王麗華，徐宏建，張全宇，張城瑞，張永根

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150030

0 引言

預(yù)防犢牛疾病是養(yǎng)殖業(yè)最為重要的一項工作，而維生素D對于犢牛健康生長必不可少。隨著牧場的現(xiàn)代化發(fā)展，犢牛與母牛接受光照時間都減少，不僅母牛乳汁中的維生素D含量不足，犢牛自身合成也不足，因此，需要外源補充維生素D[1]。25羥基維生素D3[25（OH）VD3]是維生素D轉(zhuǎn)化為其活性形式1，25-二羥基維生素D3的中間代謝產(chǎn)物[2，3]，是維生素D在體內(nèi)存在的主要形式。已有研究表明，25（OH）VD3作為新型添加劑，具有較好的抗炎、抗癌、抗氧化、提高免疫等功能[4，5]。斷奶會增加犢牛氧化損傷，并抑制免疫功能，從而影響犢牛的健康生長[6，7]。因此，從犢牛出生到斷奶前這一時期其抗氧化能力與免疫功能對其健康至關(guān)重要。國內(nèi)外研究表明，日糧中添加25（OH）VD3可以提高斷奶仔豬和斷奶犢?？寡?、抗氧化能力，促進免疫功能[4，5]，而在斷奶前犢牛中的研究甚少。本研究旨在研究飼喂不同劑量25（OH）VD3對斷奶前犢?？寡趸芰εc免疫功能的影響，為其合理應(yīng)用于生產(chǎn)實踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗方案

試驗地點為黑龍江省哈爾濱市松花江奶牛場。選取18 頭體重（40.68±1.21）kg，健康狀況良好的荷斯坦新生犢牛立即放入單欄中，在犢牛出后2 h內(nèi)提供初乳4 L，12 h內(nèi)再飼喂2 L。將犢牛隨機分為3 個處理組，飼喂不同劑量25（OH）VD3，其中對照組：0 IU/天·頭；低劑量組：6 000 IU/天·頭；高劑量組：12 000 IU/天·頭。添加劑（產(chǎn)自山東海能生物工程有限公司）混入牛奶中飼喂。每天飼喂牛奶3 次（時間分別為07：00、12：00、18：00），每次2 L，進行為期56 天的飼喂試驗，57日齡開始飼喂2 L，61日齡斷奶。所有犢牛均進行單欄飼喂，在出生1周后開始提供開食料并自由飲水，且開食料剩余量至少為10%。

1.2 血液樣本采集與指標(biāo)測定

在試驗期第1、28、56天晨飼3 h后用負(fù)壓肝素鈉管于犢牛頸靜脈采血，血樣于3 000 r/min離心15 min。分裝血漿于離心管中，-20 ℃保存待測。葡萄糖、總蛋白、白蛋白、尿素采用全自動生化分析儀檢測，血漿球蛋白含量由總蛋白和白蛋白計算得出。使用牛ELISA試劑盒由華英生物技術(shù)研究所代測血漿生長激素（HY-C0018）、胰島素樣生長因子-1（HY-H0024）和皮質(zhì)醇（HY-D0031）含量。按照試劑盒說明書測定血漿丙二醛（A003-1-2）、過氧化氫酶（A007-1-1）、總抗氧化能力（A015-1）和總超氧化物歧化酶（A001-1-2）濃度（南京建成）。根據(jù)使用說明書測定免疫球蛋白G、A、M（IgG、IgA、IgM）（HY-50093）（華英生物技術(shù)研究所）。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用PROC MIXED模型（SAS 9.4 SAS Institute Inc， Cary， NC， USA）進行分析，犢牛作為隨機效應(yīng)；處理、時間、處理×?xí)r間作為固定效應(yīng)，初始血漿指標(biāo)作為協(xié)變量加入模型。結(jié)果以平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEM）表示。P≤0.05被認(rèn)為差異顯著，P≤0.01被認(rèn)為差異極顯著，0.05＜P≤0.10被認(rèn)為存在顯著趨勢。

2 結(jié)果

2.1 添加25（OH）VD3對斷奶前犢牛血液生化指標(biāo)的影響

由表1可知，對照組、低劑量組和高劑量組的犢牛在葡萄糖、總蛋白、白蛋白、球蛋白以及尿素之間無顯著差異（P＞0.05）。

表1 不同添加劑量25（OH）VD3對斷奶前犢牛血液生化指標(biāo)的影響

2.2 添加25（OH）VD3對斷奶前犢牛激素水平的影響

由表2可知，隨著25（OH）VD3添加劑量的增加，犢牛血漿生長激素和胰島素樣生長因子-1含量顯著增加（P＜0.05），皮質(zhì)醇含量差異不顯著（P＞0.05）。

表2 不同添加劑量25（OH）VD3對斷奶前犢牛激素水平的影響

2.3 添加25（OH）VD3對斷奶前犢牛抗氧化指標(biāo)的影響

由表3可知，與對照組相比，添加25（OH）VD3的犢牛血漿總超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和總抗氧化能力含量顯著增加（P＜0.05），而血漿丙二醛含量隨添加劑量增加存在降低趨勢（P=0.079）。

