張朝陽(yáng)，黃光昱，陳永波，胡百順，秦 邦，劉淑琴，陳 娥，龐旭娟，譚坤林

（湖北省恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北 恩施445000）

藤茶，俗稱長(zhǎng)壽藤、茅巖莓茶、龍須茶等，為葡萄科蛇葡萄屬木質(zhì)藤本植物顯齒蛇葡萄［Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz.）W.T.Wang］，主要分布于中國(guó)長(zhǎng)江流域以南的湖南、湖北、江西、貴州、福建、廣東等地［1］，2013年由國(guó)家衛(wèi)計(jì)委根據(jù)有關(guān)規(guī)定批準(zhǔn)成為新食品原料。藤茶含黃酮類、酚類、氨基酸（17種）、多糖、甾體、揮發(fā)油等多類物質(zhì)［2］，其中尤以二氫楊梅素含量高而出名，藥理研究表明，二氫楊梅素有抗炎、抑菌、抗氧化、降血糖血脂、保肝護(hù)肝等作用［3-12］。

近年來(lái)，藤茶中二氫楊梅素的研究一直是熱點(diǎn)問(wèn)題。常敬芳等［13］、馮淳等［14］分別建立了HPLC測(cè)定顯齒蛇葡萄中黃酮類化合物的方法。熊偉等［15］研究了熱水浸提法同步提取藤茶中二氫楊梅素和多糖的工藝。張明生等［16］分析了江口縣顯齒蛇葡萄中二氫楊梅素和楊梅素的含量。石治敏［17］研究了顯齒蛇葡萄中二氫楊梅素的制備及其抗氧化活性。目前，對(duì)藤茶二氫楊梅素的研究主要集中在提取、測(cè)定、抗氧化活性等方面，對(duì)不同采收期藤茶二氫楊梅素含量與硒含量關(guān)系研究較少，本研究在前期根施硒肥對(duì)藤茶硒含量研究［18］的基礎(chǔ)上，繼續(xù)深入研究根施硒肥對(duì)藤茶二氫楊梅素的影響，以期對(duì)藤茶的生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 儀器和材料

高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技公司，UltiMate 3000）；原子熒光光度計(jì)（北京吉天儀器公司，AFS-930d）；分析天平（賽多利斯公司，SQP）。二氫楊梅素對(duì)照品（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司，10270010）；硒標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，20D3724）。藤茶采于恩施州來(lái)鳳縣綠水鎮(zhèn)老寨村試驗(yàn)基地，干燥粉碎后過(guò)40目篩密封備用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)，試驗(yàn)變量為富硒生物有機(jī)肥，共設(shè)5個(gè)處理，CK為空白對(duì)照，A、B、C、D對(duì)應(yīng)的富硒生物有機(jī)肥使用量分別為750、1 500、2 250、3 000 kg/hm2；每個(gè)處理3次重復(fù)，共15個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積84 m2，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行相隔。

1.3 硒含量測(cè)定

按照GB 5009.93—2017［19］的規(guī)定執(zhí)行。

1.4 二氫楊梅素含量測(cè)定

采用Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.15%磷酸水溶液（55∶45），柱溫25℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)291 nm，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 藤茶二氫楊梅素含量測(cè)定

由表1可知，不同施肥處理?xiàng)l件下，藤茶二氫楊梅素含量最高為8月5日AⅡ處理，達(dá)49.39%，最低為10月5日DⅡ處理（7.68%），硒含量最高為6月5日DⅡ處理，達(dá)到4.54 mg/kg，最低為6月5日CKⅢ處理（0.02 mg/kg）。二氫楊梅素測(cè)定HPLC圖譜見(jiàn)圖1。

圖1 二氫楊梅素對(duì)照品（左）及樣品溶液（右）HPLC圖譜

表1 藤茶二氫楊梅素含量測(cè)定結(jié)果

2.2 采收期對(duì)藤茶二氫楊梅素含量的影響

由圖2可知，同一施肥處理不同采收期藤茶二氫楊梅素含量不同，8月5日藤茶二氫楊梅素平均含量最高，10月5日藤茶二氫楊梅素平均含量最低，且除C處理6月5日藤茶二氫楊梅素平均含量略高于7月5日外，其他各處理藤茶二氫楊梅素平均含量均呈先升后降的趨勢(shì)。

