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        牡蠣三倍體育種技術(shù)研究進展

        2021-12-05 20:48:18賈圓圓
        漁業(yè)研究 2021年3期
        關(guān)鍵詞:方法

        賈圓圓

        (平潭綜合實驗區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村發(fā)展服務中心,福建 福州 350400)

        牡蠣又稱生蠔、海蠣子,隸屬軟體動物門(Mollusca)、雙殼綱(Bivalvia)、珍珠目(Pterioida)、牡蠣科(Ostreidae),其肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富、富含鋅、?;撬?、糖原等營養(yǎng)物質(zhì)[1],是一種高蛋白、低脂肪的健康海洋貝類[2],享有“海中牛奶”之美稱。研究發(fā)現(xiàn),牡蠣對化學性肝損傷具有一定程度的輔助保護作用[3]。牡蠣具有生長快速、產(chǎn)量高、食物鏈短、經(jīng)濟效益良好等優(yōu)點[4]。世界上主要的牡蠣養(yǎng)殖國有中國、日本、韓國、美國、法國等,其中中國牡蠣養(yǎng)殖年產(chǎn)量約占世界牡蠣年產(chǎn)量的80%[5]。2020年《中國漁業(yè)年鑒》統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,中國的牡蠣養(yǎng)殖區(qū)主要集中在山東、福建、廣東、廣西等省份,養(yǎng)殖產(chǎn)量約占全國總產(chǎn)量的90%。2019年,中國牡蠣的養(yǎng)殖面積為14.51×104hm2,養(yǎng)殖產(chǎn)量高達522.6×104t,占貝類海水養(yǎng)殖產(chǎn)量的三分之一還多,占海水養(yǎng)殖總產(chǎn)量的25%左右[6]。牡蠣已成為我國乃至世界重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類。

        多倍體是指體內(nèi)含有三套或三套以上染色體組的生物個體,在水產(chǎn)貝類中,與普通二倍體相比,多倍體子代具有個體大、生長快等優(yōu)勢。通常將體內(nèi)含有三套染色體組的生物個體稱為三倍體,一般認為三倍體的個體生物具有不育性。在水產(chǎn)生物育種生產(chǎn)過程中,通過人工干預的形式使生物體中的染色體組增加的技術(shù)稱為多倍體育種技術(shù),該方法已成為獲得水產(chǎn)生物新品種的一個重要途徑。以改良水產(chǎn)生物種質(zhì)資源、改善能量收支平衡、提高水產(chǎn)品質(zhì)量與產(chǎn)量的水產(chǎn)生物多倍體研究,近年來一直受到業(yè)界的關(guān)注[7]。

        絕大多數(shù)牡蠣為雌雄異體,但也存在雌雄同體現(xiàn)象,外觀上難以區(qū)分,需開殼后通過水滴法或鏡檢法進行鑒定。學者們通過研究長牡蠣、近江牡蠣等多種牡蠣染色體核型,發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)牡蠣具有兩套染色體組(2n=20)即二倍體。二倍體牡蠣在產(chǎn)生配子的過程中,性腺的發(fā)育需要消耗體內(nèi)儲存的糖原為其提供能量,精卵的排放導致牡蠣軟體部極度消瘦,嚴重影響了牡蠣的口感和出肉率。多倍體育種技術(shù)培育的三倍體牡蠣,通過改變育性使其避免了二倍體牡蠣繁殖期間品質(zhì)下降的問題,且三倍體牡蠣保持了多倍體生物個體大、生長快的優(yōu)點。本文綜述了近年來中國牡蠣的主要養(yǎng)殖品種及三倍體育種的產(chǎn)生機理和誘導方法,為牡蠣及其他貝類的多倍體研究提供參考。

        1 主要養(yǎng)殖品種及育種技術(shù)

