杜飛嫦，洪文旭，吳 凡 綜述，劉宜仲△審校

1.廣東省深圳市寶安區(qū)中心血站檢驗科，廣東深圳 518100；2.廣東省深圳市血液中心輸血醫(yī)學(xué)研究所，廣東深圳 518001

紅細胞稀有血型抗體可引起急性或遲發(fā)性輸血反應(yīng)，當(dāng)患者產(chǎn)生此類抗體時如不能及時得到相應(yīng)抗原陰性的血液，將危及生命健康。當(dāng)臨床上患者危急需要輸注人類白細胞抗原(HLA)、血小板特異性抗原(HPA)配型相合的血小板時，無法及時找到血源庫存或供者，可能會耽誤臨床輸血和治療，甚至造成血液輸注無效或者患者死亡等嚴重后果。血小板輸注無效(PTR)的臨床標準是指患者兩次連續(xù)輸注足量隨機ABO同型血小板或者在兩周內(nèi)3次輸用血小板都沒有達到預(yù)期治療效果。我國目前是在ABO血型相合的前提下隨機輸注血小板，即所謂的“盲輸”，多次“盲輸”會使患者產(chǎn)生血小板抗體從而導(dǎo)致PTR。在這種情況下，只能在每次輸血前對該患者進行交叉配合試驗來選擇相合的血小板進行輸注，這不僅極大地增加了患者的負擔(dān)，同時仍無法徹底避免免疫性血小板輸血反應(yīng)的發(fā)生。隨著醫(yī)療水平的提升，臨床對稀有血型和血小板HLA和HPA配型的需求顯著增加，越來越多血站及臨床輸血機構(gòu)也開始關(guān)注和建立稀有血型庫和血小板供者資料庫。本文就稀有血型庫和血小板供者資料庫的概念、意義、檢測鑒定技術(shù)進展及國內(nèi)外建庫現(xiàn)狀進行綜述，以便提高認識。

1 概念及意義

稀有血型是人體紅細胞缺少常見的血型抗原、檢出抗原的頻率比較低或其配合性血液的獲得非常困難的血型的總稱，常在血型抗原檢測中被發(fā)現(xiàn)或常見于不規(guī)則抗體陽性的被檢測者[1-2]。常見的稀有血型系統(tǒng)包括Rh、MNS、Lewis、Diego、P、Kell、Kidd和Duffy系統(tǒng)，Rh系統(tǒng)抗原最常見。能引起輸血不良反應(yīng)的Rh抗原主要有5個(C、c、D、E、e)，其中免疫原性最強的是D抗原，臨床上將具有D抗原的血型稱為Rh陽性，不帶D抗原者稱為Rh陰性，在我國Rh陰性血型者不足1%，在漢族中僅占0.2%～0.5%，是最常見的稀有血型血液[3-5]。不規(guī)則抗體是指抗-A、抗-B、抗-AB以外的紅細胞血型抗體，多數(shù)為IgG免疫性抗體。如針對稀有Rh、MNS、P、Kidd、Kell、Duffy血型系統(tǒng)等產(chǎn)生的抗體，其中針對Rh系統(tǒng)的抗體占了70%以上，雖然抗-D的免疫原性要強于抗-E，但是抗-E、抗-c的產(chǎn)生頻率要遠遠高于抗-D。中國漢族人群中較常見的Rh不規(guī)則抗體是抗-E(52.12%)，東方人Rh血型系統(tǒng)中Ce基因型占72%[6]。稀有血型患者常因血型抗原陰性經(jīng)輸血或妊娠會產(chǎn)生不規(guī)則抗體，所以在血型抗原檢測或不規(guī)則抗體檢測陽性時可發(fā)現(xiàn)稀有血型血液。當(dāng)稀有血型患者需緊急輸血時常因無法及時找到血型相匹配的血液而耽誤臨床輸血及治療，最常見的稀有血型引起的輸血不良反應(yīng)即由Rh血型抗體導(dǎo)致，Rh血型同種抗體是造成疑難配血的主要原因[7]，是臨床最常檢測的不規(guī)則抗體。