圖2 不同采收期藤茶二氫楊梅素平均含量比較

2.3 不同施肥處理對(duì)藤茶二氫楊梅素的影響

由表1可知，除10月5日采收期外，其他采收期藤茶二氫楊梅素含量均大于20%。對(duì)同一采收期不同處理藤茶二氫楊梅素含量數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，由

表2可知，同一采收期藤茶二氫楊梅素含量組間F值分別為1.801、0.294、1.079、2.640、0.568，P均大于0.05，對(duì)各組間進(jìn)行多重比較發(fā)現(xiàn)，各組間存在不同程度差異。由圖2可知，同一采收期不同處理藤茶二氫楊梅素平均含量不同，但基本呈先升后降的趨勢(shì)，除7月5日外，其他采收期CK、A、B、C處理藤茶二氫楊梅素平均含量均大于D處理，且所有采收期內(nèi)藤茶二氫楊梅素平均含量最高處理均在A、B、C、D處理內(nèi)，5個(gè)不同采收期中，二氫楊梅素平均含量最大的處理分別為C、D、A、B、A處理。

表2 藤茶二氫楊梅素含量方差分析

2.4 二氫楊梅素含量與硒含量相關(guān)性

對(duì)6月5日、7月5日藤茶二氫楊梅素含量、硒含量相同處理平均數(shù)作圖進(jìn)行分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。利用公式Cov（X，Y）=E［（X-E［X］）（Y-E［Y］）］計(jì)算藤茶二氫楊梅素含量、硒含量協(xié)方差，其中X、Y分別代表二氫楊梅素、硒含量測(cè)定值，［X］、［Y］分別代表二氫楊梅素、硒含量平均值。

利用下列公式計(jì)算藤茶二氫楊梅素含量、硒含量相關(guān)系數(shù)，其中Cov（X，Y）為X、Y的協(xié)方差，D（X）、D（Y）分別為X、Y的方差，經(jīng)計(jì)算6月5日、7月5日藤茶二氫楊梅素含量、硒含量相關(guān)系數(shù)分別為-0.34、0.40。

相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值均小于0.50，說(shuō)明藤茶二氫楊梅素含量與硒含量間相關(guān)性不顯著，同時(shí)由圖3、圖4可知，藤茶硒含量隨硒肥施用量增加呈上升趨勢(shì)，圖3中藤茶二氫楊梅素含量隨硒肥施用量的增加呈先升后降的趨勢(shì)，且A、B、C處理二氫楊梅素含量高于CK處理，CK處理二氫楊梅素含量高于D處理。圖4中藤茶二氫楊梅素含量隨硒肥施用量的增加呈先升后降再升的趨勢(shì)，且A、B、C、D處理二氫楊梅素含量均高于CK處理，結(jié)合相關(guān)分析，說(shuō)明適量硒肥對(duì)藤茶二氫楊梅素含量升高有促進(jìn)作用。

圖3 6月5日藤茶二氫楊梅素含量和硒含量

圖4 7月5日藤茶二氫楊梅素含量和硒含量

3 小結(jié)與討論

不同采收期對(duì)藤茶二氫楊梅素含量有不同程度影響。黃建華等［20］研究表明，藤茶二氫楊梅素含量呈月遞減趨勢(shì)，4月最高，6月最低。雷華平等［21］研究表明，4—5月藤茶中總黃酮和二氫楊梅素含量最高，然后回落，8月有小高峰。本研究發(fā)現(xiàn)，6—10月藤茶二氫楊梅素含量呈先升后降的趨勢(shì)，8月達(dá)最高值，10月含量降至最低。因本試驗(yàn)采集的藤茶樣品來(lái)自當(dāng)年扦插苗，4—5月藤茶龍須較少，10月后溫度降低葉片脫落無(wú)龍須可采，故本研究只采集了6—9月的龍須、10月的普葉，不同部位對(duì)藤茶二氫楊梅素含量有影響［22，23］，可能是造成本研究與上述研究存在差異的原因。

同時(shí)，本研究分析了6月5日、7月5日藤茶二氫楊梅素含量與硒含量關(guān)系，發(fā)現(xiàn)適量硒肥對(duì)藤茶二氫楊梅素含量升高有促進(jìn)作用，故藤茶在富硒栽培時(shí)需合理控制硒肥濃度。本研究只進(jìn)行了根施硒肥對(duì)當(dāng)年扦插藤茶二氫楊梅素含量與硒含量的影響，后期將繼續(xù)對(duì)多年生藤茶二氫楊梅素含量及抗氧化活性等方面進(jìn)行研究，以期推動(dòng)藤茶特色產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。