        1.1 主要養(yǎng)殖品種概況

        中國的牡蠣物種資源至少擁有30種[8],在我國海域內(nèi),主要的經(jīng)濟牡蠣均屬于巨蠣屬,而巨蠣屬在中國海域定名的種或亞種有12個[9]。也有學者[10]認為巨蠣屬、牡蠣科的分類尚存爭議。我國牡蠣主要的養(yǎng)殖品種為長牡蠣(又稱太平洋牡蠣,Crassostreagigas)、福建牡蠣(又稱葡萄牙牡蠣,C.angulata)、香港牡蠣(C.hongkongensis)、近江牡蠣(C.ariakensis)、熊本牡蠣(C.sikamea)等[11]。

        長牡蠣,左殼凹陷,右殼隆起,鱗片排列緊密,殼形呈圓形或長三角形,個體較大,原生長于西太平洋北部海域,是一種生長快、抗逆性強、肉質(zhì)肥美的經(jīng)濟貝類,喜高鹽低溫環(huán)境,適合養(yǎng)殖于中高緯度的海域[12]。長牡蠣原產(chǎn)于日本、澳大利亞等國,1982年中國從日本引進該物種。北美、歐洲等地陸續(xù)引進后,長牡蠣逐漸成為世界上養(yǎng)殖量較大的海水貝類養(yǎng)殖品種。在所有的牡蠣品種中,對長牡蠣的研究最為廣泛,其中在牡蠣多倍體育種研究中,已獲得長牡蠣四倍體群體及全三倍體。在中國,長牡蠣主要分布于長江口以北的黃渤海水域[13],主要養(yǎng)殖區(qū)分布在山東、遼寧、江蘇等地,2019年養(yǎng)殖面積6.05×104hm2、養(yǎng)殖產(chǎn)量118.55×104t。

        福建牡蠣,左殼稍微凹陷,右殼隆起,殼外側(cè)放射性鱗褶分布明顯,殼呈黃色伴有褐色條紋,殼內(nèi)肌痕為深褐色[14],個體略小于長牡蠣,是華南地區(qū)重要的養(yǎng)殖貝類[15],主要分布于長江口以南海域,福建海域分布較多。其曾經(jīng)一度被認為是長牡蠣[16],王海艷等[17]通過測序發(fā)現(xiàn)長牡蠣和福建牡蠣屬于同一物種不同亞種的關(guān)系。福建牡蠣主要養(yǎng)殖區(qū)分布在福建、臺灣等地,是福建最主要的養(yǎng)殖品種[18],2019年養(yǎng)殖面積3.69×104hm2、養(yǎng)殖產(chǎn)量201.26×104t。

        香港牡蠣,殼圓形或橢圓形,左殼較小,殼覆鱗片,殼色青、白或褐色,肉質(zhì)發(fā)白。其主要分布在福建以南的華南沿海,而在廣東、廣西等地分布較多,其市場價格略高于其他牡蠣品種,已成為華南地區(qū)重要的經(jīng)濟貝類[19],2019年養(yǎng)殖面積4.34×104hm2、養(yǎng)殖產(chǎn)量179.84×106t。研究發(fā)現(xiàn),香港牡蠣養(yǎng)殖于我國北方海區(qū)后,冬季出現(xiàn)大規(guī)模死亡現(xiàn)象,不適于北方推廣養(yǎng)殖。香港牡蠣屬高溫低鹽種,在熱帶或亞熱帶的河口常與近江牡蠣共存。近年來,由于淡水入海量的逐步減少,沿海養(yǎng)殖區(qū)的鹽度略有升高,加上養(yǎng)殖環(huán)境的不斷惡化,以致其死亡率升高。

        近江牡蠣,外殼鱗片隨年齡而變化,殼內(nèi)白色,邊緣紫色,肌痕大且位置隨殼形而變化,其長勢迅速、抗逆性強,屬廣溫廣鹽種,在世界各地均有分布,我國南北方也均有分布。過去,因肉色不同將近江牡蠣分為“赤蠔”和“白蠔”,王海艷等[17,20-21]利用基因測序和生物比對的方法對其進行分子系統(tǒng)學分析,結(jié)果表明“白蠔”與香港牡蠣的基因序列相近,訂名為香港牡蠣[16];“赤蠔”訂名為“近江牡蠣”,因其在日本有明海(Ariake)也有分布,但Wakiya Y[22]通過殼形特征比較將其命名為Crassostreaariakensis,因此近江牡蠣又稱為有明巨牡蠣。

