趙旭珠 - 夏 陳 朱永清 - 陳 建 陳 渝

(1. 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，四川 成都 610066；2. 四川丹梅生物科技有限公司，四川 達(dá)州 635000)

青梅(VaticamangachapoiBlanco)又稱(chēng)酸梅子、果梅等，為薔薇科李屬，果實(shí)直徑2～3 cm，果皮顏色由綠色到黃色[1]。中國(guó)是青梅的原產(chǎn)地及世界上適合生產(chǎn)青梅地域最廣的國(guó)家，廣東、廣西、四川、浙江、江蘇、福建及臺(tái)灣等18個(gè)省(自治區(qū))均適合生產(chǎn)[2]。青梅營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值很高[3]，可以促進(jìn)消化、改善腸道[4]、抗疲勞[5]、護(hù)肝[6]、預(yù)防心血管疾病[7]、抑菌、消炎[8]等。目前已有關(guān)于青梅中有機(jī)酸的相關(guān)研究報(bào)道，余洋洋等[1]對(duì)青梅中有機(jī)酸的種類(lèi)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)青梅中有機(jī)酸含量最高的是檸檬酸和蘋(píng)果酸，分別為6.5%，3.4%；翟煥趁等[9]對(duì)福建青梅中有機(jī)酸含量進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)青梅中有機(jī)酸含量最高的是檸檬酸和蘋(píng)果酸，分別為4.50%～4.83%，0.24%～0.67%。但未見(jiàn)文獻(xiàn)對(duì)達(dá)州青梅中有機(jī)酸含量進(jìn)行研究和分析。

青梅作為中國(guó)的特色果品之一，隨著人們對(duì)其營(yíng)養(yǎng)和價(jià)值的認(rèn)識(shí)，青梅加工產(chǎn)品已成為科研開(kāi)發(fā)和市場(chǎng)消費(fèi)的熱點(diǎn)[10]。達(dá)州作為“中國(guó)的烏梅之鄉(xiāng)”，青梅的年均產(chǎn)量在10萬(wàn)t以上，但因?yàn)檫_(dá)州的鮮果轉(zhuǎn)化成品條件不足，對(duì)青梅中有機(jī)酸等功效成分的基礎(chǔ)研究比較缺乏。試驗(yàn)擬對(duì)10種有機(jī)酸進(jìn)行全面分析，以期為達(dá)州青梅功效成分的深入研究、產(chǎn)品深加工提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

鮮青梅樣品(詳見(jiàn)表1)：四川丹梅生物科技有限公司。

表1 9個(gè)不同區(qū)域同一品種青梅信息表

1.1.2 試劑

草酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸、齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品：北京索萊寶科技有限公司；

甲醇、乙腈：色譜純，美國(guó)MREDA公司；

磷酸、磷酸銨：分析純，成都市科龍化工試劑廠；

試驗(yàn)用水均為超純水。

1.1.3 主要儀器設(shè)備

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：DHG-9075A型，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；

高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：FW-100型，北京科偉永興儀器有限公司；

數(shù)控超聲波清洗器：KQ-250DB型，昆山市超聲儀器有限公司；

低速離心機(jī)：TD-4Z型，四川蜀科儀器有限公司；

高效液相色譜儀：1260型，美國(guó)Agilent公司；

優(yōu)普系列超純水機(jī)：UPC-1-10T型，成都超純科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品前期處理 青梅樣品經(jīng)分揀、清洗，60 ℃烘干打粉，過(guò)60目篩，-18 ℃貯藏備用。

1.2.2 樣品的制備

(1) 草酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸分析樣品：稱(chēng)取青梅粉末0.5 g，加25 mL超純水溶解，于40 ℃超聲提取40 min，4 000 r/min離心5 min，收集上清液，用水定容至25 mL，以備用[11]。

(2) 齊墩果酸、熊果酸分析樣品：稱(chēng)取青梅粉末1 g，加25 mL甲醇溶解，于40 ℃超聲提取40 min，4 000 r/min離心5 min，收集上清液，用水定容至25 mL，以備用[11]。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