目前，全國大部分血站開展了Rh血型系統(tǒng)的鑒定，對其他常見稀有血型系統(tǒng)鑒定的開展各有不同，而對罕見的稀有血型系統(tǒng)極少血站有開展。稀有血型庫是把稀有血型獻血者或患者的基本信息、血型信息或其血液保存起來，在有緊急需求時，可迅速定向找到血型相匹配的血液或招募到合適的獻血者實行獻血救助。如2020年5月22日深圳1例患者發(fā)生反復(fù)上消化道出血需手術(shù)治療，但因曾多次輸血產(chǎn)生了抗-Fya、抗-E和抗-c，若需要繼續(xù)用血，在中國漢族人群中找到這3個抗原均為陰性的獻血者的概率僅為1/1 000，在這種病情緊急同時患者屬于稀有血型的情況下，啟動深圳市血液中心稀有血型庫，從中成功檢索出與之相符合的、僅有的兩袋冰凍紅細胞，關(guān)鍵時刻及時有效地保障臨床用血[8]。從而也驗證了稀有血型庫篩選及建立可在關(guān)鍵時刻解決臨床稀有血型輸注困難的問題，為突發(fā)公共事件下血液應(yīng)急提供保障，提高了醫(yī)療診治水平，保障了臨床用血安全。

人類血小板抗原是血小板表面的膜蛋白質(zhì)及糖分子，包括HLA、HPA和CD36抗原等，臨床患者多次輸注血小板可被免疫產(chǎn)生血小板同種抗體，導(dǎo)致PTR的發(fā)生，嚴重影響臨床治療效果，同時也造成寶貴的血小板資源浪費[9-11]。血小板HLA和HPA配合性輸注或相應(yīng)抗原陰性的配合血小板輸注可有效避免PTR的發(fā)生，同時可明顯改善臨床已出現(xiàn)PTR患者的療效。缺少CD36抗原的患者在輸入CD36抗原表達正常的血液成分后，機體默認有外來抗原的入侵，免疫產(chǎn)生抗體，也會引起PTR[12]，所以也要重視CD36的檢測。建立血小板供者資料庫，可為血小板配合性輸注提供基礎(chǔ)，減少或避免PTR的發(fā)生，提高血小板輸注療效，同時可節(jié)約血小板資源，保障臨床用血安全[13-14]。

2 檢測技術(shù)

稀有血型鑒定的傳統(tǒng)檢測方法是血清學(xué)技術(shù)，包括抗球蛋白試驗、酶處理法、聚凝胺法、微柱凝膠法和改良的微量法，抗球蛋白試驗與聚凝胺法操作簡單、成本低，非常適用于基層血液機構(gòu)的推廣；微柱凝膠法雖成本較高但便捷且可自動化又有較高的靈敏度和特異度，是推薦的臨床血型鑒定技術(shù)；微量法的靈敏度很高，成本比較低，也可廣泛應(yīng)用于基層醫(yī)療單位[15-16]。目前由于很多稀有血型抗體試劑沒有商業(yè)化，限制了血清學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，隨著基因組學(xué)的發(fā)展，多種基因分型技術(shù)得以開發(fā)，包括多重聚合酶鏈式反應(yīng)(MPCR)技術(shù)、序列特異性引物-聚合酶鏈式反應(yīng)(SSP-PCR)技術(shù)、降落式聚合酶鏈式反應(yīng)(TD PCR)、二代測序(NGS)技術(shù)和基因芯片技術(shù)等。此外還有針對稀有血型系統(tǒng)特有性質(zhì)的檢測方法，如Kidd血型系統(tǒng)Jk(a-b-)血型的紅細胞在2 mol/L的尿素溶液中可保持其細胞膜在6 h以上的完整性，因此可用尿素溶血試驗對Jk(a-b-)表型進行篩選[17]。

HLA、HPA檢測最初采用血清學(xué)和細胞學(xué)方法，包括微量淋巴細胞毒性試驗檢測HLA-A、B、C、D抗原等和ELISA法檢測HPA，但由于HLA等位基因序列高度同源，血清學(xué)檢測會出現(xiàn)交叉反應(yīng)，限制特異性高的抗體的獲得，影響分型結(jié)果準確性，現(xiàn)已不再作為常規(guī)方法；細胞學(xué)方法操作復(fù)雜、來源困難，使得HLA、HPA細胞學(xué)方法檢測受限。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，已從DNA水平建立了HLA、HPA分型檢測技術(shù)，包括SSP-PCR、序列特異性寡核苷酸探針PCR技術(shù)(SSOP-PCR)、單核苷酸多態(tài)性PCR技術(shù)(SNP-PCR)、限制性片段長度多態(tài)性PCR技術(shù)(RFLP-PCR)、直接測序分型(SBT)、核酸反向雜交熒光磁珠流式分型技術(shù)(Luminex SSO)和基因芯片等[18]，其中以SSOP-PCR、SSP-PCR和Luminex SSO技術(shù)應(yīng)用最為常見。國內(nèi)許多研究采用SSOP-PCR和SSP-PCR方法對單采血小板供者血液標本進行HLA-A、B和 HPA-1～17系統(tǒng)基因分型[19-22]。CD36抗體通用的檢測方法包括血小板抗原單克隆抗體特異性免疫固定檢測(MAIPA)、ELISA、流式細胞術(shù)及基因芯片等，其中MAIPA廣泛應(yīng)用于CD36抗體檢測，是CD36抗體檢測的“金標準”[11]；流式細胞術(shù)耗血少、速度快、操作簡單、可檢測單個細胞、可標準化，常用于臨床檢測；抗原捕獲ELISA檢測方便、快捷，但價格較高[23-24]。

