容基本涵蓋了當(dāng)前學(xué)院開(kāi)展的環(huán)境研究中常用的生物分析實(shí)驗(yàn)技術(shù),在理解的基礎(chǔ)上熟練運(yùn)用這些實(shí)驗(yàn)技術(shù)有助于研究生課題研究實(shí)驗(yàn)方案的確定和研究工作的順利開(kāi)展。

        4 師資、儀器與經(jīng)費(fèi)保障

        隨著科技進(jìn)步,傳統(tǒng)的培養(yǎng)、分離、發(fā)酵等生物分析方法在科學(xué)研究中的應(yīng)用逐漸減少,取而代之的是分子生物學(xué)技術(shù)的興起與廣泛應(yīng)用。為了滿(mǎn)足學(xué)院科研及研究生課題研究的需求,課程中設(shè)置了大量的分子生物實(shí)驗(yàn),所以需要購(gòu)置昂貴的分子生物試劑,需要配備大型精密實(shí)驗(yàn)儀器,且需要有精通分子生物技術(shù)的授課教師。課程依托污染控制與資源化研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室大型儀器,如高速離心機(jī)、PCR儀、定量PCR儀、蛋白雙向系統(tǒng)等,開(kāi)設(shè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課程,培養(yǎng)研究生的同時(shí)也提高了儀器的使用率。實(shí)驗(yàn)用試劑耗材費(fèi)用1 年約需2 萬(wàn)元,從重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行經(jīng)費(fèi)中支出。這門(mén)課程由畢業(yè)于復(fù)旦大學(xué)生命學(xué)院的兩位老師負(fù)責(zé),他們長(zhǎng)期從事環(huán)境生物相關(guān)研究,具有豐富的環(huán)境生物研究經(jīng)驗(yàn),具備開(kāi)展實(shí)驗(yàn)教學(xué)的能力。同時(shí),老師們?cè)谡n程開(kāi)設(shè)過(guò)程中,通過(guò)向兄弟院校、兄弟院系學(xué)習(xí),不斷提升教學(xué)能力。

        5 教學(xué)實(shí)踐及效果

        5.1 教學(xué)實(shí)踐的開(kāi)展

        生物分析實(shí)驗(yàn)課程在環(huán)境科學(xué)、環(huán)境工程和市政工程3 個(gè)專(zhuān)業(yè)的研究生中已經(jīng)開(kāi)設(shè)了幾年,積累了一些教學(xué)經(jīng)驗(yàn)。每期開(kāi)課前先建立班級(jí)微信群,方便師生溝通交流。每次上課前3~4 d,教師在微信群里發(fā)布一些下次課實(shí)驗(yàn)技術(shù)相關(guān)的理論知識(shí)或?qū)嵺`案例,督促學(xué)生做好課前預(yù)習(xí)工作。除了集中講授課程理論知識(shí)外,每次實(shí)驗(yàn)前教師對(duì)本次實(shí)驗(yàn)涉及的方法、原理進(jìn)行復(fù)習(xí)及回顧,對(duì)實(shí)驗(yàn)涉及儀器的具體使用方法進(jìn)行詳細(xì)講解,特別是一些實(shí)驗(yàn)技巧,更要在講解的同時(shí)給予演示。對(duì)實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行預(yù)估并指導(dǎo)學(xué)生避免犯錯(cuò)。但是,分子生物實(shí)驗(yàn)的一個(gè)重要特點(diǎn)就是不確定性,同樣的實(shí)驗(yàn),相同的試劑樣品,不同學(xué)生操作結(jié)果可能千差萬(wàn)別[13-14]。課程教授中重視實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析、出現(xiàn)問(wèn)題的可能原因及處理方法的指導(dǎo),在教授研究生實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)培養(yǎng)其分析、處理實(shí)際實(shí)驗(yàn)問(wèn)題的能力。

        課程中的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)圍繞環(huán)境樣品的特定微生物檢測(cè)開(kāi)展,引導(dǎo)學(xué)生將其當(dāng)成一個(gè)課題研究來(lái)學(xué)習(xí),將實(shí)驗(yàn)技術(shù)學(xué)習(xí)和綜合性、研究性課題研究學(xué)習(xí)融合,增強(qiáng)研究生對(duì)實(shí)驗(yàn)的整體性認(rèn)識(shí)和學(xué)習(xí)興趣。實(shí)驗(yàn)前教師準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需無(wú)菌耗材和試劑,實(shí)驗(yàn)中兩人1 組,每組1 套實(shí)驗(yàn)用品。實(shí)驗(yàn)中以學(xué)生自主操作、教師巡視指導(dǎo)為主要教學(xué)方法。瓊脂糖電泳和定量PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行結(jié)果分析,講解實(shí)驗(yàn)結(jié)果中反映出來(lái)的操作問(wèn)題、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋問(wèn)題、加樣誤差問(wèn)題、實(shí)驗(yàn)污染問(wèn)題等,并引導(dǎo)學(xué)生查閱文獻(xiàn)資料,在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中詳細(xì)討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果中出現(xiàn)的各種問(wèn)題的成因。最終考核按考試和平時(shí)成績(jī)各占50%來(lái)評(píng)定,而平時(shí)成績(jī)又分為實(shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)報(bào)告兩部分,考試則主要考察一些實(shí)驗(yàn)基本原理及實(shí)驗(yàn)問(wèn)題分析[15]。