(1) 草酸等8種有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品：稱(chēng)取一定量的草酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸，分別用超純水定容至10 mL使標(biāo)準(zhǔn)品母液的質(zhì)量濃度為2.04，3.62，3.51，3.30，1.75，2.00，3.07，3.58 mg/mL，冷藏備用[12]。

(2) 齊墩果酸、熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品：稱(chēng)取一定量的齊墩果酸、熊果酸，分別用甲醇溶解并定容至10 mL，標(biāo)準(zhǔn)品母液質(zhì)量濃度為0.98 mg/mL，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，備用[12]。

1.2.4 色譜條件

(1) 分析草酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸的色譜條件：色譜柱為Eclipse XDB-C18(3.0 mm×250 mm，5 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量5 μL；流速0.5 mL/min；流動(dòng)相：0.5%磷酸二氫銨—水溶液(A)，0.1%磷酸(B)；等度洗脫：0～12.9 min，10% B[13]。

(2) 分析齊墩果酸、熊果酸的色譜條件：色譜柱為Eclipse SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL；流速1 mL/min；流動(dòng)相：16 mmol/L磷酸鹽溶液(A)，70%乙腈(B)，等度洗脫：0～15 min，70% B[13]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)試驗(yàn)的平均值，使用Microsoft Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，并通過(guò)SPSS 20.0采用Turkey方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品及青梅樣品的HPLC圖譜

從圖1可以看出，有機(jī)酸的出峰時(shí)間均在12 min之內(nèi)，而且各類(lèi)物質(zhì)得到了較好的分離。該方法分離效果較好，適合有機(jī)酸含量的測(cè)定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

以各有機(jī)酸的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如表2所示，10種有機(jī)酸的峰面積和質(zhì)量濃度之間呈較好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 0～0.999 9。

2.3 有機(jī)酸含量

如表3所示，不同地區(qū)不同成熟度青梅中，有機(jī)酸含量最高的是景市鎮(zhèn)全熟黃果中的檸檬酸，為19.546%；其次是百節(jié)趙家全熟黃果中的蘋(píng)果酸，為4.013%；草酸、L-乳酸、乙酸、酒石酸、丁二酸、齊墩果酸含量相對(duì)較少，抗壞血酸、熊果酸含量極少。翟煥趁等[9]用高效液相色譜法對(duì)福建青梅中有機(jī)酸含量進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)青梅中有機(jī)酸含量最高的是檸檬酸，為4.83%，其次是蘋(píng)果酸，為0.67%。達(dá)州青梅和福建青梅相比，達(dá)州青梅中檸檬酸、蘋(píng)果酸的含量較高，可能是由產(chǎn)地和(或)成熟度不同導(dǎo)致。

圖1 有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品和青梅樣品HPLC圖譜Figure 1 HPLC spectra of organic acid standards and Prunus mume samples

2.4 相關(guān)性

如表4所示，齊墩果酸與熊果酸呈極顯著正相關(guān)；L-乳酸與乙酸、檸檬酸呈顯著正相關(guān)，與丁二酸呈極顯著正相關(guān)；乙酸與檸檬酸呈顯著正相關(guān)；檸檬酸與齊墩果酸、熊果酸呈顯著正相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)酸會(huì)隨著熟度的不同呈上升下降趨勢(shì)[14-15]，其代謝也與多種酶有關(guān)[16]。

3 結(jié)論

對(duì)四川達(dá)州不同地區(qū)不同成熟度的青梅中10種有機(jī)酸含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10種有機(jī)酸中含量最高的是檸檬酸，為19.546%，其次是蘋(píng)果酸，為4.013%，比其他產(chǎn)區(qū)青梅[9]的分析結(jié)果高。四川達(dá)州有“中國(guó)的烏梅之鄉(xiāng)”之美稱(chēng)，但因?yàn)檫_(dá)州對(duì)鮮果轉(zhuǎn)化成品條件不足，對(duì)青梅中有機(jī)酸等功效成分的研究比較缺乏，因此有必要對(duì)達(dá)州青梅的功效成分等進(jìn)行深入研究，為產(chǎn)品深加工提供依據(jù)。

表2 10種有機(jī)酸的出峰時(shí)間、回歸方程、線(xiàn)性范圍

表3 青梅中10種有機(jī)酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)?

續(xù)表3

表4 相關(guān)性分析?