王 祺，馬增輝，王莉佳，楊毅青

（山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原 030031）

林可霉素是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，價(jià)格低廉、抗菌能力強(qiáng)，可抑制細(xì)菌細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成[1]。飼料中添加林可霉素，可促進(jìn)畜禽類動(dòng)物的生長。為了保護(hù)消費(fèi)者的健康，建立食品安全屏障，研究畜禽肉中林可霉素殘留檢測方法尤為重要。目前檢測方法有GC[2]、GC-MS[3]、LC-MS法[4]。GC法與GC-MS法檢出限高且需要衍生化反應(yīng)，過程復(fù)雜；LC-MS法靈敏度高，檢出限低，但是用內(nèi)標(biāo)法定量，成本較高[5]。本研究選取代謝周期較短、林可霉素的殘留相對較多的雞肉為試驗(yàn)材料，采用隨行回收試驗(yàn)，參照 GB/T 20792—2006，采用外標(biāo)法定量建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測林可霉素殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

雞肉（購自某超市）；林可霉素（中國食品藥品檢定研究院，批號：130432，含量85.5%）；甲醇、乙腈、正己烷均為色譜純；甲酸銨、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、氯化鈉均為優(yōu)級純；實(shí)驗(yàn)室一級超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

島津8050液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)儀；粉碎機(jī)；渦旋混合器；離心機(jī)；氮?dú)鉂饪s儀；固相萃取裝置；OHAUS電子天平（精密度0.001 g）；PEP-2固相萃取柱（500 mg/6 mL）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 試樣提取方法及凈化

將樣品充分?jǐn)囁榛靹颍瑴?zhǔn)確稱取試樣約5 g（精確至 0.01 g），置于50 mL離心管中，加入15.0 mL乙腈，于渦旋混合器上2 000 r/min振蕩10 min，以5 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液于另一個(gè)離心管中，加入2.0 g氯化鈉和10.0 mL正己烷，2 000 r/min渦旋振蕩10 min，以 5 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，吸取全部中間乙腈層于另一個(gè)離心管中用氮?dú)鉂饪s儀于55 ℃水浴中吹至近干。

用7 mL磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L；pH=8）分兩次溶解殘?jiān)?，使樣液以小?.0 mL/min的流速通過固相萃取柱，樣液全部流出后，用10 mL水和5 mL甲醇＋水溶液（2＋3）洗柱，棄去全部流出液，固相萃取柱用真空泵抽干，再用10 mL甲醇洗脫于15 mL離心管中，55 ℃水浴用氮吹至近干，準(zhǔn)確加入1.0 mL甲酸銨溶液（0.1 mmol/L）溶解殘?jiān)?，過 0.22 μm濾膜，待測定，按上述步驟制備空白樣品提取液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及工作曲線配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制。準(zhǔn)確稱取林可霉素13.90 mg，用甲醇溶解定容至10 mL容量瓶刻度，混勻，得濃度為 1.19 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃保存。

（2）基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作系列配制。吸取0.1 mL林可霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混勻，得濃度為11.90 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液。吸取0.1 mL林可霉素中間液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，混勻，得濃度為119 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。再精密吸取林可霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液，樣品空白提取液稀釋成2.38 ng/mL、5.94 ng/mL、11.88 ng/mL、23.76 ng/mL和59.40 ng/mL濃度系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.3 液相色譜-質(zhì)譜條件

（1）液相條件。色譜柱：YMC（1.9 μm×150 mm×2.1 mm）；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相由乙腈（A）和0.1 mmol/L甲酸銨溶液（B）組成，流速：0.3 mL/min。梯度洗脫程序?yàn)椋?～3.0 min，5%A＋95%B；3.0～3.1 min，60%A＋40%B；3.1～6.1 min，95%A＋5%B；6.1～9.0 min，5%A＋95%B。

（2）質(zhì)譜條件。離子源類型：ESI；離子源溫度：350 ℃； 霧化器流速：3.0 mL/min；干燥氣流速：10 mL/min；掃描方 式：正離子；掃描模式：MRM；質(zhì)譜參數(shù)：Q1（m/z）：407.3；Q3（m/z）：126.2（定量）/359.1；CE（V）：27/17。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，以林可霉素測得峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y=43 770.7x-16 110.8，相關(guān)系數(shù)R=0.999 7，表明線性關(guān)系良好，根據(jù)3倍信噪比計(jì)算，檢出限為1.0 μg/kg，滿足國家食品安全監(jiān)督抽檢農(nóng)產(chǎn)品中林可霉素要求檢出限 1.0 μg/kg，圖1為林可霉素1.0 μg/kg添加量質(zhì)譜圖。

圖1 林可霉素1.0 μg/kg添加量質(zhì)譜圖

2.2 方法回收率與重復(fù)性

取陰性樣品雞肉，添加檢出限、2倍檢出限、10倍檢出限3種濃度水平的林可霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，其余操作同上述供試品溶液制備，每個(gè)濃度平行測定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和重復(fù)性RSD，測得結(jié)果見表1。

表1 加標(biāo)回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3 精密度與穩(wěn)定性試驗(yàn)

選用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液5.94 ng/mL連續(xù)進(jìn)樣6次記錄峰面積，根據(jù)峰面積計(jì)算精密度，RSD為2.41%。同時(shí)24 h內(nèi)每隔4 h測定一次，并記錄峰面積，根據(jù)峰面積計(jì)算穩(wěn)定性，RSD為6.63%，表明方法穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)論

本研究建立的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞肉中林可霉素殘留的方法，林可霉素保留時(shí)間相對穩(wěn)定，線性關(guān)系、重復(fù)性、回收率、精密度及穩(wěn)定性等考察結(jié)果良好，能滿足實(shí)驗(yàn)室對雞肉中林可霉素殘留檢測的需求，為研究畜禽肉中林可霉素殘留檢測提供依據(jù)。