謝璐娜 福建省龍巖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 福建龍巖 364000

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS），是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的高度接觸性傳染病，其主要表現(xiàn)為母豬的繁殖能力下降，出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)等癥狀，以及生長(zhǎng)育肥豬出現(xiàn)耳部發(fā)紫、呼吸困難等臨床癥狀。該病發(fā)病率及病死率高，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1994 年， 全球第一個(gè)商品化豬藍(lán)耳病疫苗問(wèn)世。 目前世界上商品化PRRS 疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗兩類。

滅活疫苗是無(wú)毒力的獲得病原微生物。 滅活疫苗比較安全， 免疫保護(hù)時(shí)間較長(zhǎng)。 缺點(diǎn)是保護(hù)力不強(qiáng)，誘導(dǎo)有效免疫力的能力差，抗體產(chǎn)生速度慢。 而弱毒活疫苗為低毒力的活的病原微生物。 接種弱毒活疫苗后，病原微生物在體內(nèi)復(fù)制、增殖進(jìn)而刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體， 弱毒活疫苗既可以刺激機(jī)體的細(xì)胞免疫，又可以刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，其刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體速度快， 保護(hù)力強(qiáng)。 弱毒活疫苗可以幾乎完全保護(hù)同源病毒株的攻擊， 對(duì)同個(gè)基因型異源病毒株的攻擊也能提供部分保護(hù)。既往研究表明，弱毒活疫苗可以明顯減輕同基因型異源病毒株攻擊后產(chǎn)生的臨床癥狀（如高熱、肺部病理改變減輕，促進(jìn)豬的體重增加），但不能抑制病毒感染[1]。 攻毒試驗(yàn)表明，免疫弱毒活疫苗后可明顯降低病毒血癥的持續(xù)時(shí)間和病毒滴度，種豬精液排毒減少[2-3]。 與滅活疫苗相比，弱毒活疫苗安全性是其使用的最大問(wèn)題。 研究者發(fā)現(xiàn)弱毒活疫苗免疫良好的農(nóng)場(chǎng)仍可發(fā)生嚴(yán)重的PRRS 暴發(fā)[4]。 弱毒活疫苗存在返強(qiáng)的可能，能夠向外擴(kuò)散病毒，也容易出現(xiàn)疫苗株變異和重組。 因此，目前弱毒活疫苗并不能完全有效控制和消滅藍(lán)耳病。 藍(lán)耳病免疫防控過(guò)程中困難重重， 現(xiàn)對(duì)該病面臨的免疫挑戰(zhàn)進(jìn)行簡(jiǎn)要概述，僅供參考。

1 豬藍(lán)耳病病毒的多樣性與變異性

豬藍(lán)耳病病毒主要有兩個(gè)基因型：基因1 型（也稱為歐洲型）和基因2 型（也稱為北美洲型）。這兩個(gè)基因型的全基因組有大約60%的相似性，兩者之間存在顯著的抗原差異性[5]。 豬藍(lán)耳病病毒具有廣泛的變異性和毒株的多樣性， 不同毒株之間在毒力和致病性上有明顯的差異。 目前關(guān)于遺傳相似性的研究主要集中在該病毒的開(kāi)放讀碼框5（ORF5）上。 豬藍(lán)耳病病毒在外界環(huán)境條件的影響和免疫壓力下，ORF5 極易發(fā)生變異， 目前報(bào)道的2 型病毒就有超過(guò)13 000 種ORF5 序列。 更重要的是，目前兩個(gè)基因型的病毒株仍在不斷發(fā)生變異， 其多樣性仍在增加。 2006 年， 我國(guó)出現(xiàn)2 型高致病性毒株 (HPPRRSV)，使我國(guó)多個(gè)省暴發(fā)嚴(yán)重的豬疫情，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。高致病性毒株在致病性、遺傳多樣性方面均發(fā)生了很大的變化， 雖然之后開(kāi)發(fā)了相應(yīng)的商品化疫苗， 但一直未能改變我國(guó)PRRSV 廣泛流行和發(fā)病的現(xiàn)狀，且新的變異毒株還在不斷出現(xiàn)。

2 免疫逃逸

感染PRRSV 的豬表現(xiàn)為急性感染期和持續(xù)感染狀態(tài)，該病毒具有多種免疫抑制和免疫逃逸策略，因而該病也被認(rèn)為是一種免疫抑制性疾病。 首先，PRRSV 可以通過(guò)抑制I 型干擾素的分泌及信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制先天性免疫。 在體液免疫方面，PRRSV可以選擇性抑制和延遲宿主中和抗體的產(chǎn)生。PRRSV 對(duì)應(yīng)的中和抗體往往要在病毒感染一個(gè)月后才會(huì)出現(xiàn)[6]。 此外，PRRSV 還能抑制細(xì)胞免疫。 外周血中IFNγ 分泌細(xì)胞（IFN-γ-SC）的變化特征可用于監(jiān)測(cè)PRRS 特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答狀態(tài)。 以往研究發(fā)現(xiàn)，PRRSV 感染或免疫8～10 周后才能檢測(cè)到IFN-γ-SC 細(xì)胞，與其他豬的病毒相比顯得更緩慢[7]。

