李艷華(河南科技大學(xué)附屬許昌市中心醫(yī)院,河南 許昌 461000)
鐵皮石斛是蘭科石斛屬植物的干燥莖,在我國傳統(tǒng)名貴中藥材,具有滋陰清熱、益胃生津的功效[1]。近年來藥理學(xué)研究表明鐵皮石斛具有多種藥理學(xué)活性,如抗氧化、降血糖和免疫調(diào)節(jié)等,其中對心血管系統(tǒng)性疾病具有特異性得到關(guān)注和重視[2-3]。本課題組前期對鐵皮石斛提取物(Dendrobium officinale extracts,DOe)的治療高血壓活性進(jìn)行系統(tǒng)性的研究,發(fā)現(xiàn)DOe對自發(fā)性高血壓大鼠有一定療效,但同時(shí)也注意到DOe的治療高血壓的活性不是很強(qiáng),故筆者開展DOe不同極性部位對自發(fā)性高血壓大鼠療效的進(jìn)一步研究。匯報(bào)如下。
1.1 動(dòng)物及藥材 8周齡正常Wistar大鼠和SHR大鼠均購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(京)2020-0012,于屏障環(huán)境適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
鐵皮石斛購于安徽亳州滕王藥業(yè)有限公司,批號(hào)為20020141,為干燥狀態(tài)。
1.2 試劑 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇購于國藥化試。
1.3 儀器 超聲波清洗儀(KQ-500,昆山市超聲儀器有限公司);無創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓測量儀(BP-98A,日本軟融株式會(huì)社);HH-60L型恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)。
1.4 DOe不同極性部位的制備 取鐵皮石斛干燥莖,粉碎過40目篩備用。稱取10.0kg鐵皮石斛干燥莖,純化水作為提取溶劑(料液比1∶20),浸提24h后,加熱回流提取1h,真空抽濾后濾渣重復(fù)上操作2次,最后合并濾液,得到鐵皮石斛水提液;對鐵皮石斛水提液采用不同極性溶劑進(jìn)行依次萃取,依次為:石油醚、乙酸乙酯、正丁醇。減壓濃縮干燥后分別得到DOe不同極性部位粉末或浸膏,石油醚極性部位10.7g(得率為0.107%),乙酸乙酯極性部位90.6g(得率為0.906%),正丁醇極性部位140.5g(得率為1.405%);剩余的水液減壓濃縮干燥,得到水層極性部位320.9g(得率為3.209%)。
1.5 樣品溶液的制備 實(shí)驗(yàn)臨用前用純化水將DOe不同極性部位粉末或浸膏超聲混懸后,稀釋至所需的濃度,使用前需充分搖勻。
1.6 動(dòng)物試驗(yàn) 隨機(jī)將40只自發(fā)性高血壓大鼠分成五組,分DOe不同極性部位組和模型組,雌雄各半;8只正常Wistar大鼠為對照組,雌雄各半。模型組和對照組給予等量飲水,DOe不同極性部位組給藥劑量以生藥量計(jì)均為3.0g/kg,各組均等容量經(jīng)口給藥。實(shí)驗(yàn)療程為8周。
1.7 觀察指標(biāo) 治療前及治療后每周監(jiān)測一次給藥2h后的血壓,主要觀察指標(biāo)有:體質(zhì)量、收縮壓和舒張壓。
1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。組間計(jì)量數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 DOe不同極性部位對大鼠體重的影響 治療前模型組及DOe不同極性部位組體重?zé)o明顯差異(P>0.05),說明具有可比性;各組治療前后體重均無明顯差異(P>0.05),說明治療方式對大鼠的體重沒有明顯的影響;正常組大鼠的體重均明顯大于模型組及DOe不同極性部位組(P<0.05),這與由于所用大鼠品系不同所致。如表1所示。
表1 DOe不同極性部位對大鼠體重的影響(±s,n=8)
表1 DOe不同極性部位對大鼠體重的影響(±s,n=8)
注:與正常組相比較,*P<0.05。
組別 治療前體重/g 終末體重/g正常組 251.6±38.7 310.4±42.1模型組 192.7±25.8* 220.7±31.7*DOe不同極性部位組石油醚極性部位 185.4±30.7* 227.9±41.7*乙酸乙酯極性部位 190.8±26.7* 225.8±45.2*正丁醇極性部位 187.4±31.2* 234.3±54.7*水極性部位 182.8±28.4* 238.7±46.8*
