趙俠

廣東省工人醫(yī)院外科 廣東廣州 510000

CRC 是最常見的一種癌癥，2018 年報告了880,792例與CRC 相關的死亡[1]。CRC 的患病率在女性中為9.2%，在男性中為10%，是女性中第二大最常見的癌癥類型，并且是男性中第三大最常見的癌癥類型[2]。此外，在晚期被診斷為CRC 的患者的5 年相對生存率僅為14%[3]。在約90%的病例中，CRC 是散發(fā)性的[4]，患者沒有任何該疾病的家族史。CRC 的風險因素包括年齡（年齡大于50 歲的個體較高），炎性腸病的家族病史（CRC 的危險性為3.7%）和克羅恩氏?。–RC 的危險性為2.5%）。生活方式可能會增加患結直腸癌的風險，例如抽煙、食肉和低水平的體育鍛煉[5]。大量的研究表明，各種基因的突變，DNA 甲基化的改變和染色體的不穩(wěn)定性已被確定為CRC 的遺傳原因。癌細胞基因表達譜的分析在癌癥患者的診斷和治療中起著重要作用，并且可能導致對與特定類型的癌癥相關的失調機制的見解得到改善。尋找CRC 的分子標志物和更多高特異度的相關基因，有助于更好地為CRC 的臨床診斷和治療提供依據(jù)。HOX 基因參與不同細胞過程的調節(jié)，包括分化，血管生成，信號傳導，細胞凋亡，遷移和轉移。HOXA6 是HOX 家族的成員之一，編碼調節(jié)基因表達和細胞分化的轉錄因子。HOXA6 已被確定在細胞增殖，分化和侵襲中起重要作用。據(jù)報道，HOXA6 可能在多種癌癥類型中發(fā)揮作用，包括急性髓性白血病和神經膠質瘤[6]。然而，HOXA6 在這些癌癥類型中的作用并不一致，觀察到HOXA6 在腫瘤組織中過表達，并促進了癌癥的進展。SOX 家族由20 多個成員組成，這些成員介導HMG（high-mobility group）域與DNA 的結合，并在發(fā)育，細胞命運決定和分化中具有調節(jié)功能。SOX 基因家族表達蛋白的異常同多種類型腫瘤的發(fā)生存在密切的相關性。近年來的研究表明，許多SOX9 在胃腸道腫瘤中有異常表達的現(xiàn)象，能調控細胞生長、凋亡、分化以及腫瘤細胞浸潤、轉移，推測SOX9 基因的異常表達與胃腸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定關系[7]。本研究通過免疫組化法檢測結直腸癌組織中SOX9、HOXA6 的表達情況探討兩者在結腸癌的發(fā)生發(fā)展中的相關性，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2019 年9 月～2020 年9 月在我院臨床診斷及治療結直腸癌患者的粘膜組織130 份作為腫瘤組，選取同一時期的正常結直腸黏膜組織的患者50 例作為對照組?；颊叩闹形荒挲g為54 歲（范圍30～79 歲），男75 例，女55 例。標本是手術后從患有CRC 的患者中獲取組織，并立即保存在液氮中，然后經病理科HE 染色后分成高、中、低分化結直腸腺癌術后組織標本，病理分級中高分化52 例（40.00%），中分化45 例（34.62%），低分化33 例（25.38%）。TNM 分期依照UICC/AJCC 結直腸癌分期（第七版）。人結直腸癌及正常組織均由病理學專家鑒定后收集于本院胃腸外科，相關試驗和標本采集也均獲得醫(yī)院倫理委員會批準以及研究對象本人同意。

1.2 方法

1.1.1 主要試劑和儀器

兔抗人SOX9 多克隆抗體（美國Abcam 公司），兔抗人HOXA6 單克隆抗體（美國Immunoway 公司）；DMD108 光學顯微鏡（日本Olympus 公司）；ZT-12H生物組織自動脫水機（德國Leitz）免疫組化Envision法試劑盒（北京中杉金橋生物技術公司），操作方法與說明書相同。

