雍海江,袁春輝,蘇國(guó)忠
吳忠市人民醫(yī)院 1消化內(nèi)科,2急診醫(yī)學(xué)科(寧夏吳忠751100)
腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是臨床常見的一種胃腸道功能性疾病,以腹脹、腹痛、排便習(xí)慣/大便性狀改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn),其病程較長(zhǎng),可間歇性或持續(xù)性發(fā)作,直接影響患者生活質(zhì)量[1]。目前,IBS發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,但專家學(xué)者認(rèn)為胃腸道動(dòng)力紊亂、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激與IBS發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[2]。過(guò)氧化物氧化還原蛋白1(peroxiredoxin 1,PRDX1)屬于過(guò)氧化物氧化還原酶蛋白家族成員之一,其在IBS中表達(dá)水平明顯上調(diào),其可能參與并影響IBS疾病發(fā)展進(jìn)程,PRDX1有望成為診治IBS的炎癥標(biāo)志物[3]。此外,白細(xì)胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)是IL-17成員之一,Amani等[4]研究發(fā)現(xiàn)IL-17在IBS患者中呈高表達(dá),經(jīng)維生素D治療后,IL-17水平明顯降低,IL-17可能在IBS發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。但PRDX1、IL-17A在IBS患者血清中的表達(dá)水平與腸道癥狀的關(guān)系研究較少。基于此,本研究通過(guò)檢查PRDX1、IL-17A在IBS患者血清中的水平,分析兩者與IBS癥狀嚴(yán)重程度量表(IBS symptom severity scale,IBS-SSS)相關(guān)性,以期為早期診治IBS提供臨床參考依據(jù)。
1.1 一般資料 選取2019年1月至2020年12月本院診治的IBS患者116例為IBS組,體質(zhì)指數(shù)(bodymass index,BMI)為18.74~26.76 kg/m2;并以同時(shí)間段內(nèi)本院健康查體者120例為對(duì)照組,BMI為18.62~26.44 kg/m2。與對(duì)照組相比,IBS組患者胃腸道感染史比例明顯升高(P<0.05),男女比例、年齡、BMI、吸煙史、酗酒史比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。
表1 兩組一般資料比較 例
診斷標(biāo)準(zhǔn):參考羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]判定IBS。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)所有患者符合IBS診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)所有患者臨床資料完整;(3)所有患者自愿參與本項(xiàng)研究者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并消化系統(tǒng)潰瘍/感染、炎癥性腸病、糖尿病內(nèi)臟神經(jīng)病變、惡性腫瘤、肝膽胰疾病者;(2)合并甲狀腺功能性疾病者;(3)合并精神病者;(4)患有慢性疾病史需要長(zhǎng)期接受藥物治療者;(5)近3個(gè)月內(nèi)行腹腔/腸道手術(shù)者。
1.2 試劑與儀器 人PRDX1酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(貨號(hào):CSB-EL018653HU-1)購(gòu)自上海恒斐生物科技有限公司;人IL-17A ELISA試劑盒(貨號(hào):PK-EL-62716)購(gòu)自江蘇普諾生生物科技有限公司。人白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)ELISA試劑盒(貨號(hào):QN-PS0066)購(gòu)自上海喬羽生物科技有限公司。紫外分光光度計(jì)(型號(hào):DU-730)購(gòu)自上海普迪生物技術(shù)有限公司。
1.3 方法
1.3.1 樣本收集 收集所有研究對(duì)象清晨空腹肘靜脈血4~6 mL,自然凝集,3 550×g離心10 min,收集上清液,分裝,保存于-80℃冰箱中,待檢。
1.3.2 ELISA法檢測(cè)血清PRDX1、IL-17A、IL-10水平 取出適量?jī)龃嫜鍢颖?,解凍,?yán)格按照PRDX1、IL-17A、IL-10 ELISA試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)兩組受試者血清PRDX1、IL-17A、IL-10水平。
1.3.3 檢測(cè)血清MDA水平 取出適量?jī)龃嫜鍢颖?,解凍,采用硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。
