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        血清lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的關(guān)聯(lián)性研究

        2021-12-02 00:29:46周志衡黃志杰陳寶欣張雪姣陳文如
        中國臨床新醫(yī)學(xué) 2021年10期
        關(guān)鍵詞:高血壓血清標(biāo)準(zhǔn)

        周志衡, 黃志杰, 陳寶欣, 張雪姣, 陳文如

        目前,我國居民原發(fā)性高血壓病的發(fā)病率有逐年增高的趨勢。流行病調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,我國18歲及以上居民原發(fā)性高血壓病患病率從1980年的7.7%上升至2018年的25.2%,現(xiàn)存患者數(shù)超過2.7億[1-2]。高血壓病已經(jīng)成為主要公共衛(wèi)生問題之一[3],國內(nèi)外學(xué)者對高血壓的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制進(jìn)行了廣泛而深入的研究。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是近年來在慢性病領(lǐng)域研究的熱點(diǎn),其與許多疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后具有關(guān)聯(lián)。有研究顯示,lncRNA TUG1、lncRNA H19、lncRNA AK098656和lncRNA MALAT1等在血管重構(gòu)、誘發(fā)血管外周壓力增大、調(diào)節(jié)血管生成和血管疾病神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方面具有重要的調(diào)節(jié)作用[4-7]。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-ENST00000414355具有調(diào)控細(xì)胞的DNA損傷與修復(fù)的功能[8],但其在高血壓中的作用還未有報道。鑒此,本研究旨在探討人血清lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的關(guān)聯(lián)性,現(xiàn)報道如下。

        1 對象與方法

        1.1研究對象 選擇2019年7月至2019年11月深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院收治的原發(fā)性高血壓患者360例(觀察組)。根據(jù)觀察組性別、年齡、籍貫、經(jīng)濟(jì)收入情況,按照1∶1配對原則選取同期于深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院接受體檢的健康者360名(對照組)。兩組一般情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。所有研究對象的血液標(biāo)本及信息收集均獲得患者的知情同意。

        表1 兩組一般情況比較

        1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

        1.2.1 觀察組納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《中國高血壓防治指南(2018年修訂版)》[9]中關(guān)于原發(fā)性高血壓病的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)新發(fā)高血壓患者,未服用過降壓藥;(3)年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)繼發(fā)性高血壓患者;(2)未能完成問卷調(diào)查和本次體檢相關(guān)項目者。

        1.2.2 對照組納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡≥18歲;(2)既往無高血壓病史,且經(jīng)雙臂3次測量血壓值均符合收縮壓<140 mmHg和舒張壓<90 mmHg。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并惡性腫瘤、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病或自身免疫性疾病者;(2)合并精神病史或有精神病家族史者;(3)合并嚴(yán)重的心、肝、腎臟疾病者;(4)近期有感染或其他重大疾病史者。

        1.3資料收集及相關(guān)判斷標(biāo)準(zhǔn) 通過問卷方式收集研究對象的年齡、性別、職業(yè)、既往病史、服藥史、吸煙、飲酒等情況。測量研究對象的血壓值、體質(zhì)量指數(shù)(Body Mass Index,BMI)等一般指標(biāo)。以截止至受調(diào)查當(dāng)天,在調(diào)查前30 d內(nèi)吸過煙,而且連續(xù)或累積吸煙6個月或以上者,則定義為有吸煙行為。以每周至少飲酒1次定義為有飲酒行為。以每周運(yùn)動3次及以上,平均每次運(yùn)動超過30 min定義為定期鍛煉。

        1.4生化指標(biāo)檢測 于清晨采集受試者空腹肘部靜脈血約3 ml。采用全自動生化分析儀(型號:7600-020,ISE),血脂生化檢測試劑盒(博奧生物)檢測總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、血糖。

        1.5lncRNA-ENST00000414355水平檢測 采用含抗凝劑的紫色采血管采集5 ml靜脈血,4 ℃靜置30 min,室溫下3 000 r/min離心15 min,取上層血清,-80 ℃保存?zhèn)溆?。檢測時,解凍樣本,以Trizol法提取樣本總RNA,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Fermentas K1622,Thermo Scientific公司)將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。應(yīng)用實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)法檢測lncRNA-ENST00000414355水平,操作方法嚴(yán)格按照RT-qPCR試劑盒(Promega,美國)說明書進(jìn)行。所用引物由上海生工公司合成,序列見表2。以β-actin為內(nèi)參,采用2-△△Ct法計算其相對表達(dá)水平。

        表2 引物序列

        2 結(jié)果

        2.1兩組生活行為及臨床生化指標(biāo)比較 兩組飲酒、定期鍛煉、糖尿病史情況,以及空腹血糖、TG、HDL水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。觀察組吸煙人數(shù)比例,以及BMI、TC、LDL水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

