林曉，秦昌金，謝曉燕，王浩驊，王坤

(1.山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南250101；2.青島西海岸新區(qū)皮膚病防治站，山東 青島266400；3.棲霞市皮膚病醫(yī)院，山東 煙臺264000；4.山東新寶醫(yī)藥有限公司,山東 濟南 250131)

顆粒劑是指中藥材的提取物與適宜輔料或與部分藥材細粉混勻，制成的顆粒狀劑型[1]，具有分散性、附著性、聚集性、分離性、吸濕性等均較小[2]，易溶解、吸收和服用方便的特點。銀花感冒沖劑由金銀花、連翹、防風、桔梗和甘草5味藥組成的中藥制劑，收載于《國家衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第二冊)》，具有清熱、解毒、利咽等功效，用于治療感冒發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥，臨床應用廣泛[3]。在參考銀花感冒口服液[4]基礎上，本試驗采用水提醇沉技術，以糊糊、可溶性淀粉和乳糖為稀釋劑，試驗了銀花感冒的無糖型顆粒成型工藝，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 BSA6202S-CW型電子分析天平(德國賽多利斯)；高效液相色譜儀(日本島津 LC-15C)，SPD-20紫外檢測器，7725i型進樣閥；SinoPak C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)色譜柱；DXJHNS型酒精回收塔(湖北維華機械有限公司)；RE-52A旋轉蒸發(fā)器(杭州聚萊儀器有限公司)

1.2 試藥 金銀花(亳州市普澤藥業(yè)銷售有限公司，批號：180101)；連翹(亳州市普澤藥業(yè)銷售有限公司，批號：180101)；防風(亳州市普澤藥業(yè)銷售有限公司，批號：180102)；桔梗(亳州市普澤藥業(yè)銷售有限公司，批號：180103)；甘草(亳州市普澤藥業(yè)銷售有限公司，批號：180101)；綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201716)；銀花感冒顆粒(自制，批號：20180514-1)；陰性對照品(自制，批號：20180510-1)；乙腈為色譜純，水為重蒸水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗[5]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4%磷酸(10∶90)為流動相；檢測波長為327 nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于5 000。

2.1.2 對照品溶液 取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液 取樣品約0.6 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率50 kHz)30 min，放至室溫，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.1.4 陰性對照溶液 按處方稱取不含金銀花藥材飲片，按“2.1.3”項下方法，制得不含金銀花陰性對照溶液。

2.1.5 專屬性 分別取綠原酸對照品溶液，供試品溶液以及陰性對照溶液，按照上述色譜條件進樣測定，陰性對照在綠原酸峰處無干擾,見圖1～3。

圖1 綠原酸對照品HPLC圖

圖2 銀花感冒顆粒(無糖型)HPLC圖

圖3 不含金銀花陰性對照HPLC圖

2.1.6 線性關系 精密稱取綠原酸對照品10.48 mg，置100 mL棕色量瓶中，加50%甲醇，振搖，溶解并稀釋至刻度，作為貯備液；分別精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0 mL各置10 mL棕色量瓶中，分別用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品線性溶液，分別精密吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以峰面積值(A)為縱坐標以對照品溶液濃度(C)為橫坐標，進行線性回歸。得線性回歸方程為：A=571 967C+10 417，r=0.999 8，在10.48～62.88 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，綠原酸峰面積與濃度的線性關系良好。

2.1.7 精密度試驗 取濃度為41.92 μg·mL-1的對照品溶液，在相同的色譜條件下，重復進樣6次，結果綠原酸峰面積RSD為0.76%，精密度良好。

2.1.8 重復性 制備6份供試品溶液，在相同色譜條件下測定，結果RSD為0.50%，重復性良好。

2.1.9 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h進樣測定，結果綠原酸峰面積RSD為0.56%，供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.10 加樣回收率試驗 精密稱取綠原酸對照品10.12 mg，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇，振搖，溶解并稀釋至刻度，作為貯備液； 取同一批已知含量的銀花感冒顆粒(無糖型，批號：8023001，含量：0.94 mg·g-1)，精密取6份，照供試品項下方法處理，分別加入綠原酸對照品溶液(200.98 μg·mL-1)2.5 mL，混勻后測定，計算綠原酸回收率，平均回收率為100.26%，RSD為0.68%，回收率良好。

2.2 工藝研究

2.2.1 提取工藝研究 通過預試驗及參考相關文獻，確定用水提取法，試驗中選擇加水量、提取時間與提取次數(shù)作為考察因素，以提取液中綠原酸含量及干膏的出膏率為評價指標，用L9(34)正交表進行銀花感冒顆粒的提取試驗，提取用因素水平、正交及方差分析見表1～4。

綠原酸含量測定：取各提取液10 mL，75 ℃水浴蒸干，殘渣加50%甲醇溶解并轉移至25 mL量瓶中，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，作為對照品溶液。照“2.1”含量測定項下方法測定，即得。

干膏率：精密量取各提取液45 mL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，先在80 ℃濃縮至近干后移至烘箱中在105 ℃干燥至恒重，取出，冷卻至室溫，稱定，按下式計算：

干膏率%=干膏量/藥材量×100%

表1 成型因素水平表

表2 成型正交試驗及結果

表3 成型試驗方差分析表

表4 藥材出膏率方差分析

由表2～4分析，以綠原酸含量和干膏率分別為指標進行評價，因素B(提取次數(shù))有顯著性意義(P<0.01)，因素B3(提取3次)明顯優(yōu)于B1(提取1次)、B2(提取2次)，故選B3；因素A與C雖無顯著性意義，但考慮在實際生中綠原酸含量、生產(chǎn)成本、生產(chǎn)效率等因素，故選擇A2與C2，最終確定認為A2B3C2為最佳工藝，即藥材用8倍量水提取3次，每次1.5 h。