1.3.4 IBS-SSS評(píng)分 IBS-SSS考察患者排便情況、腹痛頻率、腹脹程度、腹痛程度、疾病對(duì)生活的影響5個(gè)方面,總分為0~500分,分值越大表示腸道癥狀越重[6]。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件,符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以“例”表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);采用Pearson法分析IBS患者血清PRDX1、IL-17A水平、IBS-SSS評(píng)分與IL-10、MDA關(guān)系及PRDX1、IL-17A表達(dá)水平與IBS-SSS評(píng)分相關(guān)性;以logistic回歸分析IBS發(fā)生的影響因素。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 兩組血清PRDX1、IL-17A、IL-10、MDA、IBSSSS評(píng)分表達(dá)水平比較 與對(duì)照組相比,IBS組患者血清PRDX1、IL-17A、MDA水平明顯升高(P<0.05),IL-10水平明顯降低(P<0.05)。IBS組患者IIBS-SSS評(píng)分為(345.36±112.58)分。見表2。
表2 兩組血清PRDX1、IL-17A、IBS-SSS、IL-10、MDA評(píng)分水平比較 ±s
表2 兩組血清PRDX1、IL-17A、IBS-SSS、IL-10、MDA評(píng)分水平比較 ±s
項(xiàng)目 例數(shù) PRDX1(ng/mL) IL-17A(ng/L) IBS-SSS評(píng)分(分) IL-10(ng/L) MDA(nmol/L)對(duì)照組 120 3.43±1.02 36.07±8.31 - 3.58±1.06 1.76±0.51 IBS組 116 6.02±1.94 58.48±11.27 345.36±112.58 2.85±0.72 4.49±1.25 t值 12.897 17.427 - 6.168 22.099 P值<0.001 <0.001 - <0.001 <0.001
2.2 IBS患者血清PRDX1、IL-17A水平、IBSSSS評(píng)分與IL-10、MDA相關(guān)性 Pearson法分析顯示,IBS患者血清IL-17A水平、IBS-SSS評(píng)分與IL-10呈負(fù)相關(guān)(r=-0.367、-0.536,P<0.05);IBS患者血清PRDX1水平、IBS-SSS評(píng)分與MDA呈正相關(guān)(r=0.374、0.503,P<0.05)。見表3。
表3 IBS患者血清PRDX1、IL-17A水平、IBS-SSS評(píng)分與 IL-10、MDA的關(guān)系
2.3 IBS患者血清PRDX1、IL-17A表達(dá)水平與IBS-SSS評(píng)分相關(guān)性 Pearson法分析顯示,IBS患者血清PRDX1、IL-17A表達(dá)水平與IBS-SSS評(píng)分均呈正相關(guān)(r=0.562、0.584,P均<0.05)。見圖1、2。
圖1 IBS患者血清PRDX1水平與IBS-SSS評(píng)分的關(guān)系
2.4 影響IBS的logistic回歸分析 以胃腸道感染史、血清PRDX1、IL-17A水平、IBS-SSS評(píng)分、IL-10、MDA為自變量,以IBS是否發(fā)生為因變量,行l(wèi)ogistic回歸分析,結(jié)果顯示PRDX1、IL-17A、IBS-SSS評(píng)分、MDA為IBS發(fā)生的危險(xiǎn)因素(P均<0.05)。見表4。
圖2 IBS患者血清IL-17A水平與IBS-SSS評(píng)分的關(guān)系
表4 logistic回歸分析IBS發(fā)生的影響因素
IBS雖是良性非器質(zhì)性疾病,但發(fā)病率較高,對(duì)患者家庭和社會(huì)造成經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[7]。因此,尋找IBS發(fā)病的有關(guān)因素,及時(shí)調(diào)控相關(guān)指標(biāo),對(duì)提高患者生活質(zhì)量具有積極意義。
PRDX1是一種過(guò)氧化物還原酶,在活性氧清除、細(xì)胞增殖、分化、凋亡及炎癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[8]。有關(guān)研究表明,PRDX1在慢性炎癥導(dǎo)致的結(jié)直腸癌中表達(dá)水平明顯上調(diào),其可能調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6等促炎因子及部分活化的核因子-κBp65表達(dá)水平,進(jìn)而在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮促炎作用,PRDX1具有作為診治結(jié)直腸癌的潛在靶標(biāo)[9]。既往研究顯示,PRDX1在需要體外膜氧合的心源性休克患者中表達(dá)失調(diào),與炎性細(xì)胞因子具有一定相關(guān)性,PRDX1在炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用,其可能與全身性炎癥反應(yīng)綜合征發(fā)生發(fā)展及不良預(yù)后有關(guān),PRDX1有可能是治療缺血/再灌注損傷的生物學(xué)指標(biāo)[10]。以上研究表明,異常表達(dá)的PRDX1與炎癥類疾病密切相關(guān)。此外,Horie等[11]利用蛋白質(zhì)組學(xué)及免疫組化法分析PRDX1在活動(dòng)性和非活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎患者中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示PRDX1在活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎患者黏膜中的表達(dá)水平較高,且PRDX1表達(dá)水平隨著潰瘍性結(jié)腸炎患者上皮細(xì)胞炎癥程度增加而升高,PRDX1可用于評(píng)估潰瘍性結(jié)腸炎病情及其相關(guān)腫瘤發(fā)生的嚴(yán)重性。本研究中IBS組患者血清PRDX1水平明顯高于對(duì)照組,提示PRDX1可能參與并影響IBS發(fā)病過(guò)程。推測(cè)PRDX1可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥因子表達(dá),從而在IBS的炎癥反應(yīng)過(guò)程中起促進(jìn)作用[12]。
