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        小麥中嘔吐毒素檢測方法的研究

        2021-12-13 11:07:48馬宏偉劉永智
        食品安全導(dǎo)刊 2021年27期
        關(guān)鍵詞:正確度限量限值

        馬宏偉,劉永智

        (1.鞍山市糧油質(zhì)量衛(wèi)生監(jiān)測站,遼寧鞍山 114000;2.丹東市糧食質(zhì)量監(jiān)測站,遼寧丹東 118000)

        1 嘔吐毒素的危害與最高限值

        1.1 嘔吐毒素的危害

        從化學(xué)性質(zhì)分析來看,脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON),又稱嘔吐毒素,其之所以被稱為嘔吐毒素是因?yàn)槿思捌渌麆?dòng)物在大量食用該物質(zhì)后,會(huì)引發(fā)機(jī)體嘔吐反應(yīng)。結(jié)合毒理學(xué)研究結(jié)果,發(fā)現(xiàn)嘔吐毒素具備免疫毒性、細(xì)胞毒性、神經(jīng)毒性等毒性,當(dāng)人及動(dòng)物攝入一定量的DON后,輕則出現(xiàn)嘔吐、乏力、頭暈,重則引起腹瀉、臟器損傷、免疫功能障礙等急性中毒癥狀,因此,關(guān)于嘔吐毒素的研究已成為業(yè)內(nèi)乃至社會(huì)廣泛關(guān)注的熱點(diǎn),尤其是國家食品衛(wèi)生安全監(jiān)督部門,都迫切希望能找到一種快速、高效、便捷、準(zhǔn)確度高的檢測方法,確保超標(biāo)嘔吐毒素的作物及其制品的檢出,保障人們的食品衛(wèi)生安全[1]。

        1.2 嘔吐毒素限量標(biāo)準(zhǔn)

        伴隨著相關(guān)機(jī)構(gòu)對嘔吐毒素研究工作的進(jìn)一步深入,以及人們對食品衛(wèi)生安全標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步提高,人們對小麥、大豆、玉米等作物及其制品的真菌毒素限量標(biāo)準(zhǔn)的要求較高。當(dāng)前,世界上已有37個(gè)國家與組織對小麥及其制品嘔吐毒素設(shè)定了最高限值標(biāo)準(zhǔn),例如,歐盟規(guī)定未加工硬質(zhì)小麥嘔吐毒素<1 750 μg/kg,由于我國居民膳食結(jié)構(gòu)與歐盟人不同,小麥?zhǔn)称窋z入量較大,因此,在小麥嘔吐毒素限量標(biāo)準(zhǔn)上,比歐盟等各國要求更加嚴(yán)格,《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》(GB 2761—2017)規(guī)定中國小麥嘔吐毒素限量為≤1 000 μg/kg,這一標(biāo)準(zhǔn)限值也成為中國各級政府、質(zhì)檢機(jī)構(gòu)監(jiān)管食品中真菌毒素的唯一標(biāo)準(zhǔn),更是中國小麥及其制品生產(chǎn)、倉儲(chǔ)、進(jìn)出口質(zhì)檢中對于嘔吐毒素控制的重要指標(biāo),一旦檢出小麥嘔吐毒素添加量超過此限值,可直接勒令其丟棄,并查明毒素來源,加強(qiáng)防控,從源頭上解決小麥嘔吐毒素污染超標(biāo)問題[2]。

        2 小麥中嘔吐毒素檢測方法的研究

        2.1 高效液相色譜法

        稱取小麥樣品25 g,研碎置于250 mL三角瓶中,并加入HO(CH2CH2O)nH 5 g、水100 mL,混合均勻,靜置 20 min,過濾后用免疫親和柱凈化,同時(shí)用高效液相色譜-紫外檢測器進(jìn)行測定。以此方法測定結(jié)果為認(rèn)定值,并用酶聯(lián)免疫測定法檢測,對比兩種檢測法的測定結(jié)果。

        2.2 酶聯(lián)免疫測定法

        (1)同一批試驗(yàn)樣品小麥稱取5.0 g,置于具塞三角瓶中,同時(shí)加入60%甲醇水溶液25.0 mL,緩慢振蕩20 min后,用定性濾紙進(jìn)行過濾;取過濾液1 mL,加水4 mL,搖勻待檢測。將試劑置于室溫(20~25 ℃)1 h以上,注意,此過程中每種液體試劑需在使用前搖勻,嚴(yán)格控制溫度(20~25 ℃)。

        (2)將樣本與標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔平行排放,并按序編號,同時(shí)準(zhǔn)確記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在位置,取標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50 μL到對應(yīng)的微孔中,同時(shí)陸續(xù)加入酶標(biāo)物50 μL/孔、抗試劑50 μL/孔,緩慢振蕩,并用蓋板膜覆蓋,靜置于25 ℃避光環(huán)境中反應(yīng)30 min,而后小心揭開蓋板膜,甩出孔內(nèi)液體,各孔再加入洗滌液250 μL,充分洗滌4~5次(間隔10 s/次),洗滌完成后置于吸水紙上拍干[3]。

        (3)加入底物液100 μL/孔,振蕩均勻后覆蓋蓋板膜,置于25 ℃避光環(huán)境下反應(yīng)15 min。

        (4)每孔加入終止液50 μL,輕緩振蕩、搖勻,設(shè)定酶標(biāo)儀450 nm開始檢測,得出各OD值,并進(jìn)行準(zhǔn)確記錄。

        3 結(jié)果與分析

        檢測結(jié)果顯示,酶聯(lián)免疫法正確度范圍為90.0%~ 134.6%,平均為105.7%(見表1)。

        由表1可知,作為傳統(tǒng)的小麥嘔吐毒素測定方法-酶聯(lián)免疫分析法檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度較高(105.7%)。相較于高效液相色譜法,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)快速、靈敏、準(zhǔn)確、可定量、操作簡便、無需貴重儀器設(shè)備,且對樣品純度要求低,特異性強(qiáng),特別適用于大批量樣品的檢測,發(fā)展迅速,簡化了樣品預(yù)處理和純化過程。但是由于免疫酶的活性非常不穩(wěn)定,在應(yīng)用過程中很容易受到操作條件的影響,反應(yīng)試劑需低溫保存。在實(shí)際操作過程中很難達(dá)到這一要求,使得免疫酶的活性大大降低,從而影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。應(yīng)用時(shí)還必須通過多次洗滌,才能使反應(yīng)產(chǎn)物和游離底物進(jìn)行分離,影響到結(jié)果的重復(fù)性,而且檢測時(shí)間較長,無法滿足現(xiàn)場快速檢測的要求。相信隨著相關(guān)研究工作的進(jìn)一步深入,其適用性將進(jìn)一步增強(qiáng)[4-5]。

        表1 酶聯(lián)免疫法正確度分析

        4 結(jié)論

        為滿足日益提升的糧食質(zhì)量安全快速檢測標(biāo)準(zhǔn),本文基于同一批次小麥試樣進(jìn)行高效液相色譜法與酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果的對比分析,發(fā)現(xiàn)相較于傳統(tǒng)的高效液相色譜法檢測結(jié)果,酶聯(lián)免疫法的正確度范圍在90.0%~134.6%,平均為105.7%,具備大范圍推廣應(yīng)用的特質(zhì);相信隨著研究力度的不斷加大,會(huì)有越來越多的高效、便捷、快速的檢測方法應(yīng)用于糧食嘔吐毒素檢測中,為保障糧食質(zhì)量安全檢測提供便利。

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