        熊本牡蠣,為長牡蠣的姐妹種,野生群體與長牡蠣在形態(tài)上無明顯差別,相較于長牡蠣,其個體較小;殼長、殼高相差不大;外殼接近圓形;左殼凹陷較深;自殼頂放射的肋脊較明顯;殼色偏淺、較白。熊本牡蠣原產(chǎn)于日本,主要分布于日本有明海海區(qū),中國的中部和南部海區(qū)、韓國沿海也有分布。在我國,熊本牡蠣生長區(qū)域與福建牡蠣略微重疊,野生群體主要生長于江蘇以南河口與海灣。王海艷等[23]利用分子標記技術(shù)證明了野生型熊本牡蠣存在于我國海區(qū)。由于其個體較小,在日本的養(yǎng)殖業(yè)中未得到重視,20世紀50年代,在日本和美國進行的長牡蠣苗種貿(mào)易中,熊本牡蠣被認為是長牡蠣而引進美國。在美國,熊本牡蠣的產(chǎn)卵時間晚于長牡蠣和美洲牡蠣,填補了夏季牡蠣市場的空白,加上其蠔肉爽滑、口感甘甜,深受美國消費者的喜愛,成為美國重要的經(jīng)濟貝類之一[24]。由于牡蠣外殼形狀易受環(huán)境因素影響,美國養(yǎng)殖的熊本牡蠣群體的外部形態(tài)不同于日本有明海海域的野生熊本牡蠣群體,美國的熊本牡蠣左殼凹陷較深,貝殼表面放射狀的背脊更加明顯。

        1.2 育種技術(shù)研究

        中國牡蠣養(yǎng)殖歷史悠久,多種因素使牡蠣在長期養(yǎng)殖生產(chǎn)過程出現(xiàn)了個體變小、生長速度緩慢、生長周期變長、品質(zhì)下降等現(xiàn)象[4]。學者們對此也進行了大量的研究和改進工作,一方面,通過建立牡蠣良(原)種場,加強其種質(zhì)資源的利用和保護,在采用傳統(tǒng)的選擇育種、雜交育種及基因育種等方法對牡蠣進行遺傳改良而培育出牡蠣新品種(系)等方面均取得了重要的進展,有效地推動了我國牡蠣產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。如李琪等2014年培育出我國首個牡蠣新品種長牡蠣“海大1號”,之后又相繼培育出“海大2號”和“海大3號”新品種;喻子牛等2015年培育出香港牡蠣“華南1號”新品種;曾志南等2017年培育出福建牡蠣“金蠣1號” 新品種;張國范等2020年培育出“海蠣1號”新品種[11]。另一方面,通過牡蠣多倍體育種技術(shù)推動產(chǎn)業(yè)進步。郭希明等在1995年發(fā)明了四倍體軟體動物(牡蠣、扇貝、蛤、貽貝和鮑)生產(chǎn)方法以及通過四倍體與二倍體交配生產(chǎn)三倍體的方法[25]。張躍環(huán)等在2017年發(fā)明了一種香港牡蠣四倍體幼貝的制備方法,通過優(yōu)選三倍體卵子、精選二倍體精子、抑制受精卵第二極體、獲得四倍體幼蟲、培育四倍體子代等技術(shù)環(huán)節(jié),利用了部分三倍體卵子可以行使正常減數(shù)分裂的特性,創(chuàng)造了一種抑制受精卵(三倍卵子+二倍體精子)第二極體制備四倍體的育種方法[26]。李琪等在2017年發(fā)明了一種長牡蠣“海大2號”新品種四倍體的誘導方法,為長牡蠣“海大2號”新品種四倍體的擴大養(yǎng)殖提供了育苗基礎(chǔ)[27]。于瑞海等在2019年發(fā)明了一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法,為三倍體葡萄牙牡蠣規(guī)模化育苗打下了基礎(chǔ)[28]。