IL-17A主要是由Th17細(xì)胞分泌的特異性促炎性細(xì)胞因子,其可促使炎癥細(xì)胞釋放細(xì)胞因子、趨化因子及抗菌肽,促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集及增殖,連接適應(yīng)性免疫及固有免疫,在自身免疫性、腫瘤等疾病進(jìn)展及宿主防御中發(fā)揮關(guān)鍵作用[13]。有關(guān)研究顯示,雙重氧化酶2(dual oxidase 2,DUOX2)誘導(dǎo)產(chǎn)生的H2O2在慢性炎癥及宿主防御中具有關(guān)鍵作用,IL-17A與白細(xì)胞介素-4結(jié)合,協(xié)同增加DUOX2在結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá),從而可能在胃腸道惡性腫瘤炎癥反應(yīng)及DNA損傷中起一定作用[14]。既往研究顯示,幽門螺桿菌是消化性潰瘍疾病及慢性活動(dòng)性胃炎的主要致病因素,IL-17A表達(dá)上調(diào)與幽門螺桿菌感染有關(guān),IL-17A誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可能受miR-146a調(diào)控,IL-17A有望成為胃炎診治的生物學(xué)靶標(biāo)[15]。以上研究證實(shí),IL-17A表達(dá)失調(diào)與胃腸道炎癥性疾病相關(guān)。此外,Busch等[16]通過(guò)采集并分析潰瘍性結(jié)腸炎患兒回腸結(jié)腸鏡檢的標(biāo)本,結(jié)果顯示,IL-17A在潰瘍性結(jié)腸炎患兒中呈過(guò)表達(dá),其可能參與并影響炎癥性腸病發(fā)病進(jìn)程,IL-17A可能具有診治炎癥性腸病的潛在價(jià)值。本研究中IBS組患者血清水平明顯高于對(duì)照組,提示IL-17A可能在IBS病理過(guò)程中發(fā)揮一定調(diào)節(jié)作用。究其可能原因,一方面,IL-17A作為IL-17家族代表性成員,其可能通過(guò)刺激上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等分泌細(xì)胞趨化因子及多種炎性介質(zhì),募集中性粒細(xì)胞從而誘導(dǎo)炎癥發(fā)生;另一方面,由于腸道通透性增加或腸道菌群紊亂,腸道細(xì)菌成分通過(guò)激活腸粘膜抗原呈遞樹突細(xì)胞,促使IL-17A分泌增加,進(jìn)而引起針對(duì)腸道菌群的免疫應(yīng)答[17]。
IL-10主要是由Th2細(xì)胞產(chǎn)生的抗炎細(xì)胞因子,在腸道免疫及炎癥反應(yīng)中具有重要調(diào)節(jié)作用;此外,MDA可間接反映組織受氧自由基損傷程度,其可能在IBS氧化應(yīng)激、自由基損傷過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]。本研究中IBS組患者血清IL-10水平明顯低于對(duì)照組,MDA水平明顯高于對(duì)照組,與Amani等[4]研究趨勢(shì)類似,提示異常水平的IL-10、MDA可能與IBS發(fā)病進(jìn)展有關(guān)。推測(cè)IL-10可能通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞黏附、激活,抑制炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放,進(jìn)而在IBS的炎癥反應(yīng)過(guò)程中起抑制作用;MDA可能通過(guò)影響氧化反應(yīng),引起組織自由基損傷,從而在IBS發(fā)病過(guò)程中起作用。
本研究對(duì)所有IBS患者腸道癥狀進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果顯示,IBS-SSS評(píng)分為(345.36±112.58)分,且與血清PRDX1、IL-17A表達(dá)水平呈正相關(guān),提示血清PRDX1、IL-17A可能與腸道癥狀相互影響,從而協(xié)同影響IBS發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步研究顯示,IBS患者血清IL-17A水平、IBS-SSS評(píng)分與IL-10呈負(fù)相關(guān),PRDX1水平、IBS-SSS評(píng)分與MDA呈正相關(guān),提示IL-17A與IL-10,PRDX1與MDA可能發(fā)生相互作用,并與腸道癥共同影響IBS進(jìn)程。此外,本研究顯示PRDX1、IL-17A、MDA水平、IBS-SSS評(píng)分均為IBS發(fā)生的危險(xiǎn)因素,提示PRDX1、IL-17A、MDA水平升高,IBS-SSS評(píng)分增加,均會(huì)增加IBS患病風(fēng)險(xiǎn),及時(shí)監(jiān)控上述指標(biāo)有助于早期評(píng)估、治療IBS。
綜上所述,PRDX1、IL-17A在IBS患者血清中呈過(guò)表達(dá),兩者與腸道癥狀具有一定相關(guān)性,可能與IL-10、MDA、腸道癥狀相互作用,進(jìn)而影響IBS發(fā)展過(guò)程。但本研究樣本較少,會(huì)引起研究結(jié)果出現(xiàn)一定偏頗,后續(xù)研究將增加樣本量進(jìn)行深入探究。