1.2.2 評價方法

采用免疫組化染色法，操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。組織標本用10%甲醛溶液進行固定，常規(guī)脫水后進行石蠟塊切片，厚度3～5μm。之后選擇連續(xù)切片進行脫蠟，蘇木精-伊紅（H&E）染色，通過文獻中報道的方法對切片中SOX9 和HOXA6 表達譜進行免疫組織化學染色評估，同時評價其蛋白質的表達水平[8]。病理科醫(yī)師在光學顯微鏡下隨機觀察3～5 個視野，要求每個視野至少計數(shù)100 個完整的腫瘤細胞，按照免疫反應積分法的規(guī)則對染色進行評分。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS21.0 軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（) 表示,行t 檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)率n(%)描述,χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組SOX9 和HOXA6 蛋白表達陽性 見表1

表1 兩組患者組織中SOX9 和HOXA6 蛋白表達陽性率的比較[n（%）]

2.2 腫瘤組中SOX9 和HOXA6 蛋白表達與臨床病理的關系 見表2

表2 腫瘤組中SOX9 和HOXA6 蛋白表達與臨床病理的關系（n，%）

2.3 腫瘤組中SOX9 與HOXA6 表達的相關性 見表3

表3 腫瘤組中SOX9 與HOXA6 表達的相關性

3 討論

Sry 相關HMG-box 轉錄因子家族（SOX9）的成員是一種轉錄因子，屬于High Mobility Group（HMG）域轉錄因子的超家族。SOX9 在多種組織中表達，包括在腸上皮中表達，現(xiàn)在被認為是體內穩(wěn)態(tài)的重要角色[9]。此外，最近已將高水平的SOX9 與II 期結直腸癌的良好預后相關。但是，越來越多的證據(jù)表明，解密SOX9 在腸道中的功能必須考慮到SOX9 的劑量依賴性作用。鑒于反復出現(xiàn)的爭議以及關于SOX9 在腸上皮中表現(xiàn)為抑癌藥還是致癌物的最新技術水平，現(xiàn)在提供有關腸內SOX9 生物學功能的累積知識的更新信息以及SOX9 在結直腸癌中的表達情況。本研究結果表明SOX9 在結直腸癌組織中的表達遠情況高于正常結直腸黏膜，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。除此之外，SOX9 在結直腸癌組織中的高表達與結直腸癌患者的腫瘤直徑、TNM 分期、淋巴結轉移情況以及腫瘤分化程度有關，與年齡、性別無關。說明SOX9 不僅參與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展，還有可能參與到其轉移過程中。因此，對SOX9 的表達與和結直腸癌關系的研究可以進一步了解結直腸癌發(fā)生、發(fā)展及轉移過程中SOX9等影響因素的誘導機制，為結直腸癌的預防和治療提供新的解決方法。

同源盒（HOX）家族包括一系列發(fā)育基因。編碼的同源結構域蛋白是重要的轉錄因子，可作為單體或多聚體與特定的DNA 序列結合，以調節(jié)細胞的分化，增殖和凋亡。目前，已鑒定出39 種人類HOX 基因，將其分為四個簇：A，B，C 和D。先前的研究報道HOX 家族基因參與人類惡性腫瘤的發(fā)展并與預后相關[10]。HOXA6 是HOX 家族的成員，與分化的DNA 結合進行編碼來調節(jié)基因的表達。先前的研究報道HOXA6基因在幾種類型的惡性腫瘤中高表達，與細胞侵襲，增殖，集落形成和化學敏感性相關[11]。HOX 家族成員已被證實參與腫瘤調節(jié)，包括CRC 的發(fā)生和發(fā)展。本研究結果表明HOXA6 在結直腸癌組織中的表達遠情況高于正常結直腸黏膜，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。除此之外，HOXA6 在結直腸癌組織中的高表達與結直腸癌患者的腫瘤直徑、TNM 分期、淋巴結轉移情況以及腫瘤分化程度有關，與年齡、性別無關。說明HOXA6 不僅參與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展，還有可能參與到其轉移過程中。

對此，HOXA6 及SOX9 在腫瘤診斷中進行聯(lián)合檢測有利于進一步了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制、并可以判斷腫瘤的TNM 分期和淋巴結轉移的情況，能夠幫助臨床醫(yī)生對結直腸癌進行更好地輔助診斷。HOXA6 和SOX9 的表達高度相關，可能共享表達的調控機制，或者這些基因之一可能調控另一個基因的表達。需要進一步的功能研究以闡明這種相關性的潛在機制。