        實(shí)驗(yàn)教學(xué)中,教會(huì)學(xué)生分析實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問(wèn)題是重要且困難的,問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果顯示80%的學(xué)生希望能加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析的講解。教學(xué)中應(yīng)用的材料都是課前準(zhǔn)備并經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定能得到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[見(jiàn)圖2(a)],這種情況下分析實(shí)驗(yàn)問(wèn)題的原因比較簡(jiǎn)單。而研究生以后要面臨的課題研究中出現(xiàn)類(lèi)似問(wèn)題時(shí),分析原因就比較困難了,教學(xué)過(guò)程中也一并教學(xué)生在真實(shí)的科研中,應(yīng)該從哪些方面分析出現(xiàn)問(wèn)題的可能原因及可行的解決辦法。教學(xué)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)PCR 實(shí)驗(yàn)中加入模板量不足、漏加試劑及操作引入污染是出現(xiàn)的主要問(wèn)題,如圖2(b)中陰性對(duì)照出現(xiàn)條帶,說(shuō)明有污染,可能是操作不規(guī)范引入了外源DNA 污染;圖2(c)中樣品4~9 無(wú)明顯條帶,可能是漏加樣品DNA或樣品DNA加入量不足(移液器使用不當(dāng))導(dǎo)致的。定量PCR實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問(wèn)題主要是標(biāo)準(zhǔn)品稀釋操作問(wèn)題、模板加入后混勻不充分或平行樣分裝體系不一致等問(wèn)題[見(jiàn)圖2(e)(f)]。

        圖2 學(xué)生PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        5.2 教學(xué)效果

        經(jīng)過(guò)幾年的教學(xué)實(shí)踐,生物分析課程體系日趨成熟,取得了良好的教學(xué)效果。學(xué)生通過(guò)實(shí)驗(yàn)課程了解、掌握了常用的現(xiàn)代生物分析技術(shù),切身體會(huì)到新實(shí)驗(yàn)技術(shù)的簡(jiǎn)便性與靈敏性。經(jīng)過(guò)理論學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)操作、結(jié)果分析及資料查詢(xún)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)等,使研究生得到系統(tǒng)鍛煉,培養(yǎng)了他們的獨(dú)立思考能力、實(shí)驗(yàn)操作技能和分析問(wèn)題的能力,充分調(diào)動(dòng)了研究生的學(xué)習(xí)興趣和積極性,有利于研究生樹(shù)立嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)思維和態(tài)度,提升其創(chuàng)新能力。此課程受到學(xué)院老師和同學(xué)們的一致好評(píng),選課人數(shù)一直處于爆滿(mǎn)狀態(tài),學(xué)生甚至用“秒殺”來(lái)描述選課搶名額的激烈程度。問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果顯示,90%的學(xué)生認(rèn)為經(jīng)過(guò)生物分析課程學(xué)習(xí),有助于縮短他們進(jìn)入自己課題研究時(shí)的實(shí)驗(yàn)室工作適應(yīng)期,并有助于他們研究路線的確定及提高研究效率;80%的學(xué)生認(rèn)為經(jīng)過(guò)課程學(xué)習(xí),提升了他們的生物分析實(shí)驗(yàn)技能,因而提高了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量。

        6 結(jié)語(yǔ)

        研究生階段培養(yǎng)的學(xué)生應(yīng)具有科學(xué)思維和實(shí)驗(yàn)技能,生物分析實(shí)驗(yàn)技術(shù)是環(huán)境生物研究必備的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。分子生物實(shí)驗(yàn)所需試劑價(jià)格較貴,開(kāi)設(shè)課程需要實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)較多;實(shí)驗(yàn)中問(wèn)題層出不窮,任課教師必須具備良好的分子生物學(xué)理論知識(shí)和豐富的分子生物實(shí)驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn),囿于經(jīng)費(fèi)和教師經(jīng)驗(yàn)問(wèn)題,實(shí)際給環(huán)境相關(guān)專(zhuān)業(yè)研究生開(kāi)設(shè)此類(lèi)實(shí)驗(yàn)課程的學(xué)校較少[16]。隨著科技的發(fā)展和深入研究的需要,對(duì)教學(xué)內(nèi)容適當(dāng)調(diào)整,以滿(mǎn)足創(chuàng)新人才的培養(yǎng)需求,是實(shí)驗(yàn)課程建設(shè)的重要內(nèi)容。我院從科學(xué)研究和研究生培養(yǎng)角度考慮設(shè)置生物分析實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容,并在學(xué)院各專(zhuān)業(yè)研究生中開(kāi)展了教學(xué)實(shí)踐,使研究生在進(jìn)入課題研究前,系統(tǒng)地學(xué)習(xí)了目前環(huán)境研究常用的生物分析實(shí)驗(yàn)技術(shù),拓寬了研究生的視野,培養(yǎng)了研究生的探索精神和實(shí)踐能力,提升了研究生參與科研的積極性和主動(dòng)性,取得了良好的教學(xué)效果。

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        長(zhǎng)期鍛煉創(chuàng)造體內(nèi)抑癌環(huán)境
        一種用于自主學(xué)習(xí)的虛擬仿真環(huán)境
        孕期遠(yuǎn)離容易致畸的環(huán)境
        第12話 完美生物
        航空世界(2020年10期)2020-01-19 14:36:20
        環(huán)境
        論研究生創(chuàng)新人才的培養(yǎng)
        清退超時(shí)研究生是必要之舉
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