        2 牡蠣三倍體的產(chǎn)生機理及培育方法

        2.1 牡蠣三倍體的產(chǎn)生機理

        減數(shù)分裂是有性生殖生物在形成配子過程中出現(xiàn)的細胞分裂方式,減數(shù)分裂過程染色體復制一次,細胞進行連續(xù)兩次的分裂,配子(精細胞和卵細胞)中的染色體組數(shù)為體細胞的一半,如普通野生二倍體牡蠣產(chǎn)生的精子或卵子中含有一個染色體組。正常減數(shù)分裂過程中,一個雄性生殖細胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂形成兩個次級精母細胞,細胞繼續(xù)分裂,經(jīng)過減數(shù)第二次分裂后,形成四個精細胞,最后發(fā)育為四個精子;一個雌性生殖細胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂形成一個次級卵母細胞和一個第一極體(一般不繼續(xù)分裂,退化),一個次級卵母細胞經(jīng)過減數(shù)第二次分裂后形成一個卵細胞和第二極體(退化),最終發(fā)育為一個卵子。

        自然界野生牡蠣多為二倍體,正常體細胞含有兩個染色體組,牡蠣體內(nèi)的生殖細胞——精細胞經(jīng)過兩次減數(shù)分裂形成含有一個染色體組的精子。牡蠣排出的成熟卵子卻停留在減數(shù)第一次分裂的前期或中期,當精卵結(jié)合形成受精卵后繼續(xù)完成減數(shù)第一次分裂和減數(shù)第二次分裂,排出第一極體和第二極體,這一特殊的減數(shù)分裂過程為多倍體的誘導創(chuàng)造了條件,通常通過抑制第一極體或第二極體的釋放使極體的染色體組留在受精卵內(nèi),達到染色體組加倍的目的,繼續(xù)完成減數(shù)分裂后形成多倍體。

        2.2 牡蠣三倍體的培育方法

        三倍體牡蠣的培育途徑主要包括以下兩種:一是生物雜交法,即通過四倍體牡蠣與普通二倍體牡蠣雜交產(chǎn)生三倍體,理論上該方法產(chǎn)生的子代三倍體率達100%;另一種是通過化學方法或物理方法抑制受精卵減數(shù)分裂中第一極體或者第二極體的排出,使極體內(nèi)攜帶的染色體組留在受精卵內(nèi),從而使染色體組數(shù)量增加,形成三倍體。通過后者形成三倍體中,常采用影響第二極體的形成從而獲得三倍體。李孝緒[29]研究發(fā)現(xiàn),如若抑制減數(shù)第一次分裂第一極體的形成則易導致減數(shù)第二次分裂中染色體分離過程的復雜化,帶有的隨機性較大,可能得到四倍體、三倍體、二倍體甚至非整倍體,子代的三倍體率低且不穩(wěn)定。

        2.2.1 生物雜交法

        生物雜交是指不同生物群體中個體間的交配,雜交使親本的基因配合在一起,子代將親本的特性進行結(jié)合,具有雜交優(yōu)勢。在理論上,通過牡蠣的四倍體與二倍體雜交產(chǎn)生子代三倍體率為100%,且四倍體牡蠣可通過自身繁育形成穩(wěn)定的群系從而穩(wěn)定獲得三倍體,因此成為三倍體牡蠣產(chǎn)業(yè)化養(yǎng)殖的有效途徑,該途徑操作簡單,三倍體率高,避免了理化方法對胚胎發(fā)育的影響,提高了胚胎孵化率及幼蟲成活率,但該途徑的工作難度在于如何獲得牡蠣四倍體。長牡蠣通過生物雜交法成功誘導出三倍體并應有于生產(chǎn)中。Guo X M等[30]將長牡蠣的二倍體與四倍體進行雜交產(chǎn)生全三倍體子代,闕華勇等[31]、王昭萍等[32]對子代三倍體幼蟲各個發(fā)育時期的倍性進行測定,表明其三倍體率為100%,除此之外,學者發(fā)現(xiàn)雜交產(chǎn)生的三倍體孵化、存活與對照組差異不明顯,進一步從實驗上證明理論的可行性和方法的可推行性。除此之外,張躍環(huán)等在2017年發(fā)明了一種香港牡蠣四倍體幼貝的制備方法,李琪等在2017年發(fā)明了一種長牡蠣“海大2號”新品種四倍體的誘導方法,于瑞海等在2019年發(fā)明了一種培育葡萄牙牡蠣四倍體的方法。

