楊曉艷 董國玲 劉愛敏

宮頸癌是由正常宮頸黏膜組織經(jīng)歷宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)而逐步演變而來的疾病，該過程受抑癌基因抑制和癌基因激活的共同作用，當(dāng)抑癌基因和癌基因間失衡時(shí)，導(dǎo)致細(xì)胞無控性增殖及細(xì)胞凋亡受抑制[1-3]。細(xì)胞分化抑制因子(ID-1)與多種惡性腫瘤如乳腺癌、胃癌、卵巢癌的細(xì)胞分化有關(guān)[4]。有研究報(bào)道[5-6]ID-1通過激活Ki-67途徑誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，從而對(duì)細(xì)胞分化起到負(fù)性調(diào)控作用，阻滯腫瘤細(xì)胞凋亡進(jìn)程，誘使惡性腫瘤進(jìn)展。但關(guān)于ID-1與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系目前相關(guān)報(bào)道較少。本研究利用免疫組織化學(xué)方法對(duì)比分析宮頸癌組織標(biāo)本、宮頸上皮瘤變(CIN)組織標(biāo)本及正常宮頸組織標(biāo)本中ID-1蛋白、ILK蛋白的表達(dá)，分析宮頸癌不同病理表現(xiàn)與ID-1蛋白、ILK蛋白表達(dá)的關(guān)系，旨在確定上述指標(biāo)在宮頸癌診斷和預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年7月至2020年6月的84例宮頸癌組織標(biāo)本(宮頸癌組)、同期獲取的宮頸上皮瘤變(CIN)組織標(biāo)本40例(CIN組)、正常宮頸組織標(biāo)本40例(對(duì)照組)。

宮頸癌組，年齡41～65歲，平均(54.1±8.2)歲；國際婦產(chǎn)聯(lián)盟分期(FIGO)：Ⅰ期17例、Ⅱ期32例、Ⅲ期26例、Ⅳ期9例；腫瘤分化程度：高∶中∶低為22∶35∶27；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性46例；肌層浸潤深度≥1/2 35例、<1/2深度 49例；腫瘤病灶：≥3.0 cm 41例、<3.0 cm 43例。CIN組，年齡37～62歲，平均(50.3±8.0)歲；CIN分級(jí)：Ⅰ級(jí)11例、Ⅱ級(jí)19例、Ⅲ級(jí)10例。對(duì)照組，年齡40～65歲，平均(51.4±8.7)歲。3組的年齡比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

診斷及入選標(biāo)準(zhǔn)：①所有標(biāo)本已被病理學(xué)檢查所證實(shí)；②均為首次診斷，既往無放化療病史；③本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)相關(guān)規(guī)定。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類型或部位的癌癥；②手術(shù)后復(fù)發(fā)的宮頸癌患者；③未經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。

1.2 免疫組化檢測

將3組組織樣本進(jìn)行修正處理，隨后經(jīng)石蠟包埋制備為標(biāo)本，通過4%多聚甲醛溶液進(jìn)行固定，總時(shí)長為3 d，取出后進(jìn)行4 μm切片。制備載玻片并滴入5%多聚賴氨酸，隨后染色，待樣本出現(xiàn)棕黃色后停止，移至顯微鏡下，設(shè)置為400倍視野觀察樣本總細(xì)胞及陽性細(xì)胞數(shù)。

ID-1、ILK蛋白陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，陽性表達(dá)均顯色為黃色、棕黃色、褐色。①根據(jù)免疫組化染色的深度：無色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、褐色、黑色(3分)；②根據(jù)免疫組化染色的細(xì)胞占比情況進(jìn)行評(píng)分：比例≤10%為1分、所占比例范圍>10%～50%為2分、所占比范圍>50%～75%為3分、所占比范圍>75%為4分。兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組、CIN組和對(duì)照組的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達(dá)率比較

宮頸癌組織中的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達(dá)率分別為64.29%、70.24%均顯著高于CIN組(27.50%、35.00%)和對(duì)照組(12.50%、20.00%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CIN組和對(duì)照組的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1 宮頸癌組、CIN組和對(duì)照組的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達(dá)率比較(例，%)

2.2 宮頸癌組織中ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達(dá)率與病理學(xué)特征的關(guān)系

宮頸癌組織中的ID-1蛋白陽性表達(dá)率在不同F(xiàn)IGO分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同肌層浸潤深度組織中比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；宮頸癌組織中的ILK蛋白陽性表達(dá)率在不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同肌層浸潤深度組織中比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 宮頸癌組織中ID-1蛋白陽性表達(dá)率與病理學(xué)特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