表3 不同添加劑量25（OH）VD3對斷奶前犢?？寡趸笜?biāo)的影響

2.4 添加25（OH）VD3對斷奶前犢牛免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，血漿IgA含量隨添加劑量增加存在差異顯著趨勢（P=0.059），血漿IgM含量中各組間差異不顯著（P＞0.05）。而血漿IgG含量隨添加劑量增加而顯著增加（P＜0.05）。

表4 不同添加劑量25（OH）VD3對斷奶前犢牛免疫指標(biāo)的影響

3 討論

血液生化指標(biāo)反映機體多種代謝產(chǎn)物的含量及健康狀況。本研究結(jié)果顯示，飼喂不同劑量25（OH）VD3對犢牛血液生化指標(biāo)的影響差異不顯著，表明飼喂25（OH）VD3不會對犢牛的健康狀況產(chǎn)生不良影響。生長激素是一種肽激素，能促進骨骼、內(nèi)臟和全身生長，刺激軟骨的生長；胰島素樣生長因子-1作為一種活性蛋白多肽物質(zhì)，在生長激素發(fā)揮生理功能時必不可少，兩者對動物的生長和發(fā)育都很重要，特別是在斷奶前。本研究結(jié)果表明，隨著25（OH）VD3劑量的增加，生長激素和胰島素樣生長因子-1分泌增加。Hypponen等[8]研究表明，胰島素樣生長因子-1的濃度隨25（OH）VD3含量增加而增加。飼喂25（OH）VD3可以增加機體內(nèi)25（OH）VD3含量，進而促進胰島素樣生長因子-1分泌。同時，血液中生長激素含量的增加也會促進肝細(xì)胞合成分泌胰島素樣生長因子-1[9]。

犢?？寡趸笜?biāo)變化反映了犢牛健康和生理狀況。維生素D3缺乏易導(dǎo)致氧化應(yīng)激[10]。有研究報道，25（OH）VD3可以提高動物的抗氧化能力[4，11]。本研究結(jié)果顯示，增加25（OH）VD3可使超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和總抗氧化能力含量顯著增加，而丙二醛含量存在降低趨勢?？梢酝ㄟ^超氧化物歧化酶和過氧化氫酶將體內(nèi)產(chǎn)生的超氧陰離子自由基和過氧化氫最終轉(zhuǎn)化為水[12]，抵消氧化應(yīng)激，從而降低細(xì)胞損傷的風(fēng)險[13]。而Yang等[4]發(fā)現(xiàn)飼糧中添加25（OH）VD3可提高斷奶仔豬谷胱甘肽過氧化物酶活性，降低丙二醛含量。添加25（OH）VD3可使1，25-二羥基維生素D3含量增加，防止DNA損傷，修復(fù)抗氧化酶[14]。此外，1，25-二羥基維生素D3的增加可提高腸系膜動脈組織中超氧化物歧化酶活性[15]。以上結(jié)果表明，25（OH）VD3提高了犢牛斷奶前的抗氧化能力。

免疫系統(tǒng)是執(zhí)行免疫反應(yīng)和功能的重要系統(tǒng)，而IgG在動物免疫保護、吞噬和清除細(xì)菌中起著重要作用，能反映動物的健康狀況。Nelson等[16]和Konowalchuk等[17]研究表明，維生素D對牛和斷奶豬的免疫功能有積極的影響。Prosser等[18]也證實25（OH）VD3在先天免疫反應(yīng)中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。也有研究顯示，對流行性腹瀉的斷奶仔豬添加高劑量25（OH）VD3可減少腸道損傷，提高免疫力[4]。本研究中，犢牛飼喂高劑量的25（OH）VD3可使?fàn)倥gA和IgG含量升高，其原因可能是增加的1，25-二羥基維生素D3刺激單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化，導(dǎo)致免疫球蛋白升高。此外，增加的1，25-二羥基維生素D3可促進白介素10的生成，而白介素10可促進B細(xì)胞產(chǎn)生IgG[19]。Martinez等[20]研究表明，飼喂25（OH）VD3可以獲得更多的初乳，具有更多的IgG抗體。Xu等[21]也發(fā)現(xiàn)經(jīng)產(chǎn)奶牛飼喂25（OH）VD3可在產(chǎn)后增加IgG。此外，由此可知25（OH）VD3可以誘導(dǎo)免疫球蛋白的產(chǎn)生，從而增強免疫功能，而提供足夠的血清免疫球蛋白被認(rèn)為是改善免疫系統(tǒng)和健康狀況的重要手段。

4 小結(jié)

本試驗證明，犢牛斷奶前飼喂高劑量25（OH）VD3（12 000 IU/天·頭）能提高機體的生長激素和胰島素樣生長因子-1水平、抗氧化能力和免疫功能。由此可見，飼糧中添加25（OH）VD3對犢牛生長有潛在的促進作用，可使?fàn)倥Ｄ軌蚝芎玫剡m應(yīng)應(yīng)激環(huán)境，并更好地抵御疾病。