        2.2.2 物理方法

        1)溫度休克法

        溫度休克法是指通過劇烈地改變環(huán)境溫度來抑制受精卵分裂過程中微管的形成,使紡錘體無法拉動染色體組向兩端移動,從而形成多倍體細胞。溫度休克法具有操作簡單、成本較低、無毒、無污染等優(yōu)點,該方法通常包括冷休克和熱休克兩種方法,因種類不同其處理方法也略有差異。溫度休克法中溫度的選擇應根據(jù)牡蠣原始生活海區(qū)的生活溫度確定,溫度不宜過高或過低,最適溫度一般為該種的亞致死溫度。于瑞海[33]對長牡蠣受精20 min后采用4~5℃冷休克方法15 min得到三倍體的誘導效果最好,得到子代三倍體率為68%,幼貝三倍體率為60.5%,實驗中通過解剖的方法人工授精,由于精卵發(fā)育的不同步性,降低了受精率和孵化率,該學者同時進行了熱休克的實驗研究,實驗中發(fā)現(xiàn)受精卵到2細胞和4細胞時停止發(fā)育。容壽柏等[34]對近江牡蠣卵子受精25 min后,采用35℃熱休克方法處理20 min,得到64%三倍體胚胎;采用10℃冷休克方法處理20 min得到69%三倍體胚胎,實驗發(fā)現(xiàn)當溫度超過42℃,受精卵的死亡率急劇升高,該方法得出的結(jié)論解釋了于瑞海研究中的實驗現(xiàn)象。

        2)靜水壓法

        靜水壓法是通過液壓機等靜水壓設備施壓于牡蠣受精卵,影響分裂過程中紡錘體中微絲、微管的形成,抑制減數(shù)第二次分裂中第二極體的排出,誘導產(chǎn)生牡蠣三倍體。與溫度休克法相比,靜水壓法對胚胎的傷害作用較小,但操作過程需要專門的工作儀器即液壓機。Chaiton J A等[35]對太平洋牡蠣采用靜水壓法誘導產(chǎn)生子代三倍體率為57%,該方法得到的三倍體率不高。

        3)電脈沖法

        電脈沖休克是利用細胞融合的方法使染色體數(shù)目加倍,從而形成多倍體,1992年Cadoret J P等[36]對長牡蠣采用600 V/cm電脈沖休克,得到子代三倍體率為55%,誘導產(chǎn)生20%四倍體幼蟲,該方法獲得的三倍體率較前兩種方法效率更低。

        4)滲透壓法

        滲透壓法是新提出的獲得貝類三倍體的誘導方法,主要通過降低或提高海水鹽度誘導三倍體的產(chǎn)生。目前,該方法的誘導原理尚未明確,有專家認為,其原理可能是滲透壓引起受精卵能量代謝紊亂,影響紡錘體中微絲與微管的形成,從而影響極體的形成誘導產(chǎn)生多倍體[37]。該方法操作簡易、成本較低、誘導率高,具有廣闊的應用前景。于瑞海等[38]在40%~50%太平洋牡蠣受精卵出現(xiàn)第一極體時,采用鹽度8的低鹽誘導和鹽度60的高鹽誘導,得到子代的三倍體率為90%以上,該實驗誘導率雖高,但誘導后受精卵的發(fā)育過程會受影響,實驗中長牡蠣D形幼蟲孵化率明顯下降。王康[39]對太平洋牡蠣采用高鹽誘導方法進行三倍體誘導探索,結(jié)果表明當50%受精卵出現(xiàn)第一極體時,用鹽度65的高鹽海水處理長牡蠣受精卵20 min后,得到幼蟲的三倍體率最高為65.53%,作者認為,較低的誘導率可能與精卵的質(zhì)量及精卵發(fā)育的同步性有關(guān)。