宮頸癌是一種侵襲力較強(qiáng)，常伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且預(yù)后效果差的女性高發(fā)腫瘤疾病。據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)[7]大陸地區(qū)女性宮頸癌術(shù)后5年生存率不足30%，嚴(yán)重威脅婦女的生命安全。根治切除術(shù)是本病目前最有效的干預(yù)手段，但目前臨床上僅僅依靠婦科腫瘤指標(biāo)對(duì)手術(shù)指征的指導(dǎo)和手術(shù)預(yù)后評(píng)估效果檢查，臨床上尚需要更具特異性的腫瘤標(biāo)志物。

整合素連接激酶(ILK)是一種在多種生物中廣泛存在的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，ILK內(nèi)含3個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)域[8]。有研究報(bào)道[9]ILK與細(xì)胞分裂、增殖和上皮性間質(zhì)細(xì)胞間的轉(zhuǎn)移和信息傳導(dǎo)有關(guān)。有研究報(bào)道[10]ILK在惡性腫瘤如乳腺癌、肺小細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌等組織中異常高表達(dá)，且表達(dá)水平與惡性腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、肌層浸潤程度等密切相關(guān)。有學(xué)者解釋ILK參與細(xì)胞增殖分化及細(xì)胞間信息傳遞的分子學(xué)機(jī)制，主要表現(xiàn)如下：ILK通過與整合素β亞單位結(jié)合，異常激活下游與細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活性相關(guān)的PI3K/PKB/AKT信號(hào)通路，進(jìn)而介導(dǎo)細(xì)胞間信號(hào)傳遞因子，連接蛋白的表達(dá)，破壞細(xì)胞間的連接狀態(tài)、促進(jìn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，有利于細(xì)胞向間質(zhì)部位的侵襲[11]。故相關(guān)學(xué)者表示[12]ILK水平尤其在上皮性惡性腫瘤組織中高表達(dá)。有研究報(bào)道[13]ILK通過激活PI3K通路，并增強(qiáng)上皮細(xì)胞內(nèi)波形蛋白的表達(dá)，損傷上皮細(xì)胞間連接狀態(tài)，降低抑制上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的E-cadherin蛋白的表達(dá)。但I(xiàn)LK作用宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變的具體機(jī)制，臨床研究較少。僅有部分學(xué)者發(fā)現(xiàn)[14]ILK在宮頸癌組織中異常高表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)較CIN和正常宮頸黏膜組織，宮頸癌組織中ILK水平顯著升高，與既往研究報(bào)道一致[15]。本研究還發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中的ILK蛋白陽性表達(dá)率在不同組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、肌層浸潤深度程度比較，差異顯著(P<0.05)。既往研究報(bào)道僅發(fā)現(xiàn)ILK在肺癌組織中不同病理組織學(xué)分型中的差異(肺小細(xì)胞癌組織中ILK異常表達(dá)高于其它亞型肺部組織如腺癌)而IL較少研究發(fā)現(xiàn)ILK與宮頸癌亞型的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)ILK與宮頸癌亞型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性是本文的創(chuàng)新性。提示，ILK廣泛參與宮頸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和侵襲過程，可作為預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)。

有研究報(bào)道[16]惡性腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和侵襲不僅與上皮細(xì)胞間的信息傳遞改變導(dǎo)致的細(xì)胞間聯(lián)系降低有關(guān)，還與抑癌基因和癌基因的表達(dá)失調(diào)、腫瘤細(xì)胞新生微血管的形成有關(guān)。ID-1位于人類染色體22q11，由155個(gè)氨基酸殘基組成，包括2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)顯子，在激活癌基因異常表達(dá)，抑制抑癌基因表達(dá)方面具有重要作用，其作為細(xì)胞分化的負(fù)性調(diào)控因子已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)其在多種惡性腫瘤如乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌組織中的異常高表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡、老化，并提高瘤體血管新生及轉(zhuǎn)移能力。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織的ID-1陽性率遠(yuǎn)高于健康宮頸黏膜和CIN病變組織。說明，ID-1高表達(dá)或可能是正常宮頸上皮向?qū)m頸上皮內(nèi)瘤變，及宮頸癌轉(zhuǎn)變進(jìn)程的促進(jìn)因子，該指標(biāo)或可用于宮頸癌變?cè)缙陬A(yù)測工作中，這與既往研究報(bào)道一致[17-19]。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，ID-1在宮頸癌組織的表達(dá)水平與組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肌層浸潤深度有關(guān)。再次確定ID-1高表達(dá)在宮頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和浸潤的重要作用，可能是通過誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤微血管形成，及上調(diào)腫瘤血管內(nèi)皮因子及其受體，從而促進(jìn)微血管新生，最終為宮頸癌的浸潤和轉(zhuǎn)移提供條件。

綜上所述，ID-1蛋白、ILK蛋白在宮頸癌組織中呈典型的高表達(dá)，可能與促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究創(chuàng)新處，明確ID-1、ILK在宮頸癌診斷中的價(jià)值，且確定其與宮頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和浸潤的相關(guān)性，為臨床宮頸癌的診斷和預(yù)后評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)，有利于治療方案的選擇，具有重要的臨床意義。