2.2 DOe不同極性部位對大鼠血壓的影響 治療前的模型組和DOe不同極性部位組的血壓數(shù)值(收縮壓和舒張壓)不存在明顯差異(P>0.05),但均明顯高于正常組大鼠(P<0.05);收縮壓指標(biāo)比較:與本組治療前相比較,治療后僅DOe乙酸乙酯極性部位組和正丁醇極性部位組,治療后1周、4周和8周均有明顯下降(P<0.05),且與同期模型組相比有顯著性差異(P<0.05),同時(shí)也注意到DOe乙酸乙酯極性部位下降幅度明顯大于同期的DOe正丁醇極性部位組(P<0.05)。舒張壓指標(biāo)比較:與本組治療前相比較,治療后僅DOe乙酸乙酯極性部位組(治療后1周、4周、8周)和正丁醇極性部位組(治療后4周、8周)均有明顯下降(P<0.05);與同期模型組相比較,僅DOe乙酸乙酯極性部位組(治療后1周、4周、8周)和正丁醇極性部位組(治療后4周、8周)均有明顯下降(P<0.05);同時(shí)也注意到DOe乙酸乙酯極性部位在8周時(shí)下降幅度明顯大于同期的DOe正丁醇極性部位組(P<0.05)。如表2、表3所示。
表2 DOe不同極性部位對大鼠收縮壓的影響(±s,n=8)
表2 DOe不同極性部位對大鼠收縮壓的影響(±s,n=8)
注:與本組治療前相比,aP<0.05;與同期正常組相比較,bP<0.05;與同期模型組相比較,cP<0.05;與同期乙酸乙酯極性部位組相比,dP<0.05。
組別 治療前/mmHg 治療1周/mmHg 治療4周/mmHg 治療8周/mmHg正常組 140.2±3.7 138.7±2.7 136.9±4.2 142.7±3.9模型組 211.2±7.9b 213.3±6.8b 215.9±9.7b 220.7±8.3ab DOe不同極性部位組石油醚極性部位 210.4±6.4b 211.7±7.7bd 209.8±12.7bd 214.6±9.8bd乙酸乙酯極性部位 205.7±7.7b 180.4±8.7abc 175.4±9.3abc 170.1±9.5abc正丁醇極性部位 209.7±6.3b 190.6±9.1abcd 184.3±6.7abcd 180.6±11.2abcd水極性部位 208.5±7.4b 209.7±6.6bd 210.8±10.1bd 215.7±8.7bd
表3 DOe不同極性部位對大鼠舒張壓的影響(±s,n=8)
表3 DOe不同極性部位對大鼠舒張壓的影響(±s,n=8)
注:與本組治療前相比,aP<0.05;與同期正常組相比較,bP<0.05;與同期模型組相比較,cP<0.05;與同期乙酸乙酯極性部位組相比,dP<0.05。
組別 治療前/mmHg 治療1周/mmHg 治療4周/mmHg 治療8周/mmHg正常組 104.3±3.2 105.7±2.9 106.4±4.1 107.7±4.7模型組 155.2±7.8b 156.3±6.7b 157.9±9.4b 158.7±8.8b DOe不同極性部位組石油醚極性部位 156.4±6.9b 157.7±7.8bd 159.8±10.7bd 158.6±8.1bd乙酸乙酯極性部位 155.7±7.8b 150.4±6.3abc 145.6±9.8abc 140.9±7.8abc正丁醇極性部位 157.7±6.8b 152.6±9.4b 148.7±6.3abc 145.3±6.1abcd水極性部位 158.5±7.9b 156.7±6.8bd 157.8±9.5bd 159.7±9.0bd
鐵皮石斛在我國有較廣泛的分布,作為一種名貴中藥材,有悠久的用藥歷史,臨床上多用于陰液不足和改善氣陰兩虛的治療,中醫(yī)認(rèn)為高血壓是陰虛陽亢的熱性疾病,從機(jī)理分析有對因治療的作用。鐵皮石斛化學(xué)成分較為復(fù)雜,主要有生物堿、多糖、茋類、氨基酸等[4-7]。
本課題組前期對DOe抗高血壓活性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)有一定活性,但用量較高;筆者對DOe通過萃取得到不同極性部位,發(fā)現(xiàn)DOe乙酸乙酯部位活性最高,在生藥量計(jì)3.0g/kg就有明顯的生物活性,此時(shí)以萃取物的用量計(jì)約30mg/kg。但DOe乙酸乙酯部位其中化學(xué)成分也較為復(fù)雜,有些化合物可能并不具有抗高血壓活性。這些都十分值得進(jìn)一步的深入研究,這也是本課題組下一步的主要研究方向。
綜上所述,DOe乙酸乙酯部位對自發(fā)性高血壓大鼠有較高的抗高血壓活性,其中可能相應(yīng)機(jī)制需進(jìn)一步的研究。