        2.2.3 化學方法

        1)細胞松弛素B法

        細胞松弛素B(簡稱CB)是一種真菌代謝物,能夠特異性地作用于微絲,抑制收縮環(huán)的收縮功能,影響分裂溝的形成,阻止細胞繼續(xù)分裂,從而誘發(fā)多倍體的形成。CB對微絲的作用具有特異性和可逆性,當CB去除后,細胞內(nèi)的微絲仍可以行使正常功能。CB價格昂貴,是一種毒性極強的致癌物,不易溶于水,可溶于0.1%二甲亞砜(DMSO)溶液,多倍體誘導結(jié)束后應使用DMSO洗去CB殘留液。Stanley J G等[40]通過細胞松弛素B誘導產(chǎn)生美洲牡蠣三倍體,該方法作為牡蠣誘導三倍體的開端,為后續(xù)學者的研究提供了理論依據(jù)。Downing S L等[41]對太平洋牡蠣采用CB誘導,得到子代三倍體率為88%左右;曾志南等[42]對僧帽牡蠣受精18 min后采用1.5 mg/L CB處理15 min,得到子代三倍體率達87.5%,實驗發(fā)現(xiàn)誘導后牡蠣孵化率和面盤幼蟲成活率都比對照組要低,這可能與CB的高毒性有關(guān);于瑞海等[43]在太平洋牡蠣出現(xiàn)50%第一極體時,采用CB誘導15 min,得到子代三倍體率為91.5%,實驗中對比了CB、6-DMAP、咖啡因三種方法的誘導結(jié)果,從價格、毒性、誘導率、附殼率多因素綜合考量,認為咖啡因是一種相對容易推廣的誘導劑;林位瑯[44]分別對太平洋牡蠣、僧帽牡蠣受精卵采用CB誘導,子代三倍體率分別為68.9%、87.5%,得到的孵化率偏低,認為應從CB的處理時間、濃度、操作方法等方面做進一步的研究。

        2)6-二甲氨基嘌呤法

        6-二甲氨基嘌呤(簡稱6-DMAP)是一種嘌呤類似物,作為蛋白磷酸化抑制劑,作用于特定的激酶從而破壞微管導致微管的解聚集和紡錘體的解散,達到誘導多倍體的目的。與CB法誘導多倍體相比,6-DMAP的價格相對便宜,毒性低、無致癌風險、易溶于水且具有與CB相似的高誘導率,具有廣泛的應用前景。Desrosiers R R等[45]對太平洋牡蠣采用6-DMAP誘導產(chǎn)生牡蠣三倍體,田傳遠等[46-48]對太平洋牡蠣采用6-DMAP誘導作用于第一極體時,其子代三倍體率為71.3%左右;作用于第二極體時,其子代三倍體率為93.8%,采用6-DMAP誘導太平洋牡蠣過程中也出現(xiàn)少量四倍體個體,該學者的研究采用Allen 和 Bushek所提出的采用觀察極體出現(xiàn)率為指標以確定處理時間的方法,不再根據(jù)精卵混合時間作為依據(jù),通過觀察第一極體的數(shù)量把握誘導時機,為生產(chǎn)應用提供了新思路。林琪等[49]對太平洋牡蠣受精卵采用6-DMAP處理20 min,得到子代三倍體率為81.26%,認為受精卵的成熟度及密度是影響三倍體率的重要因素。于瑞海等[50]對太平洋牡蠣采用6-DMAP誘導,產(chǎn)生子代三倍體率為85.6%,其在精卵的選取和受精過程做了精心的準備,從而降低了人工受精的影響。