        表3 兩組生活行為及臨床生化指標(biāo)比較

        2.2兩組血清lncRNA-ENST00000414355的表達(dá)水平比較 RT-qPCR檢測結(jié)果顯示,觀察組血清lncRNA-ENST00000414355的相對表達(dá)量高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義[(7.15±0.87) vs (1.15±0.45);t=116.518,P=0.000]。

        2.3影響原發(fā)性高血壓發(fā)生的多因素logistic回歸分析結(jié)果 以是否患有原發(fā)性高血壓病為因變量(1=是,0=否),將上述有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)[吸煙(1=有,0=無)、BMI、TC、LDL、lncRNA-ENST00000414355]作為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析,結(jié)果顯示,有吸煙行為、較高水平的BMI、TC和lncRNA-ENST00000414355是促進(jìn)原發(fā)性高血壓發(fā)生的危險因素(P<0.05)。見表4。

        表4 影響原發(fā)性高血壓發(fā)生的多因素logistic回歸分析結(jié)果

        2.4血清lncRNA-ENST00000414355與相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,血清lncRNA-ENST00000414355水平與收縮壓、舒張壓、BMI、TC及LDL呈正相關(guān)(P<0.05)。見表5。

        表5 血清lncRNA-ENST00000414355與相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果

        3 討論

        3.1目前,高血壓病已經(jīng)成為我國最常見的慢性病之一,引起了各地醫(yī)療機(jī)構(gòu)和學(xué)者的重點(diǎn)關(guān)注?!敖】抵袊毙难芗膊》乐涡袆用鞔_提出,到2030年,我國30歲及以上居民的高血壓知曉率應(yīng)不低于65%,高血壓患者的規(guī)范管理率不低于70%,高血壓治療率和控制率應(yīng)持續(xù)提高[10]。并希望通過全社會的努力,做到人人知曉個人血壓、控制高血壓危險因素、自我血壓管理、注重合理膳食和酌情量力運(yùn)動等。而“健康中國”行動計劃中,有11項行動與高血壓的防治相關(guān)[11]。

        3.2近年來,國內(nèi)外學(xué)者對與高血壓發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物進(jìn)行了廣泛的研究。其中,lncRNA與高血壓的關(guān)聯(lián)性研究越來越受到重視[12]。lncRNA是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200 nt的RNA分子,可調(diào)控多種生物學(xué)過程,并與一些疾病的發(fā)生、發(fā)展具有關(guān)聯(lián),可作為疾病診斷、治療和預(yù)測預(yù)后的標(biāo)志物[13-14]。Bayoglu等[15]的研究利用微陣列方法對自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)和健康大鼠心臟組織的基因表達(dá)情況進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)在991個lncRNA中有145個的表達(dá)具有顯著差異,其中93個表達(dá)上調(diào),52個表達(dá)下調(diào);而基因富集分析顯示lncRNA CD-KN2B-AS1多態(tài)性可能導(dǎo)致高血壓患者的收縮壓增高。lncRNA可能參與了高血壓病的發(fā)生、發(fā)展,但其具體機(jī)制還有待闡明[4,16]。

        3.3lncRNA-ENST00000414355是在第9號染色體上的非編碼RNA,位于第44021071位點(diǎn)到第44021414位點(diǎn),全長343 nt。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-ENST00000414355在鎘毒性中具有多種調(diào)控功能,參與了細(xì)胞的DNA損傷、增殖和凋亡等生物學(xué)過程,并具有調(diào)控DNA損傷基因(ATM、ATR、ATRIP)和修復(fù)基因(DDB1、DDB2、OGG1、ERCC1、MSH2、RAD50、XRCC1和BARD1)表達(dá)水平的功能,這在大鼠動物模型和職業(yè)人群中得到了進(jìn)一步驗證[8]。但其在高血壓疾病中的作用仍未明確,鑒此,本研究對lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行了探討。結(jié)果顯示,較高水平的lncRNA-ENST00000414355是促進(jìn)原發(fā)性高血壓發(fā)生的危險因素,且血清lncRNA-ENST00000414355與收縮壓、舒張壓呈正相關(guān)。提示lncRNA-ENST00000414355參與了原發(fā)性高血壓病的發(fā)生、發(fā)展過程。有研究顯示,lncLSTR、lncRNA-DYNLRB2-2、lncRNA Lexis、lncRNA HULC和lnc-HC與血脂代謝相關(guān)[17-20]。本研究結(jié)果也顯示,血清lncRNA-ENST00000414355與BMI、TC及LDL呈正相關(guān)。

        綜上所述,lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的發(fā)生具有關(guān)聯(lián)性。但其與原發(fā)性高血壓病的發(fā)展、預(yù)后的關(guān)系,以及對高血壓調(diào)控功能的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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