2.2.2 醇沉工藝研究

2.2.2.1 醇沉濃度試驗 取金銀花160 g、連翹160 g、防風160 g、桔梗160 g和甘草80 g，每份計720 g，置10 L圓底燒瓶中，加水7.2 L，加熱回流提取(8倍量水提取3次，每次1.5 h)，合并3次提取液，過濾，80 ℃濃縮至ρ=1.15～1.25)，制成清膏，平行制備4份，分別緩緩加入乙醇，攪勻，調(diào)整至不同乙醇濃度進行醇沉，在2～8 ℃條件下靜置48 h，濾取上清液，測定綠原酸含量與干膏率，結果見表5。

表5 醇沉濃度試驗結果

結果：調(diào)整乙醇濃度達70%，進行醇沉，綠原酸含量與出干膏均合適，故選擇以醇沉濃度為70%。

2.2.2.2 醇沉后靜置時間試驗 按 “2.2.2.1”項下方法制備清膏4份，分別緩緩加入乙醇，邊加邊攪勻，使乙醇濃度達70%，在2～8 ℃條件下分別靜置不同時間，濾取上清液，測定綠原酸含量與干膏率，結果見表6。

表6 醇沉后靜置時間試驗結果

結果：藥液在2～8 ℃條件下靜置48 h，分層明顯，容易過濾，故選擇靜置時間為48 h。

2.2.3 成型工藝研究 取金銀花160 g、連翹160 g、防風160 g、桔梗160 g和甘草80 g，每份計720 g，置10 L圓底燒瓶中，加水7.2 L，加熱回流提取(8倍量水提取3次，每次1.5 h)，合并提取液，濾過，濃縮(80 ℃，ρ=1.15～1.25)，制成清膏，邊加邊攪勻，使乙醇濃度達70%，在2～8 ℃條件下靜置48 h，濾取上清液，濃縮成稠膏(80 ℃，ρ=1.35～1.45)，干燥(80 ℃)，粉碎成細粉，平行制備5份，分別加入稀釋劑制軟材，以16目尼龍網(wǎng)篩制粒，75 ℃干燥，16目篩整粒，結果見表7。

表7 稀釋劑的選擇及成型工藝研究結果

結果：在成型試驗中，以可溶性淀粉、糊精和乳糖的不同比例混合物為顆粒劑賦形劑，并對各用量進行了考察，結果以處方5中賦形劑與干膏粉混合后制粒時，制粒容易，不粘網(wǎng)，顆粒成型率最佳。

2.3 中試工藝驗證 在上述優(yōu)化工藝的基礎上，進行了3批中試生產(chǎn)，每批投料400倍處方量，對3批成品率及綠原酸含量進行驗證，結果見表8。

表8 銀花感冒顆粒中試工藝驗證結果

由上述結果可知，通過銀花感冒顆粒(無糖型)3批中試驗證，顆粒的成型率與質(zhì)量均符合要求，工藝穩(wěn)定，適用于生產(chǎn)。

3 討論

3.1 綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，其分子結構中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚3個不穩(wěn)定部分，在從植物提取過程中，往往因為水解和分子內(nèi)酯基遷移而發(fā)生異構化，或氧化等作用而引起有效成分的提取率明顯下降[6]。為減少綠原酸在生產(chǎn)過程中的損失，我們選擇了干燥溫度不超過80 ℃。

3.2 綠原酸對照品溶液在自然光下穩(wěn)定性較差，易產(chǎn)生分解，因此含量測定操作中應注意閉光，選擇采用棕色量瓶[7]。在銀花感冒顆粒供試中制備選擇試驗中，對比了加熱回流與超聲各提取30 min，兩種提取方法對綠原酸含量的影響，結果超聲處理和回流提取兩種方法中綠原酸含量無明顯差別，因超聲處理更簡便，故提取方法確定為超聲提取。

3.3 可溶性淀粉是可溶顆粒的良好稀釋劑，并有矯味及黏合作用；糊精為白色或微帶黃色的細膩粉末，不溶于醇，微溶于水，能溶于沸水成黏膠狀溶液，黏性強，并呈弱酸性[8]。乳糖易溶于水，性質(zhì)穩(wěn)定，無吸濕性，與大多數(shù)藥物不起化學反應，對主藥含量測定的影響較小，是很好的稀釋劑[9]。在顆粒的成型試驗中，試驗了醇沉后上清液濃縮成稠膏，以最大密度1.45(80 ℃)時將稠膏加入賦形劑制粒，制粒較難，粘網(wǎng)，需用賦形劑較多，顆粒(無糖型)服用量較大；經(jīng)多次成型試驗選擇了將稠膏干燥，粉碎成細粉，以可溶性淀粉、糊精和乳糖為賦形劑，結果制粒的可操作性，顆粒質(zhì)量明顯優(yōu)于以稠膏制粒或以單種輔料為賦形劑制粒。

3.4 為驗證優(yōu)選的銀花感冒顆粒(無糖型)最佳生產(chǎn)工藝的可行性，我們進行了3批中試生產(chǎn)，質(zhì)量合格，銀花感冒顆粒(無糖型)生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠，適應于工業(yè)化生產(chǎn)。