        3)咖啡因法

        咖啡因?qū)ξ⒐艿淖饔镁哂刑禺愋?,可改變微管特別敏感的Ca2+濃度,當Ca2+濃度高于10-3或極低時,微管二聚體將解聚無法組裝成微管結(jié)構(gòu),染色體無法分離形成多倍體。Shpigel M等[51]研究發(fā)現(xiàn)溫度休克與咖啡因法結(jié)合使用可使誘導效果更佳,通過對太長牡蠣采用5 mmol/L咖啡因+32℃組合誘導產(chǎn)生子代三倍體率達71%。王菊生[52]對太平洋牡蠣采用咖啡因+34℃組合誘導產(chǎn)生子代三倍體率為59.4%,于瑞海等[53]對太平洋牡蠣采用咖啡因+(33±1)℃組合誘導產(chǎn)生子代三倍體率最高達90.5%,實驗發(fā)現(xiàn),隨著咖啡因濃度的升高,三倍體誘導率升高,D形幼蟲孵化率降低;認為2 g/L咖啡因濃度最佳。

        4)聚乙二醇法

        聚乙二醇是一種細胞融合劑,通過誘導細胞融合而產(chǎn)生多倍體。Guo X M等[54]對長牡蠣采用聚乙二醇誘導產(chǎn)生了30%四倍體胚胎,為三倍體誘導做了新的嘗試、探索。

        5)CB+紫外照射

        紫外線照射能夠使精子染色體失去活性,Guo X M等[54-55]對太平洋牡蠣采用紫外線照射+CB聯(lián)合誘導產(chǎn)生牡蠣四倍體,其誘導率高達96%,紫外線的使用降低了CB的濃度從而降低了毒性所帶來的影響。

        6)秋水仙素

        秋水仙素是一種生物堿,對微管的組裝具有抑制作用,解聚已有的微管,從而抑制紡錘體的形成或者破壞形成的紡錘體[56],達到染色體加倍的目的。該誘導劑被廣泛應用于植物中,在泥蚶[57]、皺紋盤鮑[58]中已有相應的研究數(shù)據(jù)。

        此外,Nocodazole作為一種微管抑制劑,普遍應用于細胞培養(yǎng)的同步化操作之中,Yang H P等[59]在貝類中的硬殼蛤中誘導產(chǎn)生了四倍體。三氯甲烷[60]和聚乙烯二醇[61]等也具有一定的抑制細胞分裂的作用,但對貝類三倍體的誘導效果不佳。

        3 展望

        我國已在牡蠣多倍體育種方面進行了大量的研究,取得了一定的成果,但同時也存在一些問題。在牡蠣多倍體的育種方法上,物理方法成本較低、操作相對簡單但誘導效果不佳,化學方法誘導效果雖優(yōu)于物理方法,但其成本高,操作復雜,部分化學誘導劑具有毒性,對牡蠣及養(yǎng)殖環(huán)境都有一定的影響,這兩種育種方法在牡蠣養(yǎng)殖生產(chǎn)中難以普及推廣。一般認為,通過四倍體與二倍體生物雜交的方法培育出三倍體是實現(xiàn)牡蠣產(chǎn)業(yè)化的根本途徑,該方法穩(wěn)定性好、無毒副作用,可產(chǎn)業(yè)化和規(guī)?;a(chǎn)。但生產(chǎn)實踐中,穩(wěn)定的四倍體群體較難獲得,通過三倍體牡蠣產(chǎn)生的較大卵子誘導四倍體是目前牡蠣四倍體育種中較為可行的方法。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和多倍體育種技術(shù)的應用,牡蠣多倍體育種將會有廣闊的發(fā)展前景。為此建議,首先,應加強牡蠣多倍體培育機理的相關(guān)研究,增加三倍體生長、繁育、適應性的研究,提高四倍體的遺傳穩(wěn)定性;其次,要加強異源多倍體的研究,將傳統(tǒng)雜交育種與多倍體育種相結(jié)合,使其子代綜合多倍體優(yōu)勢和雜交優(yōu)勢,擴展多倍體誘導技術(shù)研究的領(lǐng)域,培育出滿足人們需求的新品種,為我國牡蠣養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展作出新的貢獻。

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