3 對(duì)機(jī)體的免疫保護(hù)機(jī)制認(rèn)識(shí)不完全

大多數(shù)豬在感染5～6 個(gè)月后可以清除體內(nèi)的PRRSV[8]，說(shuō)明豬的免疫系統(tǒng)可以對(duì)病毒感染和其導(dǎo)致的疾病起保護(hù)作用。研究顯示，體液免疫和細(xì)胞免疫都參與了豬體的免疫保護(hù)。 豬接觸PRRSV 后，產(chǎn)生一系列的特異性抗體， 首次感染后有助于避免再次感染。但是產(chǎn)生的抗體中，起中和作用的抗體產(chǎn)生速度慢、滴度低，并且存在抗體依賴性增強(qiáng)作用，使PRRSV 呈現(xiàn)長(zhǎng)期的持續(xù)性感染， 說(shuō)明體液免疫的保護(hù)作用并不完全[9]。

經(jīng)疫苗免疫接種后的豬， 在不產(chǎn)生中和抗體的情況下，仍能對(duì)攻毒產(chǎn)生保護(hù)作用，說(shuō)明細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)可能對(duì)PRRSV 起到很重要的保護(hù)作用。有假設(shè)認(rèn)為，對(duì)細(xì)胞免疫效果有重要影響的是T 細(xì)胞的質(zhì)量而不是其數(shù)量[1]。 但是疫苗免疫后是哪種分型的T 細(xì)胞起作用， 以及其作用機(jī)制尚不清楚。此外， 每一個(gè)PRRSV 的結(jié)構(gòu)蛋白在病毒的感染和免疫原性等作用不同[10-11]，目前對(duì)不同結(jié)構(gòu)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的認(rèn)識(shí)仍不完全。

4 缺乏有效的疫苗評(píng)價(jià)體系， 免疫效果評(píng)價(jià)指標(biāo)難以確定

由于PRRSV 基因的多樣性和高突變性， 因此在疫苗開(kāi)發(fā)時(shí)能產(chǎn)生免疫保護(hù)的病毒株的種類和數(shù)量的選擇十分重要。 早期研究曾使用疫苗毒株和動(dòng)物感染毒株間ORF5 序列的相似性來(lái)預(yù)測(cè)疫苗的保護(hù)效果[12]。但是，多大的基因相似度可以起保護(hù)作用目前尚無(wú)定論。此外，疫苗對(duì)相同毒株或者相近毒株的免疫保護(hù)并不是完全的， 同源保護(hù)的效果仍需更多研究。

常用的抗體監(jiān)測(cè)不能對(duì)豬藍(lán)耳病疫苗的保護(hù)效果作出準(zhǔn)確評(píng)估。一般在豬藍(lán)耳病疫苗免疫14 d 后可以檢測(cè)到豬藍(lán)耳病抗體， 但此時(shí)的抗體不是中和抗體，與保護(hù)率無(wú)相關(guān)性，且中和抗體的檢測(cè)費(fèi)時(shí)費(fèi)力。 目前豬藍(lán)耳病疫苗最有效的評(píng)價(jià)方法是通過(guò)免疫攻毒效力檢驗(yàn)試驗(yàn)評(píng)估的。 此外，PRRSV 的含量與免疫攻毒保護(hù)之間為正相關(guān)關(guān)系，因此，病毒含量測(cè)定可以作為疫苗攻毒效力檢驗(yàn)方法的替代方法。然而無(wú)論是病毒含量測(cè)定，還是免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)，在我國(guó)大規(guī)模存在的中小企業(yè)中都無(wú)法進(jìn)行相應(yīng)評(píng)估，疫苗的實(shí)際使用效果難以評(píng)價(jià)，大大阻礙了疫苗的研發(fā)。

總之，由于PRRSV 特殊的免疫學(xué)特征，給疫苗研制帶來(lái)了很大的困難。 我們迫切需要開(kāi)發(fā)更加安全有效、免疫譜更廣的疫苗。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展以及對(duì)PRRSV 基因結(jié)構(gòu)的不斷了解， 使基因工程疫苗的研發(fā)成為可能。 近年來(lái)，嵌合病毒疫苗、DNA疫苗和亞單位疫苗的研究工作逐漸增加并深入，為研究PRRS 疫苗開(kāi)辟了新天地。