3 建立現(xiàn)狀

1959年，美國血庫協(xié)會(AABB)最先進行稀有血型獻血者信息檔案的記錄，國際輸血協(xié)會稀有血型委員會成立于1985年，該委員會于1998年與美國紅十字會稀有血型登記處合并為美國稀有血型庫。1965年法國開始成立稀有血型獻血者的檢索系統(tǒng)，英國建立國際稀有血型供者庫(IDP)[25]。我國2008年開展稀有血型檢測項目，從2009年開始各省級血液中心在血液檢測中增加了稀有血型篩查項目及稀有血型獻血者血型資料的保存。2011年1月，中國擁有的稀有血型專業(yè)網(wǎng)站可進行信息共享、在線咨詢、論壇交流和技術(shù)推廣[2]，目前已參加的血液中心共有13個，已篩查獻血者超過160萬人次，同時越來越多的稀有血型逐漸被發(fā)現(xiàn)，庫存容量正在逐漸增加。但國內(nèi)大部分血站的稀有血型庫僅局限于RhD陰性的血液，僅有幾家大型血液機構(gòu)開展了較多種類項目，例如北京、大連和南京等多個地區(qū)血液中心在檢測RhD血型的同時增加了Duffy血型的檢測，個別血站有開展MNS、Lewis、Kidd、P和Diego等血型系統(tǒng)的檢測[26-29]。

目前，許多國家已建立了HLA和HPA基因型的血小板供者資料庫，加拿大和美國血液中心可以提供上萬人的血小板供者資料庫[18]，為臨床血小板配合型輸注提供了保障。國內(nèi)最新研究顯示，調(diào)查的24個血站均有HLA-A、-B位點檢測，有18個建立了血小板供者HLA和HPA基因型資料庫，但每個血站對HPA的檢測范圍各有不同，有的血站只檢測HPA 1-17w系統(tǒng)，有的血站檢測HPA 1-6、15、21w系統(tǒng)，有的血站檢測HPA 1-21w系統(tǒng)或HPA 1-29w系統(tǒng)；還有部分血站開展了CD36抗原陰性檢測、HPA抗體檢測或CD36抗體的檢測[30]。

4 展 望

歐美等國家建立發(fā)展稀有血型庫和血小板供者資料庫已有幾十年，檢測、建庫和運用方面積累了豐富經(jīng)驗，技術(shù)相對比較成熟。國際輸血協(xié)會總結(jié)提出[15]，各國的獻血招募方式各有特點、語言不同存在溝通障礙、資源信息共享不足及稀有血源的環(huán)境保障和全球互助存在不平衡影響了全球的輸血合作，協(xié)會呼吁各國需更緊密合作，建立稀有血型資料信息共享平臺。我國稀有血型庫和血小板供者資料庫的建立起步相對較晚，在數(shù)量和技術(shù)上仍有待發(fā)展，特別是除了RhD外其他稀有血型的項目開展較少，HPA和CD36的檢測還未在國內(nèi)血站普及，我國的稀有血型庫和血小板供者資料庫數(shù)量有待擴充，技術(shù)有待提高。因此，全球的稀有血型庫和血小板供者資料庫需要迎接更高的挑戰(zhàn)，加強國際間合作，互助共享，為全球的臨床用血提供咨詢、查詢和供血服務(wù)，從而防止輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，以確保稀有血型和相匹配性血小板的供應(yīng)和輸血安全。醫(yī)務(wù)人員乃至整個社會也需加深對稀有血型庫和血小板供者資料庫的了解，支持稀有血型庫和血小板供者資料庫的建設(shè)，避免因稀有血型檢測導(dǎo)致用血不當(dāng)或關(guān)鍵時刻缺少同型血液、相匹配性血小板給患者帶來難以挽回的傷害情況發(fā)生。